To complete the
-carotene biosynth

To complete the
-carotene biosynthetic pathway, cotransformations
were carried out employing two vectors, one
(pZPsC) carrying psy and crtI, like in pB19hpc but lacking the
expression cassette for the selectable marker aphIV, and the
other (pZCycH) providing, under glutelin promoter control,
the sequence coding for the enzyme lycopene
-cyclase, originating
from N. pseudonarcissus (accession no. X98796) (7).
Like phytoene synthase, lycopene
-cyclase carried a functional
transit peptide, allowing plastid-import (5). The combination
of both plasmids, thus, should be able to direct

-carotene formation in rice endosperm.
A total of 800 precultured rice immature embryos were
inoculated with Agrobacterium LBA 4404/pB19hpc. Fifty hygromycin-resistant
plants then were analyzed by Southern
hybridization analysis (data not shown). All tested lines carried
the transgenes and most of the plants showed single
insertions, but in some cases multiple insertions were observed.
For cotransformation, 500 precultured immature embryos
were inoculated with an Agrobacterium mixture of LBA4404/
pZPsC carrying the psy and crtI genes and LBA4404/pZCycH
containing lcy together with aph IV as the selectable marker.
Cotransformed plants were identified by Southern hybridization.
All 60 randomly selected regenerated lines were positive
for lcy, among which 12 plants were cotransformed with
pZPsC. Like the transformation above, 1–3 transgene copies
were predominant in cotransformed plants. Ten plants harboring
all four introduced genes were transferred into the greenhouse
for setting seeds. All plants from all transformations
described here showed a normal phenotype as well as normal
fertility.
Mature F0 seeds from transformed lines and from control
plants were air dried, dehusked and, to isolate the endosperm,
polished with emery paper for 8 h on a shaker. In most cases
the transformed endosperms exhibited a clearly notable yellow
color, indicating carotenoid formation.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สมบูรณ์แคโรทีน biosynthetic ทางเดิน cotransformationsได้ดำเนินการใช้เวกเตอร์สอง หนึ่งม.จว.ถือครอง (pZPsC) และ crtI เช่น pB19hpc แต่ขาดการเทปนิพจน์สำหรับ aphIV เครื่องหมายที่เลือก และอื่น ๆ (pZCycH) ให้ glutelin โปรโมเตอร์ควบคุมรหัสลำดับสำหรับ lycopene เอนไซม์-cyclase เกิดจาก pseudonarcissus ตอนเหนือ (ทะเบียนไม่ X 98796) (7)เช่น phytoene synthase, lycopene-cyclase ทำการทำงานขนเพปไทด์ อนุญาตให้นำเข้าพลาสติด (5) การรวมกันของทั้ง plasmids ดังนั้น น่าจะตรง-แคโรทีนก่อในเอนโดสเปิร์มข้าวจำนวน 800 precultured ข้าว immature โคลนได้inoculated มี LBA อโกรแบคทีเรียม 4404/pB19hpc ห้าสิบ hygromycin ทนพืชแล้วถูกวิเคราะห์ โดยภาคใต้วิเคราะห์ hybridization (ข้อมูลไม่แสดง) รายการทั้งหมดผ่านการทดสอบที่ดำเนินการtransgenes การและส่วนใหญ่ของพืชได้แสดงเดี่ยวแทรก แต่ในบางกรณีการแทรกหลายสุภัคสำหรับ cotransformation โคลน immature precultured 500มี inoculated ด้วยการผสมผสานระหว่างอโกรแบคทีเรียม LBA4404 /โดยยีนม.จว.และ crtI และ LBA4404/pZCycH pZPsCประกอบด้วย lcy กับ aph IV เป็นเครื่องหมายที่เลือกCotransformed พืชที่ระบุ โดย hybridization ภาคใต้ทั้งหมด 60 บรรทัด regenerated เลือกสุ่มได้ค่าบวกสำหรับ lcy หมู่ที่ 12 พืชได้ cotransformed ด้วยpZPsC เช่นการแปลงข้างต้น สำเนา transgene 1 – 3ถูกกันในพืช cotransformed พืชสิบ harboringมีการถ่ายโอนทั้งหมดสี่นำยีนเข้าไปในเรือนกระจกสำหรับการตั้งค่าเมล็ดพันธุ์ พืชทั้งหมดจากแปลงทั้งหมดอธิบายไว้ที่นี่พบกับ phenotype ปกติเป็นปกติความอุดมสมบูรณ์เมล็ด F0 ผู้ใหญ่ จากบรรทัดการแปรรูป และการควบคุมพืชที่มีอากาศแห้ง dehusked และ แยกเอนโดสเปิร์มขัด ด้วยกระดาษกากกะรุนสำหรับ h 8 ในการเชคเกอร์ ในกรณีส่วนใหญ่endosperms แปรรูปจัดแสดงสีเหลืองโดดเด่นชัดเจนสี carotenoid ก่อตัวบ่งชี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ให้เสร็จสมบูรณ์หรือไม่แคโรทีนเดินชีวสังเคราะห์, cotransformations
ได้ดำเนินการจ้างสองเวกเตอร์หนึ่ง
(pZPsC) แบก psy และ crtI เหมือนใน pB19hpc
แต่ขาดเทปการแสดงออกสำหรับเครื่องหมายเลือกaphIV
และอื่นๆ (pZCycH) การให้บริการภายใต้ glutelin
ควบคุมก่อการลำดับการเข้ารหัสสำหรับเอนไซม์ไลโคปีน? -cyclase
ที่มีต้นกำเนิดจากเอ็นpseudonarcissus (ภาคยานุวัติไม่มี. X98796) (7).
เช่นเดียวกับเทส phytoene, ไลโคปีน? -cyclase
ดำเนินการทำงานเปปไทด์การขนส่งที่ช่วยให้plastid นำเข้า (5) . การรวมกันของทั้งพลาสมิดจึงควรจะสามารถที่จะนำ? แคโรทีนในการก่อ endosperm ข้าว. รวม 800 precultured ข้าวอ่อนตัวอ่อนที่ได้รับเชื้อด้วยAgrobacterium LBA 4404 / pB19hpc ห้าสิบไฮโกรทนพืชแล้วนำมาวิเคราะห์โดยภาคใต้วิเคราะห์การผสมพันธุ์(ไม่ได้แสดงข้อมูล) สายการทดสอบทั้งหมดดำเนินtransgenes และส่วนใหญ่ของพืชที่แสดงให้เห็นเดียวแทรกแต่ในบางกรณีการแทรกหลายพบ. สำหรับ cotransformation 500 precultured ตัวอ่อนที่ยังไม่บรรลุนิติภาวะถูกเชื้อที่มีส่วนผสมAgrobacterium ของ LBA4404 / pZPsC ถือยีน psy และ crtI และ LBA4404 / pZCycH มี LCY ร่วมกับ Aph IV เป็นเครื่องหมายเลือก. พืช Cotransformed ถูกระบุโดยการผสมข้ามพันธุ์ภาคใต้. ทั้งหมด 60 สายการสุ่มเลือกสร้างใหม่เป็นบวกสำหรับLCY หมู่ที่ 12 พืช cotransformed กับpZPsC เช่นเดียวกับการเปลี่ยนแปลงดังกล่าวข้างต้น 1-3 สำเนายีนเป็นที่โดดเด่นในพืชcotransformed สิบพืชเก็บงำทั้งสี่ได้รับการแนะนำให้รู้จักกับยีนที่โอนเข้ามาในเรือนกระจกสำหรับการตั้งค่าเมล็ดพันธุ์ พืชทั้งหมดจากแปลงทั้งหมดอธิบายไว้ที่นี่แสดงให้เห็นว่าฟีโนไทป์ปกติเช่นเดียวกับปกติความอุดมสมบูรณ์. ผู้ใหญ่เมล็ด F0 จากสายและเปลี่ยนจากการควบคุมของพืชอากาศแห้งdehusked และเพื่อแยก endosperm ที่ขัดด้วยกระดาษกากกะรุนเป็นเวลา8 ชั่วโมงในเครื่องปั่น ในกรณีส่วนใหญ่endosperms เปลี่ยนสีเหลืองแสดงที่โดดเด่นอย่างเห็นได้ชัดสีแสดงให้เห็นการก่อcarotenoid

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อให้
- แคโรทีน ลุงแซมทางเดิน , cotransformations
ทดลองใช้เวกเตอร์ทั้งสอง หนึ่ง
( pzpsc ) และแบก PSY crti เหมือนใน pb19hpc แต่ขาดการแสดงออกเทปสำหรับ aphiv เครื่องหมาย

เลือก , และอื่น ๆ ( pzcych ) ให้ ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์กลูเทลิน
, ลำดับการเข้ารหัสสำหรับเอนไซม์ ไลโคปีน
- ไซเคลส ที่เกิดจากการไม่ pseudonarcissus (
)x98796 ) ( 7 ) .
ชอบไพโตนซินเตสไลโคปีน
, - ไซเคลสนำเปปไทด์
ส่งต่อหน้าที่ให้พลาสติกนำเข้า ( 5 ) การรวมกัน
ทั้งพลาสจึงควรจะโดยตรง

- แคโรทีน ก่อตัวในข้าว endosperm .
รวม 800 1949 ข้าวเอ็มบริโออ่อนเป็นเชื้อ Agrobacterium LBA 4404 ด้วย
/ pb19hpc . ห้าสิบยีนต้านยา hygromycin ที่ทนพืช แล้วนำมาวิเคราะห์ด้วย

ภาคใต้การวิเคราะห์สาร ( ข้อมูลไม่แสดง ) ทั้งหมดทดสอบสายอุ้ม
transgenes และส่วนใหญ่ของพืชพบใหม่เดียว
, แต่ในบางกรณีหลายครั้งพบ .
สำหรับ cotransformation 500 1949 เอ็มบริโออ่อน
ปลูกเชื้อ Agrobacterium เป็นส่วนผสมของ LBA4404 /
pzpsc แบก PSY crti และยีนและ LBA4404 / pzcych
ที่มี lcy ด้วยกันกับ APH IV เป็นเครื่องหมายที่เลือก .
cotransformed พืชระบุได้ด้วยวิธี Southern hybridization .
ทั้งหมด 60 สุ่มได้เส้นบวก
สำหรับ lcy หมู่ที่ 12 พืช cotransformed ด้วย
pzpsc . ชอบการเปลี่ยนแปลงข้างต้น 1 – 3 ยีนชุด
ยังเด่นใน cotransformed พืช 10 ต้นไม้ที่
ทั้งหมดสี่แนะนำยีนถูกย้ายเข้าไปในเรือนกระจก
การเมล็ดพันธุ์ พืชทั้งหมดจากการแปลง
อธิบายที่นี่มีภาวะปกติ ตลอดจนความอุดมสมบูรณ์ปกติ
.
ผู้ใหญ่จากเมล็ดละเปลี่ยนเส้นและจากพืชควบคุม
ถูกอากาศแห้ง dehusked และการแยกหน่วยคำ
ขัดด้วยกระดาษทราย , 8 H ในเครื่องปั่น . ในกรณีส่วนใหญ่
เปลี่ยน endosperms แสดงชัดเจนเด่นสีแคโรทีนอยด์สีเหลือง

ซึ่งก่อตัว