which in tum will lead to reduction

which in tum will lead to reduction ofVLDL secretion and subsequent lowering ofLDL cholesterol. Moreover, scientific statement from the American Heart Association
10 supports therapeutic targeting of elevated triglycerides as means to reduce residual cardiovascular risk


(Miller, M. et al, Circulation (2011) 123:2292-2333. Inhibition of DGAT2 will lower circulating triglycerides and thus provide additional protection from cardiovascular events.


15 ไดเอซิลกลีเซอรอล Acyltransferase 2 (DGAT2) Biochemical Assay

The in vitro inhibitory activity of สารประกอบ against human DGAT2 is evaluated in this assay. The assay uses recombinant human DGAT2 with a FLAG tag at the amino terminus, expressed in genetically engineered insect SF9 cells, and purified through
affinity โครมาโทกราฟี.

20 DGAT2 catalyzes transfer of an acyl moiety from acyl-Coenzyme A onto ไดเอซิลกลีเซอรอล, to form triacylglycerol. In this particular embodiment of the assay oleate is used as the acyl moiety that is transferred. To facilitate miscibility of all lipid components, all lipids used in the assay contain oleyl moiety as the only acyl group.
Prior to starting the assay prepare a ของผสม of dioleoyl glycerol (DOG) and

25 dioleoyl phosphatidylcholine (DOPC) at 3 :7 molar ratio. Mix appropriate amount of DOPC and DOG dissolved in chloroform in a borosilicate glass test tube. Evaporate the solvent under stream of argon to form a film of lipid. Subsequently, place the test-tube under vacuum (

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตูมซึ่งจะนำไปสู่การลดการหลั่ง ofVLDL และ ofLDL ต่อมาลดคอเลสเตอร นอกจากนี้ รายงานทางวิทยาศาสตร์จากสมาคมหัวใจอเมริกัน10 รองรับรักษาเป้าหมายของไตรกลีเซอไรด์สูงเป็นการลดความเสี่ยงหลอดเลือดหัวใจที่เหลือ (มิลเลอร์ M. et al, 123:2292 ไหลเวียน (2011) -2333 ยับยั้งของ DGAT2 จะลดไตรกลีเซอไรด์ที่หมุนเวียน และทำ ให้การป้องกันเพิ่มเติมจากเหตุการณ์หัวใจ15 ไดเอซิลกลีเซอรอล Acyltransferase 2 (DGAT2) ทดสอบทางชีวเคมีประเมินกิจกรรม inhibitory ในหลอดทดลองของสารประกอบกับมนุษย์ DGAT2 ในการทดสอบนี้ ทดสอบการใช้ DGAT2 มนุษย์ recombinant ด้วยแท็กธงที่สถานีอะมิโน แสดงในเซลล์ SF9 แมลงพันธุวิศวกรรม และบริสุทธิ์ผ่านโครมาโทกราฟีความสัมพันธ์20 DGAT2 catalyzes moiety acyl การโอนย้ายจาก acyl Coenzyme A บนไดเอซิลกลีเซอรอล แบบ triacylglycerol ในศูนย์รวมของการทดสอบเฉพาะ oleate ใช้เป็น moiety acyl ที่โอนย้าย เพื่ออำนวยความสะดวก miscibility ประกอบไขมันทั้งหมด ไขมันทั้งหมดที่ใช้ในการทดสอบประกอบด้วย oleyl moiety เป็นกลุ่ม acyl เท่านั้นก่อนเริ่มการทดสอบเตรียมของผสมของกลีเซอร dioleoyl (สุนัข) และ25 dioleoyl phosphatidylcholine (DOPC) ที่อัตราส่วนสบ 3:7 ผสม DOPC และสุนัขที่ละลายในคลอโรฟอร์มในหลอดทดสอบแก้ว borosilicate จำนวนที่เหมาะสม ระเหยตัวทำละลายภายใต้กระแสของอาร์กอนแบบฟิล์มของไขมัน ต่อมา สถานการ test-tube ภายใต้สุญญากาศ (< ธอร์ 1) สำหรับ 2 ชั่วโมงเพื่อเอาตัวทำละลายตกค้าง เพิ่มจำนวนเงินที่เหมาะสมของบัฟเฟอร์ที่ประกอบด้วย TrisHCl (ค่า pH 7.5, 150 มม.), และซูโครส (250 มม.) เพื่อให้ได้ 20 มม.ความเข้มข้น 30 ของไขมันทั้งหมด มั่นใจสมบูรณ์สารแขวนลอยฟิล์มไขมัน โดย vortexing แข็งแรง เนื้อหาของหลอดใน sonicator เป็นอาบน้ำใต้ยืน sonicate วิญญาณ 20คลื่นเงื่อนไขจนกว่าสารแขวนลอยเปลี่ยนจากสีขุ่นการโปร่งแสง มั่นใจ ofliposomes แปลงเป็นอสุจิเล็ก unilamellar (SUVs)เตรียมสารประกอบทดสอบ โดยยุบมันและการเจือจางทีละครึ่งล็อกใน DMSO serially สำหรับแต่ละความเข้มข้น ทำ 10-fold ขั้นเจือจางของสารละลาย 5 สารประกอบใน DMSO บัฟเฟอร์ที่ประกอบด้วย TrisHCl (ค่า pH 7.5, 150 มม.), และซูโครส (250 มม.)รถ SUV ผสม สารแขวนลอยs และสารประกอบสารละลายกับส่วนประกอบอื่น ๆ ของการทดสอบเพื่อให้ได้ความเข้มข้นของส่วนผสมแต่ละต่อไปนี้: TrisHCl (ค่า pH 7.5, 150 มม.), ซูโครส (250 มม.) MgCh (5 mM,), dithiothreitol (DTT) (0.5 มม.) oleoylcoenzyme A (oleoyl-CoA) (12 µM) 10, oleoyl l - 14C coenzyme A (oleyl CoA - 14C) (8 µM), กลีเซอร dioleoyl (สุนัข) (0.6 มม.), และ dioleoyl phosphatidylcholine (DOPC) (1.4 mM), โปรตีน DGAT2 (0.5 นาโนเมตร), DMSO (1%, v/v), มีการทดสอบความเข้มข้นของสารประกอบภายในเป็น 1 nM ถึง 100 µM ช่วง 30 µl รวมเสียง ฟักปฏิกิริยา 1 ชั่วโมงที่ RT (ประมาณ 21 ° C) ในบ่อแต่ละจานด้วย 384 หลังจาก 1 ชม. หยุดปฏิกิริยา15 โดยการเพิ่มสารละลายหยุด µl 23 ประกอบด้วยน้ำ oflsopropanol:EtOH:Heptane:DI ของผสม: 1 NNaOH (59:12.5:15:11:2.5 ปริมาณ) เพิ่ม µL 42 Microscint E แล้ว ฟักของผสมค้างคืนเพื่อแยกไตรกลีเซอไรด์ประกอบด้วย scintillant ชั้นตัวทำละลายอินทรีย์ วัดภัยใช้เครื่อง TopCount เพอร์กินเอลเมอ สร้างวัดเบื้องหลังสำหรับปฏิกิริยาข้างต้นซ้ำขั้นตอน 20 โดยที่รวมถึงเอนไซม์หรือสารประกอบทดสอบในของผสมปฏิกิริยาคำนวณระดับการยับยั้งของ DGAT2 โดยวัดภัยที่ 10 ความเข้มข้นแตกต่างกันสำหรับแต่ละสารประกอบ กำหนด IC50 สำหรับแต่ละสารประกอบที่ใช้พารามิเตอร์โลจิสติก 4 โค้งที่พอดี เรขาคณิตสำหรับคำนวณค่า IC50 สำหรับตัวอย่าง 1 และ 2 แสดงอยู่ในตารางที่ 1 ข้อมูลที่แสดงในตารางที่ 1 แสดงให้เห็นว่า25 ตัวอย่าง 1 และ 2 ยับยั้ง DGAT2 มนุษย์ในการทดสอบในหลอดทดลองบัฟเฟอร์ ตัวอย่าง ตารางที่ 1 ICso (µM) n =จำนวนการทดลอง1 0.091 (n = 19, sd = 0.066)2 0.12 (n = l3, sd = 0.076) X20112 ou ที่อยู่21n = numberof ทดลอง sd =ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานไดเอซิลกลีเซอรอล Acyltransferase 2 (DGAT2) ยึดตามเซลล์ทดสอบกิจกรรม inhibitory ของสารประกอบกับ DGAT2 มนุษย์ในสภาพแวดล้อมของเซลล์จะถูกประเมินในการทดสอบนี้ ทดสอบนี้ใช้เซลล์ไลน์มนุษย์ hepatoma5 HepG2 เป็นแหล่งของกิจกรรม acyltransferaseสายเซลล์ HepG2 เป็นแบบใช้สำหรับปฏิกิริยาเผาผลาญที่เกิดขึ้นในมนุษย์ hepatocytes ในสัตว์ทดลอง การสังเคราะห์ไตรกลีเซอไรด์ในบรรทัดนี้เซลล์ตามวัดรวมตัวกันของ isotopically ป้าย oleate เป็น triolein (เป็นไตรกลีเซอไรด์ด้วยoleoyl moieties)10 จ่ายเซลล์ HepG2 เข้าเครื่อง microplate 96 ดี ซึ่งมีการก่อนหน้านี้เคลือบ ด้วยโพลี-Dvlysine ที่มีปริมาณ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ซึ่ง Tum จะนำไปสู่การลดการหลั่ง ofVLDL และต่อมาลดคอเลสเตอรอล ofLDL นอกจากนี้ยังมีคำสั่งทางวิทยาศาสตร์จากสมาคมโรคหัวใจอเมริกัน
10 สนับสนุนการกำหนดเป้าหมายในการรักษาของไตรกลีเซอไรด์สูงเป็นวิธีการลดความเสี่ยงโรคหัวใจและหลอดเลือดที่เหลือ(มิลเลอร์, M. , et al, การไหลเวียนเลือด (2011) 123:. 2292-2333 ยับยั้งการ DGAT2 จะลดการไหลเวียนของไตรกลีเซอไรด์และทำให้ ให้ความคุ้มครองเพิ่มเติมจากการเกิดโรคหลอดเลือดหัวใจ. 15 ไดเอซิลกลีเซอรอล acyltransferase 2 (DGAT2) การทดสอบทางชีวเคมีในหลอดทดลองยับยั้งของสารประกอบกับ DGAT2 มนุษย์ได้รับการประเมินในการทดสอบนี้. การวิเคราะห์ใช้ DGAT2 มนุษย์ recombinant กับป้ายธง สถานีอะมิโนที่แสดงออกในการดัดแปลงพันธุกรรมแมลงเซลล์ SF9 และบริสุทธิ์ผ่านความสัมพันธ์โครมาโทกราฟี. 20 DGAT2 กระตุ้นการถ่ายโอนของครึ่ง acyl จาก acyl-Coenzyme บนไดเอซิลกลีเซอรอลในรูปแบบ triacylglycerol . ในศูนย์รวมนี้โดยเฉพาะของ oleate ทดสอบที่ใช้เป็นครึ่งหนึ่ง acyl ที่โอน. ในการอำนวยความสะดวกการผสมเข้ากันได้ขององค์ประกอบของไขมันทั้งหมดไขมันทั้งหมดที่ใช้ในการทดสอบมี oleyl ครึ่งหนึ่งเป็นกลุ่ม acyl เท่านั้น. ก่อนที่จะเริ่มการทดสอบเตรียมความพร้อมของ ผสมของ dioleoyl กลีเซอรอล (DOG) และ25 dioleoyl phosphatidylcholine (DOPC) ในอัตราส่วน 3: 7 กราม ผสมในปริมาณที่เหมาะสมของ DOPC และสุนัขละลายในคลอโรฟอร์มในหลอดทดลอง borosilicate แก้ว ตัวทำละลายระเหยภายใต้กระแสของอาร์กอนในรูปแบบภาพยนตร์ของไขมัน ต่อจากนั้นวางหลอดทดสอบภายใต้สุญญากาศ (<1 Torr) สำหรับ 2 ชั่วโมงเพื่อเอาตัวทำละลายที่เหลือ เพิ่มปริมาณที่เหมาะสมของบัฟเฟอร์ที่มี TrisHCl (pH 7.5 150 มิลลิเมตร) และซูโครส (250 มิลลิเมตร) เพื่อให้บรรลุ 20 มิลลิเมตร30 ความเข้มข้นของไขมันทั้งหมด ต้องแน่ใจว่าสารแขวนลอยที่สมบูรณ์แบบของภาพยนตร์เรื่องไขมันโดย vortexing แข็งแรง Sonicate เนื้อหาของท่อในอ่างน้ำคลื่นเสียงภายใต้ยืน20 สภาพคลื่นจนสารแขวนลอยจะเปลี่ยนจากการขุ่นโปร่งแสงเพื่อให้มั่นใจ ofliposomes การแปลงเป็นถุง unilamellar ขนาดเล็ก (SUVs) เตรียมความพร้อมการทดสอบสารประกอบโดยการละลายและเจือจางลำดับในครึ่ง เข้าสู่ระบบเพิ่มขึ้นทีละใน DMSO สำหรับแต่ละความเข้มข้นของการดำเนินการเจือจางขั้นตอนที่ 10 เท่าของ5 สารประกอบสารละลายใน DMSO ลงในบัฟเฟอร์ที่มี TrisHCl (pH 7.5 150 มิลลิเมตร) และซูโครส (250 มม.) ผสมเอสยูวีสารแขวนลอยและสารประกอบสารละลายที่มีส่วนประกอบอื่น ๆ ของการทดสอบเพื่อ บรรลุความเข้มข้นต่อไปนี้ของส่วนผสมแต่ละ TrisHCl (pH 7.5 150 มิลลิเมตร) ซูโครส (250 มิลลิเมตร) MgCh (5 มิลลิ), dithiothreitol (DTT) (0.5 มิลลิเมตร) oleoyl 10 Coenzyme A (oleoyl-CoA) (12 ไมครอน), L-14C oleoyl Coenzyme A (oleyl-CoA-14C) (8 ไมครอน), กลีเซอรอล dioleoyl (สุนัข) (0.6 มิลลิเมตร) และ dioleoyl phosphatidylcholine (DOPC) (1.4 มิลลิเมตร) DGAT2 โปรตีน (0.5 nM) DMSO (1% v / v) มีการทดสอบสารประกอบเข้มข้นในช่วง 1 นาโนเมตรถึง 100 ไมโครเมตรใน 30 ไมโครลิตรปริมาณรวม ฟักปฏิกิริยาเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ RT (ประมาณ 21 ° C) ในแต่ละหลุมของจาน 384 ดี หลังจาก 1 ชั่วโมงหยุดปฏิกิริยา15 โดยการเพิ่มหยุด 23 ไมโครลิตรสารละลายที่มีของผสม oflsopropanol: EtOH: heptane: น้ำ DI: 1 NNaOH (59: 12.5: 15: 11: 2.5 โดยปริมาตร) เพิ่ม 42 ไมโครลิตร Microscint E แล้วฟักไข่ของผสมข้ามคืนเพื่อดึงไตรกลีเซอไรด์ลงใน scintillant ชั้นตัวทำละลายอินทรีย์ที่มี วัดกัมมันตภาพรังสีโดยใช้เครื่องดนตรีเพอร์กินเอลเมอ TopCount สร้างวัดพื้นหลังสำหรับปฏิกิริยาโดยการทำซ้ำข้างต้น20 ขั้นตอน แต่ไม่มีที่รวมถึงเอนไซม์หรือการทดสอบสารประกอบในการทำปฏิกิริยาของผสม. คำนวณระดับของการยับยั้งการ DGAT2 โดยการวัดกัมมันตภาพรังสีที่ 10 ระดับความเข้มข้นที่แตกต่างกันสำหรับแต่ละสารประกอบ กำหนดค่า IC50 สำหรับแต่ละสารประกอบใช้ 4 พารามิเตอร์โค้งพอดีโลจิสติก ค่าเฉลี่ยเรขาคณิตสำหรับค่า IC50 คำนวณสำหรับตัวอย่างที่ 1 และ 2 มีการระบุไว้ในตารางที่ 1 ข้อมูลที่ระบุไว้ในตารางที่ 1 แสดงให้เห็นว่า25 ตัวอย่างทั้ง 1 และ 2 ยับยั้งมนุษย์ DGAT2 ในในหลอดทดลองทดสอบบัฟเฟอร์. ตัวอย่างตารางที่ 1 ICso (ไมครอน) n = จำนวนของการทดลอง1 0.091 (n = 19, SD = 0.066) 2 0.12 (n = L3, SD = 0.076) X20112 ภายใต้กฎระเบียบ21 การทดลอง n = จํานวน SD = ค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานไดเอซิลกลีเซอรอล acyltransferase 2 (DGAT2) เซลล์ที่ใช้ Assay กิจกรรมการยับยั้งของสารประกอบกับมนุษย์ DGAT2 ในสภาพแวดล้อมของเซลล์ได้รับการประเมินในการทดสอบนี้ การทดสอบนี้จะใช้ตับจากเซลล์มนุษย์สาย5 HepG2 เป็นแหล่งที่มาของกิจกรรม acyltransferase ได้. สายพันธุ์ของเซลล์ HepG2 เป็นรูปแบบที่ใช้กันทั่วไปสำหรับปฏิกิริยาการเผาผลาญที่เกิดขึ้นในเซลล์ตับในร่างกายมนุษย์ การสังเคราะห์ไตรกลีเซอไรด์ในสายพันธุ์ของเซลล์นี้จะตามด้วยการวัดรวมตัวกันของ oleate ที่มีป้ายกำกับ isotopically เข้า triolein (ไตรกลีเซอไรด์กับ 3 moieties oleoyl). 10 Dispense เซลล์ HepG2 ลงในไมโคร 96 หลุมซึ่งได้รับการเคลือบก่อนหน้านี้กับโพลี Dvlysine ใน จำนวน