Bovine oviductal epithelial cells w

Bovine oviductal epithelial cells were mechanically
isolated, by squeezing the oviducts between the thumb and
the index finger, and pooled inwarm Hanks buffered saline
solution. After two rounds of centrifugation for 5 minutes
at 971  g, the BOECs were easily distinguishable from the
overlaying erythrocytes. The supernatant was discarded,
and the BOECs were pipetted and resuspended in warm
and equilibrated (38,5 C, 5% CO2, 20% O2) culture medium
based on Dulbecco’s modified Eagle’s medium and Ham’s
F-12 nutrient mixture (1:1) and containing 0.75% BSA
(essentially fatty acid free; Sigma–Aldrich, St. Louis, MO,
USA), 5% serum (2.5% Fetal Bovine Serum; Greiner Bio-One,
Frickenhausen, Germany; and 2.5% Newborn Calf Serum;
Sigma–Aldrich), 2.5% penicillin–streptomycin, and 2%
amphotericin B. Cell count and cell viability testing were
performed with a Bürker Counting Chamber (W. Schreck,
Hofheim, Germany) and trypan blue. Bovine oviductal
epithelial cells were diluted to a density of 1 106 cells/mL
and seeded in three different culture systems as described
in the following. The culture mediumwas renewed after 24
hours and subsequently every 48 hours.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัว oviductal epithelial เซลล์มีกลไกแยก โดย squeezing ท่อนำไข่ระหว่างนิ้วหัวแม่มือ และนิ้ว และน้ำเกลือแฮงส์ buffered inwarm รวมการแก้ปัญหา หลังจากรอบสองของ centrifugation 5 นาทีที่ 971 g, BOECs ไม่ได้แตกต่างจากการปรากฏ erythrocytes Supernatant ถูกยกเลิกและ BOECs pipetted และ resuspended ในความอบอุ่นและ equilibrated (38,5 C, 5% CO2, 20% O2) สื่อวัฒนธรรมตามของดุลเบกโกแก้ไขอีเกิลของกลางและของแฮมF 12 ผสมธาตุอาหาร (1:1) และบีเอสเอ 0.75% ประกอบด้วย(เป็นกรดไขมันอิสระ ซิกมา-Aldrich, St. Louis, MOสหรัฐอเมริกา), เซรั่ม 5% (2.5% Serum วัวครรภ์ Greiner ไบหนึ่งFrickenhausen เยอรมนี และ 2.5% ทารก Calf SerumSigma–Aldrich), 2.5% ยาเพนนิซิลลิน – streptomycin และ 2%amphotericin เซลล์บีและเซลล์นี้ทดสอบดำเนินการกับการ Bürker นับหอ (ฝั่งตะวันตก SchreckHofheim เยอรมนี) และ trypan blue วัว oviductalเซลล์ epithelial ถูกผสมกับความหนาแน่นของเซลล์ 1 106 mLและ seeded ในสามระบบวัฒนธรรมที่แตกต่างกันดังที่ในต่อไปนี้ Mediumwas วัฒนธรรมต่ออายุหลังจาก 24ชั่วโมงและในเวลาต่อมาทุก 48 ชั่วโมง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โคเซลล์เยื่อบุผิวท่อนำไข่เป็นกลไกที่แยกด้วยการบีบท่อนำไข่ระหว่างนิ้วหัวแม่มือและที่นิ้วชี้และรวบรวมinwarm แฮงค์สบัฟเฟอร์น้ำเกลือวิธีการแก้ปัญหา หลังจากที่ทั้งสองรอบของการปั่นเป็นเวลา 5 นาทีที่971? กรัม BOECs มีความแตกต่างได้อย่างง่ายดายจากเม็ดเลือดแดงซ้อนทับ สารละลายที่ถูกทิ้งและ BOECs ถูกปิเปตและ resuspended ในที่อบอุ่นและequilibrated (38,5 ซี CO2 5%, 20% O2?) วัฒนธรรมกลางขึ้นอยู่กับDulbecco ของการปรับเปลี่ยนขนาดกลางของนกอินทรีและแฮมF-12 มีส่วนผสมของสารอาหาร (1: 1 ) และมี 0.75% บีเอสเอ(หลักกรดไขมันอิสระ Sigma-Aldrich เซนต์หลุยส์, MO, USA), เซรั่ม 5% (2.5% ของทารกในครรภ์โคเซรั่ม; Greiner Bio-One Frickenhausen เยอรมนีและ 2.5% ทารกแรกเกิดเซรั่มลูกวัว ; Sigma-Aldrich) ยา streptomycin-2.5% และ 2% amphotericin บีนับเซลล์และการทดสอบความมีชีวิตเซลล์ได้รับการดำเนินการกับBürkerหอการค้านับ(ดับบลิว Schreck, Hofheim, เยอรมนี) และ Trypan สีฟ้า วัวท่อนำไข่เซลล์เยื่อบุผิวถูกเจือจางความหนาแน่นของ 1 106 เซลล์ / มิลลิลิตรและเมล็ดในสามระบบวัฒนธรรมที่แตกต่างกันตามที่อธิบายไว้ในต่อไปนี้ mediumwas วัฒนธรรมใหม่หลังจาก 24 ชั่วโมงและต่อมาทุก 48 ชั่วโมง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัว oviductal บุเซลล์มีกลไก
แยกโดยบีบแบ่งระหว่างนิ้วหัวแม่มือและนิ้วชี้ และ pooled
, inwarm แฮงค์ในดินเค็ม
โซลูชั่น หลังจากสองรอบของการปั่น 5 นาที
ที่ 971  g , boecs ได้ง่ายแตกต่างจาก
ซ้อนทับเม็ดเลือดแดง . และน่านถูกทิ้งและถูก pipetted
boecs และอบอุ่น
resuspendedและ equilibrated ( 38,5  C 5% CO2 20 % O2 )
อาหารเลี้ยงเชื้อจากดัลเบโค่การขนาดกลางของนกอินทรีของแฮม
f-12 สารอาหารและส่วนผสม ( 1 : 1 ) และ 0.75 % (
( หลักที่มีกรดไขมันอิสระ ; Sigma – Aldrich เซนต์หลุยส์ , มิสซูรี
USA ) , 5% ซีรั่ม ( 2.5 % ของไกรเนอร์ไบโอเซโค ; หนึ่ง
frickenhausen , เยอรมนี และซีรัมลูกโคแรกเกิด 2.5 % ;
ซิกม่า Aldrich ) ) 2.5% เพนนิซิลิน ( สเตร็ปโตมัยซิน และ %
2นับเซลล์และการทดสอบยาแอมโฟเทอริซินบี viability ของเซลล์ (
) กับ B ü rker นับห้อง ( W . ชเร็ค
hofheim , เยอรมนี ) และไตรแพนสีฟ้า วัว oviductal
เซลล์เยื่อเพื่อลดความหนาแน่นของ 1  106 เซลล์ / มล.
และเมล็ดในระบบสามวัฒนธรรมที่แตกต่างกันตามที่อธิบาย
ในต่อไปนี้ วัฒนธรรม mediumwas ใหม่หลังจาก 24 ชั่วโมงและต่อมา
ทุก 48 ชั่วโมง