Uroporphyrinogen III methyltransfer

Uroporphyrinogen III methyltransferase (UMT) is a novel reporter owing to the catalytic products in the cells that emit strong red fluorescence under UV light. Here, we engineered the gene encoding the functional barley UMT (bUMT) by error-prone PCR and broadened the application UMT as a red fluorescent reporter in Escherichia coli. A variant, termed mbUMT, was selected and emitted stronger cell fluorescence than the wild type bUMT expressed in different E. coli strains, under different promoters and induction conditions respectively. The constructed mbUMT with a C-terminal ssrA tag was degraded in cells by the protease ClpXP encoded by E. coli chromosome, whereas the bUMT was expressed as active aggregates. Before they are exported to the periplasm, both proteins catalyze the substrate in the cytoplasm and emit cell fluorescence. The results suggested that the evolved bUMT is a better candidate to monitor in vivo degradation by E. coli ClpXP.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Methyltransferase Uroporphyrinogen III (UMT) ผู้สื่อข่าวนวนิยาย เพราะผลิตภัณฑ์ตัวเร่งปฏิกิริยาในเซลล์ที่กิ๊ก fluorescence สีแดงแข็งแรงภายใต้แสง UV ได้ ที่นี่ เราวิศวกรรมยีนเข้าข้าวบาร์เลย์ทำ UMT (bUMT) โดย PCR มักผิดพลาด และแอพลิเคชัน UMT เป็นผู้สื่อข่าวเรืองแสงสีแดงใน Escherichia coli เป็นต้นมา ตัวแปร การเรียกว่า mbUMT เลือก และออก fluorescence เซลล์แข็งแกร่งกว่า bUMT ไวลด์ไทป์ที่แสดงสายพันธุ์อื่น E. coli ก่อแตกต่างกันและเหนี่ยวนำเงื่อนไขตามลำดับ MbUMT สร้าง ด้วยแท็ก ssrA C-เทอร์มินัลถูกลดขั้นในเซลล์ โดยรติเอส ClpXP ถูกเข้ารหัส โดยที่โครโมโซม E. coli ในขณะที่ bUMT ถูกแสดงเป็นผลที่ใช้งานอยู่ ก่อนที่จะส่งออกไปยัง periplasm โปรตีนทั้งพื้นผิวในไซโทพลาซึมสถาบัน และกิ๊ก fluorescence เซลล์ ผลแนะนำว่า evolved bUMT ต้องดีกว่าการตรวจสอบการย่อยสลายในสัตว์ทดลอง โดย ClpXP E. coli

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Uroporphyrinogen III methyltransferase (UMT) เป็นนักข่าวนวนิยายเนื่องจากผลิตภัณฑ์ตัวเร่งปฏิกิริยาในเซลล์ที่ปล่อยเรืองแสงสีแดงที่แข็งแกร่งภายใต้แสงยูวี ที่นี่เราออกแบบมายีน UMT ข้าวบาร์เลย์ทำงาน (bUMT) โดยผิดพลาดได้ง่ายวิธี PCR และการประยุกต์ใช้ขยาย UMT เป็นนักข่าวเรืองแสงสีแดงใน Escherichia coli ตัวแปรที่เรียกว่า mbUMT ได้รับเลือกและปล่อยออกมาเรืองแสงเซลล์แข็งแรงกว่าชนิดป่า bUMT แสดงในที่แตกต่างกัน E. coli สายพันธุ์ภายใต้โปรโมเตอร์ที่แตกต่างกันและเงื่อนไขในการเหนี่ยวนำตามลำดับ สร้าง mbUMT กับ C-ขั้วแท็ ssrA ถูกสลายตัวในเซลล์โดย ClpXP protease เข้ารหัสโดย E. coli โครโมโซมขณะที่ bUMT ถูกแสดงเป็นมวลที่ใช้งาน ก่อนที่พวกเขาจะถูกส่งออกไปยัง periplasm โปรตีนทั้งกระตุ้นสารตั้งต้นในการพลาสซึมและปล่อยเซลล์เรืองแสง ผลการชี้ให้เห็นว่า bUMT พัฒนาเป็นผู้สมัครที่ดีกว่าที่จะตรวจสอบในการย่อยสลายร่างกายโดยเชื้อ E. coli ClpXP

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

uroporphyrinogen III methyltransferase ( umt ) เป็นนวนิยายนักข่าวเนื่องจากผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยาในเซลล์ที่ปล่อยแรงสีแดงเรืองแสงภายใต้แสงยูวี ที่นี่เราได้ยีนที่ umt ข้าวบาร์เลย์ฟังก์ชันการเข้ารหัส ( bumt ) โดยวิธี PCR และข้อผิดพลาดที่มักจะพัฒนา umt สมัครเป็นนักข่าวที่เรืองแสงสีแดงใน Escherichia coli ตัวแปร mbumt termed ,เลือกที่แข็งแกร่งและเซลล์เรืองแสงมากกว่าป่าชนิด bumt แสดงออกในเชื้อ E . coli ที่แตกต่างกันภายใต้โปรโมเตอร์ที่แตกต่างกันและนำเงื่อนไขตามลำดับ การสร้าง mbumt ที่มีแท็ก ssra ซึ่งเกิดขึ้นในเซลล์ โดยโปร clpxp เข้ารหัสโดย E . coli โครโมโซม ส่วน bumt แสดงออกเป็น active มวลรวม .ก่อนที่พวกเขาจะถูกส่งออกไปยัง periplasm ทั้งโปรตีนกระตุ้นเซลล์พื้นผิวใน cytoplasm และคายเรืองแสงด้วย ผลการศึกษาพบว่า การพัฒนา bumt เป็นผู้สมัครที่ดีกว่าที่จะตรวจสอบในการสลายตัว โดย E . coli clpxp .