RNA preparation and reverse transcr

RNA preparation and reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR)
Gastric biopsy specimens were homogenized by using QIAshredder (QIAGEN) and total RNA was isolated using RNeasy mini spin column (QIAGEN) and subjected to semi-quantitative RT-PCR. Ten nanograms of total RNA was reversed transcribed and RT-PCR was performed using One-Step RT-PCR kit (QIAGEN) to detect IL-8, IL-1β, TNFα and Cox- 2 mRNA. Total RNA was reverse transcribed at 50 °C for 30 min, and 30 cycles of 45 s denaturation at 94 °C, 45 s of annealing at 64 °C and 1 min extension at 72 °C were employed. Primer sequences are shown in Table 1. PCR reaction products were electrophoresed on 2% agarose gel, stained with ethidium bromide and quantified by UV translumi- nator image documentation system using GeneSnap program. The levels of PCR products specific to cytokines were normalized relative to glyceraldehydes 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) amplicon.

Statistical analysis
Statistical analysis was performed using Fisher's exact test and t- test (paired and unpaired).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เตรียม RNA และปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรสถอดย้อนกลับ (RT-PCR) ตัวอย่างการตรวจชิ้นเนื้อกระเพาะอาหารถูก homogenized โดย QIAshredder (QIAGEN) และ RNA รวมแยกใช้ RNeasy หมุนมินิคอลัมน์ (QIAGEN) และการกึ่งเชิงปริมาณ RT-PCR ทับศัพท์ nanograms สิบของ RNA ถูกย้อนกลับ และทำ RT-PCR โดยใช้ขั้นตอนเดียว RT-PCR kit (QIAGEN) เพื่อตรวจหา IL-8, IL 1β, TNFα และ mRNA Cox - 2 รวม RNA ถูกย้อนกลับทับศัพท์ที่ 50 ° C เป็นเวลา 30 นาที และ 45 s denaturation 94 ° c, 45 30 รอบของการหลอมที่นามสกุล 64 ° C และ 1 นาทีที่อุณหภูมิ 72 ° C ถูกใช้ ลำดับรองพื้นจะแสดงในตารางที่ 1 ผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยา PCR มี electrophoresed อยู่ 2% agarose เจล เลอะโบรไมด์ ethidium และวัด โดยระบบ UV translumi nator ภาพเอกสารโดยใช้โปรแกรม GeneSnap ระดับของผลิตภัณฑ์ PCR เฉพาะ cytokines ได้ตามปกติเมื่อเทียบกับ glyceraldehydes dehydrogenase 3-ฟอสเฟต (GAPDH) amplicon การวิเคราะห์ทางสถิติ ดำเนินการวิเคราะห์ทางสถิติโดยใช้ t-ทดสอบและทดสอบที่แน่นอนของฟิชเชอร์ (จับคู่ และ unpaired)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การเตรียมอาร์เอ็นเอและย้อนกลับถอดความโพลิเมอร์ปฏิกิริยาลูกโซ่ (RT-PCR)
ตัวอย่างการตรวจชิ้นเนื้อกระเพาะอาหารถูกปั่นโดยใช้ QIAshredder (QIAGEN) และ RNA ทั้งหมดถูกแยกออกโดยใช้การหมุนคอลัมน์ RNeasy มินิ (QIAGEN) และยัดเยียดให้กึ่งเชิงปริมาณ RT-PCR สิบนาโนของ RNA รวมเป็นตรงกันข้ามคัดลอกและ RT-PCR ได้ดำเนินการโดยใช้ขั้นตอนเดียว RT-PCR Kit (QIAGEN) ในการตรวจสอบ IL-8, IL-1β, TNFαและ Cox- 2 mRNA RNA รวมได้รับการถ่ายทอดกลับไปที่ 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีและ 30 รอบของ 45 s denaturation ที่ 94 ° C 45 ของการอบที่ 64 องศาเซลเซียสและต่ำสุด 1 ส่วนขยายที่ 72 ° C ที่ถูกว่าจ้าง ลำดับไพรเมอร์จะแสดงในตารางที่ 1 PCR ผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยาถูก electrophoresed เจล agarose 2% ย้อมด้วย ethidium bromide และปริมาณโดยรังสียูวี translumi- Nator ระบบเอกสารภาพโดยใช้โปรแกรม GeneSnap ระดับของผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ที่เฉพาะเจาะจงเพื่อ cytokines เป็นญาติปกติ glyceraldehydes 3 ฟอสเฟต dehydrogenase (GAPDH) amplicon. การวิเคราะห์สถิติการวิเคราะห์ทางสถิติได้ดำเนินการโดยใช้การทดสอบที่แน่นอนฟิชเชอร์และ T- ทดสอบ (จับคู่และ unpaired)