Molecular modeling also showed that

Molecular modeling also showed that lysines 36 and 38 lie in close spatial proximity to the segment 112–129, thus contributing to the net positive charge of that molecular region. The concept of the existence of molecular deter- minants in venom PLA2s, different from the catalytic site, responsible for interaction with target sites in cells had been proposed before (see Kini and Evans, 1989). However, the study of Lomonte et al. was the first one to identify the site responsible for toxicity, in this case the cytolytic site, of a venom PLA2 homologue. This issue was then explored by other groups with additional experimental tools, such as recombinant toxins generated by site-directed mutagenesis (Ward et al., 2002). In the case of Lys49 PLA2 homologues from Bothrops venoms, these studies corroborated the relevance of the C-terminal cationic-hydrophobic segment in the membrane-disrupting activity of these toxins and, consequently, in the ability of these molecules to induce myotoxicity.
The following is a personal account of the significance of this work by Bruno Lomonte: “This study was conceived in 1993, during the final stage of my PhD training at the University of Göteborg. The fact that Lys49-phospholipases A2 could damage muscle tissue in vivo, or several types of cells in vitro, despite being catalytically inactive, was very intriguing at that moment. The only information available to try to solve this puzzle for B. asper myotoxin II was its amino acid sequence.
A number of factors coincided for the successful iden- tification of the “toxic” region of Lys49 PLA2s achieved in this study:
(1) A paper by Paulo Melo and Guillherme Suarez-Kurtz in Brazil, had reported that heparin could inhibit the myotoxic effects of Bothrops venoms. Heparin being a strong polyanion, led to hypothesize its interaction with a highly cationic motif on the myotoxins.
(2) Ulf Lindahl, a leading expert in the field of heparin research at Uppsala University, provided access to the facilities, methods, and purified materials in his labo- ratory, through the collaboration of Marco Maccarana, a PhD student from Italy.
(3) Ernesto Moreno, a student from Cuba also finishing his PhD at Göteborg, became interested in this project and provided the necessary expertise to model the three- dimensional structure of myotoxin II.
(4) My thesis supervisors, Lars-Åke Hanson and Andrej Tarkowski, fully supported our proposed strategy to select “candidate” synthetic peptides of myotoxin II to explore the location of its toxic region by mapping the interaction site with heparin. At the end, this simple idea turned out to be quite valuable, by providing a significant step forward in the field of PLA2 toxins.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สร้างแบบจำลองโมเลกุลนอกจากนี้ยัง พบว่า lysines 36 และ 38 อยู่ในใกล้ปริภูมิเซ็กเมนต์ 112-129 จึงสนับสนุนภูมิภาคที่โมเลกุลบวกค่าสุทธิ มีการเสนอแนวคิดของการดำรงอยู่ของโมเลกุลเป็นอุปสรรค-minants ในพิษ PLA2s แตกต่างจากไซต์ตัวเร่งปฏิกิริยา ความรับผิดชอบสำหรับการโต้ตอบกับเว็บไซต์เป้าหมายในเซลล์ก่อน (ดูกินีและอีวานส์ 1989) อย่างไรก็ตาม การศึกษาของ Lomonte et al. เป็นคนแรกที่ระบุไซต์ชอบ toxicity ในกรณีนี้เว็บไซต์ cytolytic ของ homologue พิษ PLA2 ปัญหานี้ได้แล้วสำรวจ โดยกลุ่มอื่น ๆ พร้อมทดลองการใช้เครื่องมือเพิ่มเติม เช่น recombinant สารพิษที่สร้างขึ้น โดยตรงไซต์ mutagenesis (Ward และ al., 2002) ในกรณีของ Lys49 PLA2 homologues จาก Bothrops ดี ศึกษาเหล่านี้ corroborated ความเกี่ยวข้องของเทอร์มินัล C cationic hydrophobic เซ็กเมนต์ ในกิจกรรมที่อาจรบกวนเยื่อของสารพิษเหล่านี้ และ จึง ในความสามารถของโมเลกุลเหล่านี้ชวน myotoxicityต่อไปนี้เป็นบัญชีส่วนบุคคลของความสำคัญของงานนี้โดย Bruno Lomonte: "การศึกษานี้ได้รู้สึกใน 1993 ในระหว่างขั้นตอนสุดท้ายของการฝึกอบรมที่มหาวิทยาลัย Göteborg ปริญญาเอกของฉัน ความจริงที่ว่า Lys49 phospholipases A2 อาจต่อกล้ามเนื้อในสัตว์ทดลอง หรือชนิดหลายเซลล์เพาะเลี้ยง การใช้งาน catalytically ถูกมากน่าในขณะนั้น ข้อมูลเฉพาะที่มีพยายามแก้ปริศนานี้สำหรับ asper เกิด myotoxin II ลำดับของกรดอะมิโนได้ปัจจัยร่วมสำหรับ iden-tification ประสบความสำเร็จในภาค PLA2s Lys49 ประสบความสำเร็จในการศึกษานี้ "พิษ":(1) เอกสารโดยเปา Melo Kurtz ซูอาเรส Guillherme ในบราซิล มีรายงานว่า เฮพารินสามารถยับยั้งผล myotoxic ดี Bothrops เฮพารินเป็น polyanion แข็งแรง ให้ hypothesize ที่โต้ตอบกับแปลนสูง cationic บน myotoxins(2) Ulf Lindahl เป็นผู้เชี่ยวชาญชั้นนำในฟิลด์ของเฮพารินวิจัยมหาวิทยาลัย Uppsala ให้เข้าถึงสิ่งอำนวยความสะดวก วิธีการ และวัสดุบริสุทธิ์ในพระองค์ labo ratory ผ่านความร่วมมือของ Marco Maccarana นักศึกษาปริญญาเอกจากประเทศอิตาลี(3) Ernesto Moreno เรียนจากคิวบาจบปริญญาเอกที่ Göteborg ยัง เป็นที่สนใจในโครงการนี้ และมีความเชี่ยวชาญจำเป็นแบบสาม - มิติโครงสร้างของ myotoxin II(4) หัววิทยานิพนธ์ของฉัน แฮนสัน Lars Åke และ Andrej Tarkowski สนับสนุนกลยุทธ์ของเราเสนอการเลือก "ผู้สมัคร" เปปไทด์สังเคราะห์ของ myotoxin II การสำรวจที่ตั้งของภูมิภาคเป็นพิษ ด้วยการแมปไซต์โต้ตอบกับเฮพารินอย่างเต็ม ที่สุด ความคิดอย่างนี้เปิดออกจะมีคุณค่ามาก โดยให้ความสำคัญก้าวด้านสารพิษ PLA2

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การสร้างแบบจำลองโมเลกุลนอกจากนี้ยังแสดงให้เห็นว่า lysines 36 และ 38 อยู่ในบริเวณใกล้เคียงอวกาศใกล้กับส่วนที่ 112-129 จึงเอื้อต่อการประจุบวกสุทธิว่าภูมิภาคโมเลกุล แนวคิดของการดำรงอยู่ของ minants ประการโมเลกุลใน PLA2s พิษแตกต่างจากเว็บไซต์ของตัวเร่งปฏิกิริยามีความรับผิดชอบสำหรับการปฏิสัมพันธ์กับเว็บไซต์เป้าหมายในเซลล์ได้รับการเสนอชื่อก่อน (ดู Kini และอีแวนส์, 1989) อย่างไรก็ตามการศึกษาของ Lomonte และคณะ เป็นคนแรกที่จะระบุเว็บไซต์ที่รับผิดชอบในการเป็นพิษในกรณีนี้เว็บไซต์ cytolytic, พิษ PLA2 คล้ายคลึงกัน ปัญหานี้มีการสำรวจแล้วโดยกลุ่มอื่น ๆ ด้วยเครื่องมือการทดลองเพิ่มเติมเช่นสารพิษที่สร้างขึ้นโดย recombinant ฉับเว็บไซต์กำกับ (วอร์ด et al., 2002) ในกรณีที่ Lys49 PLA2 homologues จากออกฤทธิ์ Bothrops การศึกษาเหล่านี้ยืนยันความเกี่ยวข้องของ C-ขั้วประจุบวกส่วน-ชอบน้ำในกิจกรรมที่เมมเบรนรบกวนของสารพิษเหล่านี้และดังนั้นในความสามารถของโมเลกุลเหล่านี้จะก่อให้เกิด myotoxicity.
ต่อไปนี้ เป็นบัญชีส่วนบุคคลที่มีความสำคัญของการทำงานโดยบรูโน่ Lomonte นี้: "การศึกษานี้ได้รับการตั้งครรภ์ในปี 1993 ในระหว่างขั้นตอนสุดท้ายของการฝึกอบรมปริญญาเอกของฉันที่มหาวิทยาลัยโกเธนเบิร์ก ความจริงที่ว่า Lys49-phospholipases A2 อาจเกิดความเสียหายเนื้อเยื่อของกล้ามเนื้อในร่างกายหรือหลายประเภทของเซลล์ในหลอดทดลองแม้จะเป็นตัวเร่งปฏิกิริยาที่ไม่ใช้งานเป็นที่น่าสนใจมากในขณะนั้น ข้อมูลเท่านั้นที่มีการพยายามที่จะแก้ปริศนานี้บีตง myotoxin ครั้งที่สองเป็นลำดับกรดอะมิโน.
จำนวนของปัจจัยประจวบเหมาะสำหรับลักษณะของการประสบความสำเร็จ tification ของ "พิษ" ภูมิภาค PLA2s Lys49 ประสบความสำเร็จในการศึกษานี้:
(1) กระดาษโดยเปาโลเมโล่และ Guillherme Suarez-เคิทซ์ในประเทศบราซิลได้รายงานว่าเฮสามารถยับยั้งผลกระทบ myotoxic ของ Bothrops ออกฤทธิ์ เฮเป็น polyanion แข็งแกร่งนำไปสู่การตั้งสมมติฐานปฏิสัมพันธ์กับบรรทัดฐานประจุบวกสูงใน myotoxins.
(2) อุลฟ Lindahl, ผู้เชี่ยวชาญชั้นนำในด้านการวิจัยเฮที่ Uppsala University, ให้เข้าถึงสิ่งอำนวยความสะดวกวิธีการและวัสดุที่บริสุทธิ์ ในห้องปฏิบัติการของเขาผ่านการทำงานร่วมกันของมาร์โก Maccarana, นักศึกษาปริญญาเอกจากอิตาลี.
(3) เออร์เนสโมเรโน, นักเรียนจากคิวบายังจบปริญญาเอกของเขาที่Göteborgเริ่มให้ความสนใจในโครงการนี้และให้ความเชี่ยวชาญที่จำเป็นในการสร้างแบบจำลองสาม -. โครงสร้างมิติของ myotoxin II
(4) ผู้บังคับบัญชาวิทยานิพนธ์ของฉัน, ลาร์สเอกแฮนสันและ Andrej Tarkowski, การสนับสนุนอย่างเต็มที่กลยุทธ์เสนอของเราที่จะเลือก "ผู้สมัคร" เปปไทด์สังเคราะห์ myotoxin ครั้งที่สองในการสำรวจสถานที่ของภูมิภาคที่เป็นพิษของมันโดยการทำแผนที่เว็บไซต์ปฏิสัมพันธ์ กับเฮ ในตอนท้ายนี้คิดที่เรียบง่ายจะกลายเป็นที่มีคุณค่ามากโดยการให้ก้าวสำคัญในด้านของสารพิษ PLA2

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แบบจำลองโมเลกุล พบว่า lysines 36 และ 38 นอนใกล้พื้นที่ใกล้เคียงกับส่วน 112 - 129 จึงเอื้อต่อประจุบวกสุทธิที่ระดับภูมิภาค แนวคิดของการมีอยู่ของโมเลกุลยับยั้ง - minants ในพิษ pla2s แตกต่างจากเว็บไซต์การ , รับผิดชอบในการปฏิสัมพันธ์กับเซลล์เป้าหมายในเว็บไซต์ได้รับการเสนอก่อน ( ดูในขณะนี้และอีแวนส์ , 1989 )อย่างไรก็ตาม การศึกษา lomonte et al . เป็นคนแรกที่จะระบุเว็บไซต์ที่รับผิดชอบในความเป็นพิษ ในกรณีนี้ cytolytic เว็บไซต์ของพิษ pla2 ผิว . ปัญหานี้ได้สำรวจจากกลุ่มอื่น ๆ เครื่องมือทดลองเพิ่มเติม เช่นโปรตีนสารพิษที่สร้างขึ้นโดยเว็บไซต์ที่กำกับการ ( Ward et al . , 2002 ) ในกรณีของ lys49 pla2 จากพิษใน bothrops ,การศึกษาเหล่านี้ยืนยันความเกี่ยวข้องของประจุบวก ) ซึ่งส่วนในเยื่อขัดขวางกิจกรรมของสารพิษเหล่านี้และดังนั้นในความสามารถของโมเลกุลเหล่านี้จะก่อให้เกิด myotoxicity .
ต่อไปนี้เป็นบัญชีส่วนบุคคลของความสำคัญของงานนี้ โดย บรูโน่ lomonte : " การศึกษานี้ถูกคิดค้นขึ้นในปี พ.ศ. 2536ในระหว่างขั้นตอนสุดท้ายของการฝึกอบรมปริญญาเอกที่มหาวิทยาลัยไป̈ teborg . ความจริงที่ lys49 phospholipases A2 สามารถทำลายเนื้อเยื่อของกล้ามเนื้อในร่างกาย หรือหลายประเภทของเซลล์ในหลอดทดลอง แม้จะเป็น catalytically ใช้งานเป็นที่น่าสนใจมากในขณะนั้น เฉพาะข้อมูลที่มีอยู่เพื่อพยายามที่จะแก้ปริศนานี้ บี โดยใช้ myotoxin 2 ลำดับของกรดอะมิโน
จำนวนของปัจจัยประจวบเหมาะที่ประสบความสําเร็จ iden - tification ของ " ภาคต่อ " ของ lys49 pla2s สําเร็จในการศึกษา :
( 1 ) กระดาษและเปาโลเมโล guillherme ซัวเรซ เคิร์ทซ์ ใน บราซิล มีรายงานว่า ยาอาจยับยั้งผลของพิษ myotoxic bothrops . เฮปารินเป็น polyanion แข็งแรง ทำให้พบปฏิสัมพันธ์กับแรงจูงใจสูงบวกกับไมโทซิน .