Amplification by PCR. Typical PCRs were carried out in a final volume of 50
or 100 ml containing 1 U of Vent DNA polymerase (New England Biolabs) per
50 ml, 13 buffer (New England Biolabs), nucleotides (0.25 mmol/liter, final
concentration for each nucleotide), bovine serum albumin (0.1 mg/ml), and
primers (8 ng/ml each). Bacterial DNA was obtained from cells by touching
colonies grown on blood-agar medium with a sterile syringe needle and then
dipping the needle directly into the PCR mix. Typical cycling parameters were 1
min of denaturation (94°C), 1 min of annealing (55°C), and 1.5 min of extension
(72°C), for 35 cycles. The reaction was started by a denaturation step (3 min at
ขยาย โดย PCR PCRs ทั่วไปได้ดำเนินการในปริมาตรสุดท้ายของ 50หรือ 100 มล 1 U ระบายเอ็นเอพอลิเมอเรส (Biolabs นิวอิงแลนด์) ที่ประกอบด้วยต่อ50 ml, 13 บัฟเฟอร์ (นิวอิงแลนด์ Biolabs), นิวคลีโอไทด์ (0.25 mmol/ลิตร สุดท้ายความเข้มข้นในแต่ละนิวคลีโอไทด์), วัว serum albumin (0.1 mg/ml), และไพรเมอร์ (8 ng/ml แต่ละ) ดีเอ็นเอจากแบคทีเรียที่ได้จากเซลล์ โดยการสัมผัสอาณานิคมที่ปลูกในกลาง agar เลือด ด้วยเข็มเข็มฉีดยาที่ฆ่าเชื้อแล้วจิ้มเข็มที่ลงผสม PCR พารามิเตอร์ทั่วไปขี่จักรยานได้ 1นาที denaturation (94° C), 1 นาทีของหลอม (55 องศา C), และ 1.5 นาทีของส่วนขยาย(72° C), สำหรับรอบ 35 ปฏิกิริยาเริ่มต้นตามขั้นตอน denaturation (3 นาทีที่
การแปล กรุณารอสักครู่..
