Studies of protein nutrition and bi

Studies of protein nutrition and biochemistry require reliable methods for analysis of amino
acid (AA) composition in polypeptides of animal tissues and foods. Proteins are hydrolyzed by
6 M HCl (110 ◦C for 24 h), 4.2 M NaOH (105 ◦C for 20 h), or proteases. Analytical techniques that
require high-performance liquid chromatography (HPLC) include pre-column derivatization with
4-chloro-7-nitrobenzofurazan, 9-fluorenyl methylchloroformate, phenylisothiocyanate, naphthalene-
2,3-dicarboxaldehyde, 6-aminoquinolyl-N-hydroxysuccinimidyl carbamate, and o-phthaldialdehyde
(OPA). OPA reacts with primary AA (except cysteine or cystine) in the presence of 2-mercaptoethanol or 3-
mercaptopropionic acid to form a highly fluorescent adduct. OPA also reacts with 4-amino-1-butanol and
4-aminobutane-1,3-diol produced from oxidation of proline and 4-hydroxyproline, respectively, in the
presence of chloramine-T plus sodium borohydride at 60 ◦C, or with S-carboxymethyl-cysteine formed
from cysteine and iodoacetic acid at 25 ◦C. Fluorescence of OPA derivatives is monitored at excitation
and emission wavelengths of 340 and 455 nm, respectively. Detection limits are 50 fmol for AA. This
technique offers the following advantages: simple procedures for preparation of samples, reagents, and
mobile-phase solutions; rapid pre-column formation of OPA-AA derivatives and their efficient separation at room temperature (e.g., 20–25 ◦C); high sensitivity of detection; easy automation on the HPLC
apparatus; few interfering side reactions; a stable chromatography baseline for accurate integration of
peak areas; and rapid regeneration of guard and analytical columns. Thus, the OPA method provides a
useful tool to determine AA composition in proteins of animal tissues (e.g., skeletal muscle, liver, intestine, placenta, brain, and body homogenates) and foods (e.g., milk, corn grain, meat, and soybean meal).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การศึกษาโปรตีนโภชนาการและชีวเคมีต้องวิธีที่เชื่อถือได้สำหรับการวิเคราะห์ของอะมิโนองค์ประกอบกรด (AA) ในเปปไทด์ของเนื้อเยื่อสัตว์และอาหาร โปรตีนจะ hydrolyzed โดย6 M HCl (110 ◦C ใน 24 ชม), 4.2 M NaOH (105 ◦C สำหรับ 20 h), หรือ proteases เทคนิคการวิเคราะห์ที่ต้องการประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC) รวม derivatization คอลัมน์ก่อนด้วย4-chloro-7-nitrobenzofurazan, methylchloroformate 9 fluorenyl, phenylisothiocyanate แนฟทาลีน-2,3 dicarboxaldehyde, carbamate 6-aminoquinolyl-N-hydroxysuccinimidyl และ o phthaldialdehyde(OPA) OPA ทำปฏิกิริยากับ AA หลัก (ยกเว้น cysteine หรือ cystine) ในต่อหน้าของ 2 mercaptoethanol หรือ 3กรด mercaptopropionic แบบเรืองแสงสูง adduct OPA ยังทำปฏิกิริยากับ 4-อะมิโน-1-บิวทานอ และ4-aminobutane-1,3-diol ผลิตจากออกซิเดชันของ proline และ 4-hydroxyproline ตามลำดับ ในการรูปแบบของ chloramine T บวกโซเดียม borohydride ที่ 60 ◦C หรือ S-carboxymethyl-cysteineจาก iodoacetic และ cysteine กรดที่ 25 ◦C Fluorescence ของ OPA อนุพันธ์จะตรวจสอบที่ในการกระตุ้นและความยาวคลื่นที่ปล่อยก๊าซของ 340 และ 455 nm ตามลำดับ ตรวจสอบวงเงิน fmol 50 สำหรับ AA ได้ นี้เทคนิคการนำเสนอต่อไปนี้: ขั้นตอนง่าย ๆ สำหรับการเตรียมตัวอย่าง reagents และเฟสเคลื่อนที่วิธีแก้ไขปัญหา คอลัมน์ก่อนก่อตัวที่รวดเร็วของอนุพันธ์ OPA AA และแยกของพวกเขามีประสิทธิภาพที่อุณหภูมิห้อง (เช่น 20 – 25 ◦C); สูงความไวของการตรวจสอบ อัตโนมัติง่ายในการ HPLCเครื่องมือ ไม่รบกวนด้านปฏิกิริยา พื้นฐานมั่นคง chromatography สำหรับรวมถูกต้องพื้นที่สูงสุด และฟื้นฟูอย่างรวดเร็วรักษาและวิเคราะห์ ดังนั้น วิธี OPA มีการเครื่องมือที่มีประโยชน์เพื่อกำหนด AA องค์ประกอบในโปรตีนของเนื้อเยื่อสัตว์ (เช่น อีกกล้ามเนื้อ ตับ ลำไส้ รก สมอง และ homogenates ร่างกาย) และ อาหาร (เช่น นม เมล็ดข้าวโพด เนื้อสัตว์ กากถั่วเหลือง)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การศึกษาของสารอาหารโปรตีนและชีวเคมีต้องใช้วิธีการที่เชื่อถือได้สำหรับการวิเคราะห์อะมิโน
กรด (AA) องค์ประกอบใน polypeptides ของเนื้อเยื่อสัตว์และอาหาร โปรตีนไฮโดรไลซ์โดย
6 M HCl (110 ◦Cเป็นเวลา 24 ชั่วโมง) 4.2 M NaOH (105 ◦C 20 ชั่วโมง) หรือโปรตีเอส เทคนิคการวิเคราะห์ที่
ต้องการประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC) รวมถึงอนุพันธ์ก่อนคอลัมน์ที่มี
4 chloro-7-nitrobenzofurazan 9 fluorenyl methylchloroformate, phenylisothiocyanate, naphthalene-
2,3-dicarboxaldehyde 6 aminoquinolyl-N-hydroxysuccinimidyl คาร์บาเม, และ o-phthaldialdehyde
(OPA) OPA ทำปฏิกิริยากับหลัก AA (ยกเว้น cysteine ​​หรือซีสตีน) ในการปรากฏตัวของ 2 หรือ 3 mercaptoethanol
กรด mercaptopropionic ในรูปแบบดึงเข้าหาเรืองแสงสูง OPA ยังทำปฏิกิริยากับ 4 อะมิโนบิวทานอ 1 และ
4 aminobutane-1,3-diol ผลิตจากการเกิดออกซิเดชันของโพรลีนและ 4-hydroxyproline ตามลำดับใน
การปรากฏตัวของคลอรา-T บวก borohydride โซเดียมที่ 60 ◦Cหรือ S-คาร์บอกซี-cysteine ​​ที่เกิดขึ้น
จาก cysteine ​​และกรด iodoacetic ที่ 25 ◦C การเรืองแสงของสัญญาซื้อขายล่วงหน้า OPA จะถูกตรวจสอบในการกระตุ้น
และการปล่อยความยาวคลื่น 340 นาโนเมตรและ 455 ตามลำดับ ข้อ จำกัด ของการตรวจสอบ 50 fmol สำหรับ AA ซึ่ง
เทคนิคที่มีประโยชน์ต่อไปนี้: ขั้นตอนง่ายๆในการจัดทำตัวอย่างสารเคมีและ
การแก้ปัญหาเฟสมือถือ อย่างรวดเร็วก่อก่อนคอลัมน์อนุพันธ์ OPA-AA และการแยกที่มีประสิทธิภาพของพวกเขาที่อุณหภูมิห้อง (เช่น 20-25 ◦C); ความไวสูงของการตรวจสอบ; อัตโนมัติง่ายใน HPLC
อุปกรณ์; ไม่กี่รบกวนปฏิกิริยาด้าน โคพื้นฐานที่มั่นคงสำหรับการรวมที่ถูกต้องของ
พื้นที่สูงสุด; และการฟื้นฟูอย่างรวดเร็วของการรักษาความปลอดภัยและคอลัมน์วิเคราะห์ ดังนั้นวิธีการ OPA ให้
เครื่องมือที่มีประโยชน์ในการกำหนดองค์ประกอบ AA โปรตีนของเนื้อเยื่อสัตว์ (เช่นกล้ามเนื้อโครงร่าง, ตับ, ลำไส้รกสมองและร่างกาย homogenates) และอาหาร (เช่นนมข้าวข้าวโพดเนื้อสัตว์และถั่วเหลือง อาหาร)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การศึกษาทางโภชนาการโปรตีนและชีวเคมีเป็นวิธีที่เชื่อถือได้เพื่อการวิเคราะห์กรดอะมิโน
acid ( AA ) องค์ประกอบในโปรตีนในเนื้อเยื่อสัตว์และอาหาร โปรตีนไฮโดรไลซ์ด้วย
6 M HCl ( 110 ◦เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ) 4.2 M NaOH ( 105 ◦องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 ชั่วโมง ) หรือคุณค่าทางอาหาร เทคนิคการวิเคราะห์ที่
ต้องการวิธีโครมาโทกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง ( HPLC ) รวมกับกับ
ก่อน คอลัมน์4-chloro-7-nitrobenzofurazan methylchloroformate 9-fluorenyl , , phenylisothiocyanate ธาลีน -
2,3-dicarboxaldehyde 6-aminoquinolyl-n-hydroxysuccinimidyl , เมต และ o-phthaldialdehyde
( OPA ) โอภาปฏิกิริยากับหลัก AA ( ยกเว้นกรดอะมิโนหรือซีสตีน ) ในการแสดงตนของอย่างเดียว หรือ 3 -
mercaptopropionic กรดฟอร์มสูงเรืองแสงปุ่มตัวเลือก .โอภา reacts กับ 4-amino-1-butanol และ
4-aminobutane-1,3-diol ผลิตจากออกซิเดชันโพรลีนและ 4-hydroxyproline ตามลำดับใน
ตนของ chloramine-t บวกโซเดียมบอโรไฮไดรด์ที่ 60 ◦ C หรือ s-carboxymethyl-cysteine เกิดขึ้น
จากกรดอะมิโนกรดที่อุณหภูมิ 25 C ความสามารถและ◦เรืองแสงของโอปาอนุพันธ์คือการตรวจสอบที่กระตุ้น
และการปล่อยความยาวคลื่น 340 และ 455 นาโนเมตรตามลำดับ จำกัดการค้นหา 50 fmol สำหรับ AA เทคนิคนี้
มีข้อดีดังต่อไปนี้ : ขั้นตอนง่ายสำหรับการเตรียมตัวอย่างสารเคมีและ
เฟสเคลื่อนที่ โซลูชั่น ; อย่างรวดเร็วก่อนการก่อตัวของอนุพันธ์และคอลัมน์ opa-aa แยกที่มีประสิทธิภาพของพวกเขาที่อุณหภูมิห้อง ( เช่น 20 – 25 ◦ c ) ; ความไวสูงในการตรวจสอบ ; อัตโนมัติง่ายบนเครื่อง HPLC
;น้อยรบกวนปฏิกิริยาด้าน พื้นฐานที่มั่นคงสำหรับการบูรณาการวิธีที่ถูกต้องของ
พื้นที่สูงสุด และการฟื้นฟูอย่างรวดเร็วของยาม และคอลัมน์วิเคราะห์ ดังนั้น โอภาวิธีให้เครื่องมือที่มีประโยชน์เพื่อตรวจสอบ AA
องค์ประกอบโปรตีนในเนื้อเยื่อของสัตว์ ( เช่นกล้ามเนื้อกระดูก ตับ ลำไส้ รก สมอง และร่างกาย homogenates ) และอาหาร ( เช่น นมข้าวโพด ธัญพืช เนื้อสัตว์และกากถั่วเหลือง )