In other words, the cells that ofte

In other words, the cells that often remain after treatment,
and therefore cause tumor recurrence are often TICs. A
common mechanism to measure TICs is through the use
of the ALDEFLUOR assay using FACS, where 23 out of 33
human breast cancer cell lines were found to be positive
[24]. Therefore we used the ALDEFLUOR assay to determine
the population of TICs. Cells were incubated with
ALDH substrate in the presence (control) or absence (test)
of the ALDH enzyme inhibitor, diethylaminobenzaldehyde
(DEAB). The gated (ALDH−
) population in the control
condition was unchanged in the Apc-mutant versus wildtype
cells (Fig. 4a, 97.7 % compared to 95.5 %). However,
in the absence of the ALDH inhibitor, the gated population
changed from 77.8 % in the MMTV-PyMT;Apc+/+cells to a
mere 20.3 % in the MMTV-PyMT;ApcMin/+ cells, indicating
that Apc mutation increases the TIC population (Fig. 4)
a and b.
To translate our results from mouse cell lines to a human
cell line, we turned to MDA-MB-157 cells, which
are a triple negative breast cancer cell line derived from
a pleural effusion from a metaplastic human breast cancer
[25]. This specific cell line was chosen because of the
metaplastic-like tumors that developed in the MMTVPyMT;ApcMin/+
model [23]. As MDA-MB-157 cells have
wild-type APC [26–27] we used lentiviral mediated
shRNA to knockdown APC and observed a 60 % decrease
in APC gene expression (Fig. 5a). Using immunofluorescence
we observed that APC knockdown cells
had decreased APC protein expression at the membrane
and nucleus (Fig. 5b). Baseline cell proliferation was not
changed in the APC knockdown cells (data not shown).
Treatment with cisplatin, doxorubicin or paclitaxel did
not impact proliferation in the APC knockdown lines
compared to the parent line (Fig. 5c, Additional file 1),
similar to the effects in the PyMT-derived model (Fig. 2).
APC knockdown MDA-MB-157 cells exhibited decreased
apoptosis after treatment with paclitaxel or cisplatin
(Fig. 5d and e, Additional file 1). While paclitaxel
response was not previously shown to be dependent on
APC status (Fig. 2b), the impact of APC on cisplatin response
(Fig. 2b, and 5d) is consistent between the two
model systems. In contrast to the results in the PyMT
model system (Figs. 2b) doxorubicin-mediated apoptosis
was not altered by APC-status in the MDA-MB-157 cell
system (Fig. 5d).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ในคำอื่น ๆ เซลล์ซึ่งมักจะยังคงอยู่หลังการรักษาและดังนั้น สาเหตุเกิดเนื้องอกมัก TICs Aกลไกทั่วไปวัด TICs คือผ่านการใช้ของ ALDEFLUOR assay ใช้ FACS, 23 จาก 33พบรายการเซลล์มะเร็งเต้านมมนุษย์ต้องเป็นค่าบวก[24] ดังนั้น เราใช้ทดสอบ ALDEFLUOR เพื่อกำหนดประชากรของ TICs เซลล์มี incubated ด้วยพื้นผิว ALDH ในสถานะ (ควบคุม) การขาดงาน (การทดสอบ)ของสารยับยั้งเอนไซม์ ALDH, diethylaminobenzaldehyde(DEAB) ที่รั้ว (ALDH−) ประชากรในตัวควบคุมมีการเปลี่ยนแปลงเงื่อนไขใน Apc-mutant กับ wildtypeเซลล์ (Fig. 4a, 97.7% เมื่อเทียบกับ 95.5%) อย่างไรก็ตามในกรณีผล ALDH ประชากรรั้วเปลี่ยนจาก 77.8% ใน MMTV-PyMT เอพีซี + /mts + เซลล์ต้องการเพียง 20.3% ใน MMTV-PyMT ApcMin / + เซลล์ การแสดงการกลายพันธุ์ที่ Apc เพิ่มประชากรรับผลิตกระป๋อง (Fig. 4)ตัว และ bการแปลผลของเราจากรายการเซลล์เมาส์เพื่อมนุษย์เซลล์บรรทัด เราเปิดเซลล์ MDA-MB-157 ซึ่งมีเส้นเซลล์มะเร็งเต้านมติดลบสามมาeffusion pleural จากมะเร็งเต้านมมนุษย์ metaplastic[25] การเลือกเฉพาะบรรทัดนี้เนื่องจากการเนื้องอกเหมือน metaplastic ที่พัฒนาใน MMTVPyMT ApcMin / +จำลอง [23] MDA-MB-157 เซลล์มีชนิดป่า APC [26-27] เราใช้ lentiviral mediatedshRNA การ knockdown APC และสังเกต 60% ลดใน APC ยีน (ของ 5a Fig.) ใช้ immunofluorescenceเราสังเกตว่า APC knockdown เซลล์APC นิพจน์โปรตีนในเมมเบรนลดลงและนิวเคลียส (Fig. 5b) ไม่มีการงอกเซลล์พื้นฐานการเปลี่ยนแปลงในเซลล์ knockdown ของ APC (ข้อมูลไม่แสดง)ไม่ได้รักษากับ cisplatin, doxorubicin หรือ paclitaxelไม่มีผลต่อการงอกในบรรทัด knockdown APCเปรียบเทียบกับบรรทัดหลัก (Fig. 5 c แฟ้มเพิ่มเติม 1),คล้ายกับลักษณะพิเศษในรูปแบบที่มา PyMT (Fig. 2)APC knockdown MDA-MB-157 เซลล์จัดแสดงลดลงหลังจากรักษาด้วย paclitaxel หรือ cisplatin apoptosis(Fig. 5 d และ e แฟ้มเพิ่มเติม 1) ขณะ paclitaxelตอบถูกไม่ก่อนหน้านี้แสดงจะขึ้นอยู่กับสถานะ APC (Fig. 2b) ผลกระทบของ APC cisplatin ตอบ(Fig. 2b และ 5d) มีความสอดคล้องระหว่างสองแบบจำลองระบบ ตรงข้ามผลลัพธ์ในการ PyMTแบบจำลองระบบ (Figs. 2b) doxorubicin mediated apoptosisไม่มีการเปลี่ยนแปลง โดยเอพีซีสถานะในเซลล์ MDA-MB-157ระบบกิน 5d)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในคำอื่น ๆ เซลล์ที่มักจะยังคงอยู่หลังจากการรักษา
และดังนั้นจึงก่อให้เกิดการกำเริบของเนื้องอกมักจะสำบัดสำนวน
กลไกในการวัด tics จะผ่านการใช้
ทดสอบของ ALDEFLUOR ใช้มาซึ่งที่ 23 จาก 33
สายพันธุ์เซลล์มะเร็งเต้านมของมนุษย์พบว่ามีการบวก
[24] ดังนั้นเราจึงใช้การทดสอบ ALDEFLUOR เพื่อตรวจสอบ
ประชากรสำบัดสำนวน เซลล์ที่ถูกบ่มกับ
สารตั้งต้นในการปรากฏตัว ALDH (ควบคุม) หรือไม่มี (ทดสอบ)
ของ ALDH ยับยั้งเอนไซม์ diethylaminobenzaldehyde
(DEAB) รั้วรอบขอบชิด (ALDH-
) ประชากรในการควบคุม
สภาพไม่เปลี่ยนแปลงใน APC-กลายพันธุ์เมื่อเทียบกับ wildtype
เซลล์ (รูป. 4a, 97.7% เมื่อเทียบกับ 95.5%) แต่
ในกรณีที่ไม่มีการยับยั้ง ALDH ประชากรรั้วรอบขอบชิด
เปลี่ยนจาก 77.8% ใน MMTV-PyMT; Apc + / + เซลล์
เพียง 20.3% ใน MMTV-PyMT; ApcMin / + เซลล์แสดงให้เห็น
ว่าการกลายพันธุ์ Apc เพิ่ม TIC ประชากร (รูปที่. 4)
และข.
ในการแปลผลของเราจากเซลล์เมาส์เพื่อมนุษย์
สายพันธุ์ของเซลล์เราหันไป MDA-MB-157 เซลล์ซึ่ง
เป็นเซลล์มะเร็งเต้านมสามเชิงลบมาจาก
ปอดไหลจาก โรคมะเร็งเต้านมของมนุษย์ metaplastic
[25] สายพันธุ์ของเซลล์นี้เฉพาะที่ได้รับเลือกเพราะ
เนื้องอก metaplastic เหมือนที่พัฒนาใน MMTVPyMT; ApcMin / +
รูปแบบ [23] ขณะที่ภาคตะวันออกเฉียงเหนือ-MB-157 เซลล์มี
APC ชนิดป่า [26-27] เราใช้ lentiviral พึ่ง
shRNA ที่จะล้มลง APC และสังเกตเห็นการลดลง 60%
ในการแสดงออกของยีน APC (รูป. 5a) immunofluorescence ใช้
ที่เราตั้งข้อสังเกตว่า APC เซลล์ล้มลง
ลดลงการแสดงออกของโปรตีน APC ที่เยื่อหุ้ม
นิวเคลียส (รูป. 5b) การเพิ่มจำนวนเซลล์พื้นฐานไม่ได้
เปลี่ยนแปลงในเซลล์ APC ล้มลง (ไม่ได้แสดงข้อมูล).
การรักษาด้วย cisplatin doxorubicin หรือยา paclitaxel ไม่
ไม่ส่งผลกระทบในการขยายสาย APC ล้มลง
เมื่อเทียบกับสายแม่ (รูป. 5c, แฟ้มเพิ่มเติม 1)
คล้ายกับ ผลกระทบในรูปแบบ PyMT มา (รูปที่. 2).
APC ล้มลง MDA-MB-157 เซลล์ลดลงแสดง
การตายหลังการรักษาด้วยยา paclitaxel หรือ cisplatin
(รูป. 5d และ e, แฟ้มเพิ่มเติม 1) ในขณะที่ยา paclitaxel
การตอบสนองไม่ได้แสดงให้เห็นว่าก่อนหน้านี้จะขึ้นอยู่กับ
สถานะของ APC (รูป. 2b) ผลกระทบของ APC กับการตอบสนอง cisplatin
(รูป. 2b และ 5d) มีความสอดคล้องระหว่างสอง
ระบบรูปแบบ ในทางตรงกันข้ามกับผลใน PyMT
แบบจำลองระบบ (มะเดื่อ. 2b) apoptosis doxorubicin พึ่ง
ไม่ได้ถูกเปลี่ยนแปลงโดย APC-สถานะในภาคตะวันออกเฉียงเหนือ-MB-157 มือถือ
ระบบ (รูป. 5d)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในคำอื่น ๆเซลล์ที่มักจะยังคงอยู่หลังการรักษา และการเกิดเนื้องอก
จึงมักจะเกร็ง . เป็นกลไกปกติ
วัด tics จะใช้ในการทดสอบการใช้ facs aldefluor
ที่ 23 จาก 33
มนุษย์เต้านม เซลล์มะเร็งที่พบเป็นบวก
[ 24 ] ดังนั้นเราจึงใช้วิธีกำหนด aldefluor
ประชากรของ tics . เซลล์ที่ถูกบ่มกับ
aldh ใช้ในการแสดง ( ควบคุม ) หรือขาด ( ทดสอบ ) ของตัวยับยั้งเอนไซม์ aldh
,
( diethylaminobenzaldehyde deab ) รั้ว ( aldh −
) ประชากรให้อยู่ในภาวะควบคุมได้
ไม่เปลี่ยนแปลงใน APC กลายพันธุ์กับ wildtype
เซลล์ ( รูปที่ 4 97.7 , % เมื่อเทียบกับ 95.5 % ) อย่างไรก็ตาม ,
ในการขาดงานของ aldh ซึ่ง gated ประชากร
เปลี่ยนจากร้อยละ 77.8 ใน mmtv pymt APC / เซลล์ไปยัง
;เพียง 20.3 % ใน mmtv pymt ; apcmin / เซลล์ระบุ
ที่ APC การกลายพันธุ์เพิ่มติ๊ก ( รูปที่ 4 ) กลุ่ม A และ B

แปลผลจากเซลล์เมาส์สายเซลล์มนุษย์เราหันมา mda-mb-157

เป็นเซลล์ ซึ่งเซลล์มะเร็งเต้านมสามลบบรรทัดที่ได้มาจาก
เป็นไหลเยื่อหุ้มปอดจากมะเร็งเต้านมของมนุษย์ metaplastic
[ 25 ]เซลล์ที่เฉพาะเจาะจงนี้ถูกเลือกเพราะ
metaplastic เหมือนเนื้องอกที่พัฒนาขึ้นใน mmtvpymt ; apcmin /
แบบ [ 23 ] เป็นเซลล์ของ APC mda-mb-157
[ 26 27 – ] เราใช้ lentiviral )
shrna กับ APC knockdown และสังเกต 60% ลด
ในการแสดงออกของยีน APC ( รูปที่ 43 ) ใช้วิธีที่เราพบว่าเซลล์สามารถน็อคดาวน์

มีการแสดงออกที่ลดลงทำให้โปรตีนเมมเบรน
และนิวเคลียส ( มะเดื่อ 5B ) การเปลี่ยนแปลงในเซลล์พื้นฐานไม่ได้
APC knockdown เซลล์ ( ข้อมูลไม่แสดง ) .
การรักษาด้วยเคมีบำบัด doxorubicin หรือเป็น , ไม่กระทบการทำ

ใน APC knockdown เส้นเมื่อเทียบกับผู้ปกครองบรรทัด ( รูปที่ 5 แฟ้มเพิ่มเติม 1 ) ,
คล้ายกับผลใน pymt ได้มาแบบ ( รูปที่ 2
)APC knockdown mda-mb-157 เซลล์มีเซลล์ลดลงหลังการรักษาด้วยเคมีบำบัดชนิดหรือ

( รูป 5D และ E , แฟ้มเพิ่มเติม 1 ) ในขณะที่การตอบสนองชนิด
ไม่แสดงก่อนหน้านี้ที่จะขึ้นอยู่กับ
APC สถานะ ( รูปที่ 2B ) , ผลกระทบของ APC บน
( รูปที่ 2B และตอบสนองต่อเคมีบำบัด 5D ) มีความสอดคล้องระหว่างสอง
แบบจำลองระบบ ในทางตรงกันข้ามกับผลในรูปแบบระบบ pymt
( Figsดอกโซรูบิซิน ( 2B ) (
ไม่เปลี่ยนแปลง โดยสถานะของ APC ในระบบเซลล์
mda-mb-157 ( รูปที่ 5D )