The NLFOA procedure was similar to

The NLFOA procedure was similar to that in the classical HIV-1 p24 ELISA (PerkinElmer, Waltham, MA, U.S.A.), except that Streptavidin (SA)-HRP and OPD (o-phenylenediamine dihydrochloride) were replaced with nanoparticle-streptavidin (Innova Biosciences, Cambridge, Cambs, U.K.), biotinylated TurboNuclease (bio-TurboNuclease) and the FLOS substrate (Fig 1). Bio-TurboNuclease was prepared using the ImmunoProbe Biotinylation Kit (Sigma Aldrich, Saint Louis, MO, U.S.A.). The 96-cell polystyrene microplate was coated with the p24 monoclonal antibody (from PerkinElmer HIV-1 p24 ELISA kit) and blocked with blocking buffer (PBS containing 5.0 g/L defatted milk powder). After p24 was added and the plate was incubated at 37°C for two hours, the biotinylated anti-p24 antibody (from PerkinElmer HIV-1 p24 ELISA kit) was added and incubated at 37°C for one hour. Nanoparticle-streptavidin was then added and incubated at 37°C for 40 minutes. After bio-TurboNuclease was added and incubated at 37°C for 40 minutes, FLOS in TurboNuclease reaction buffer (50 mM Tris-HCl, pH 8.0 and 1 mM MgCl2) was added and incubated at 37°C for 40 minutes. The fluorescence intensity was measured on a VICTOR X2 Series Multilabel Plate Reader (PerkinElmer, Waltham, MA, U.S.A.). A washing step with PBS containing 0.2% Tween 20 was performed between each step.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กระบวนการ NLFOA คล้ายกับ p24 เอชไอวี-1 คลาสสิก ELISA (PerkinElmer, Waltham, MA สหรัฐอเมริกา), ยกเว้นว่า Streptavidin (SA) -HRP และผู้ป่วยนอก (โอ phenylenediamine dihydrochloride) ถูกแทนที่ ด้วย nanoparticle streptavidin (เวลาออกหัวใจ เคมบริดจ์ Cambs สหราชอาณาจักร), biotinylated TurboNuclease (ไบโอ-TurboNuclease) และพื้นผิว FLOS (ฟิก 1) ไบโอ-TurboNuclease ถูกเตรียมใช้ชุด Biotinylation ImmunoProbe (Aldrich ซิก Saint Louis, MO สหรัฐอเมริกา) Microplate โฟมเซลล์ 96 ถูกเคลือบ ด้วยแอนติบอดี monoclonal p24 (จากเอชไอวี-1 ของ PerkinElmer p24 ELISA kit) และบล็อกกับบล็อกบัฟเฟอร์ (PBS ประกอบด้วย 5.0 แยกสกัดไขมันทางนมผง) หลังจากเพิ่ม p24 และจานถูก incubated ที่ 37° C สำหรับสองชั่วโมง แอนติบอดี anti-p24 biotinylated (จากเอชไอวี-1 ของ PerkinElmer p24 ELISA kit) เพิ่ม และ incubated ที่ 37° C เป็นเวลาหนึ่งชั่วโมง Nanoparticle streptavidin ที่เพิ่มแล้ว และ incubated ที่ 37° C 40 นาที หลังจาก TurboNuclease ชีวภาพเพิ่ม และ incubated 40 นาทีที่ 37° C, FLOS ในบัฟเฟอร์ปฏิกิริยา TurboNuclease (ทริสเรทติ้ง HCl 50 มม. pH 8.0 และ 1 มม. MgCl2) ถูกเพิ่ม และ incubated 40 นาทีที่ 37° C ความเข้ม fluorescence ถูกวัดในท่าเรือวิคเตอร์ X 2 ชุด Multilabel จานอ่าน (PerkinElmer, Waltham, MA สหรัฐอเมริกา) ขั้นตอนล้าง ด้วย PBS ประกอบด้วย 0.2% Tween 20 ทำระหว่างแต่ละขั้นตอน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ขั้นตอน NLFOA คล้ายกับว่าในการติดเชื้อ HIV-1 p24 วิธี ELISA คลาสสิก (PerkinElmer, เคมบริดจ์, สหรัฐอเมริกา) ยกเว้นว่า streptavidin (SA) -HRP และผู้ป่วยนอก (o-Phenylenediamine dihydrochloride) ถูกแทนที่ด้วยอนุภาคนาโน streptavidin (Innova ชีววิทยาศาสตร์ เคมบริดจ์ Cambs สหราชอาณาจักร), ไบโอติน TurboNuclease (ไบโอ TurboNuclease) และพื้นผิว FLOS (รูปที่ 1) Bio-TurboNuclease ถูกจัดทำขึ้นโดยใช้ ImmunoProbe Biotinylation Kit (ซิกม่าดิช, Saint Louis, MO, USA) ไมโครสไตรีน 96 เซลล์ที่ถูกเคลือบด้วยแอนติบอดี p24 (เอชไอวีจาก PerkinElmer-1 p24 ชุด ELISA) และบล็อกที่มีการปิดกั้นกันชน (พีบีเอสที่มี 5.0 กรัม / ลิตรสกัดนมผง) หลังจาก p24 ถูกบันทึกและแผ่นถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลาสองชั่วโมงแอนติบอดีต่อต้าน p24 biotinylated (เอชไอวีจาก PerkinElmer-1 p24 ชุด ELISA) ถูกบันทึกและบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลาหนึ่งชั่วโมง อนุภาคนาโน streptavidin แล้​​วถูกบันทึกและบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 40 นาที หลังจากชีวภาพ TurboNuclease ถูกบันทึกและบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 40 นาที FLOS ในบัฟเฟอร์ปฏิกิริยา TurboNuclease (50 มิลลิ Tris-HCl ค่า pH 8.0 และ 1 มิลลิ MgCl2) ถูกบันทึกและบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 40 นาที ความเข้มของแสงที่ได้รับการวัด VICTOR X2 ชุด Multilabel อ่านแผ่น (PerkinElmer, เคมบริดจ์, สหรัฐอเมริกา) ขั้นตอนการล้างด้วยพีบีเอสที่มี 0.2% Tween 20 ได้ดำเนินการระหว่างแต่ละขั้นตอน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ขั้นตอน nlfoa คือคล้ายกับว่าในคลาสสิกใน p24 ELISA ( Perkinelmer Waltham , MA , สหรัฐอเมริกา , ) , ยกเว้นว่า streptavidin ( SA ) และ ผู้ป่วยนอก ( o-phenylenediamine ช : ) ถูกแทนที่ด้วยอนุภาคนาโน streptavidin ( Innova ชีววิทยาศาสตร์ เคมบริดจ์ cambs , อังกฤษ ) , ไล turbonuclease ( ไบโอ turbonuclease ) และพื้นผิว ( ร้านเสริมรูปที่ 1 )ไบโอ turbonuclease เตรียมใช้ immunoprobe biotinylation Kit ( ซิกม่า Aldrich นักบุญหลุยส์ โม , สหรัฐอเมริกา ) 96 เซลล์พื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยถูกเคลือบด้วยพอลิสไตรีน p24 โมโนโคลนอลแอนติบอดี ( จาก Perkinelmer HIV-1 p24 ชุด ELISA ) และบล็อกกับบล็อกบัฟเฟอร์ ( PBS ) 5.0 กรัม / ลิตร สกัดผงนม ) หลังจาก p24 เพิ่มและจานถูกบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 2 ชั่วโมงส่วนไล p24 แอนติบอดี ( จาก Perkinelmer HIV-1 p24 ชุด ELISA ) คือการเพิ่มและบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง สำหรับ streptavidin ถูกเพิ่มเข้าไปแล้วบ่มที่ 37 องศา C นาน 40 นาที หลังจากที่ไบโอ turbonuclease เพิ่มบ่มที่ 37 องศา C นาน 40 นาที ร้านเสริมในบัฟเฟอร์ปฏิกิริยา turbonuclease ( 50 มม. โดย HCl , pH 8.0 และ 1 มิลลิเมตร MgCl2 ) คือการเพิ่มและบ่มที่ 37 องศา C นาน 40 นาทีเรืองแสงเข้มวัดบน Victor x2 ชุด multilabel จานอ่าน ( Perkinelmer Waltham , MA , สหรัฐอเมริกา , ) ล้างขั้นตอนกับ PBS ที่มี 0.2 tween 20 แสดงระหว่างแต่ละขั้นตอน