For cDNAproduction, 5 mg RNA per re

For cDNA
production, 5 mg RNA per reaction was reverse transcribed using the
RevertAid H2 first strand cDNA synthesis kit (Fermentas) and
oligo(dT)18 primer according to the instructions provided by the
manufacturer. The RT-PCR amplification programne consisted of
1 min initial denaturation (94 uC), 25 cycles of amplification [1 min at
94 uC, 1 min at the primer-specific annealing temperature (Tm), 1 min
at 72 uC] and a final extension period of 7 min at 72 uC. Chitinase
gene-specific primers and their Tms were as follows: subgroup A
chitinase gene, ech42 according to Seidl et al. (2006), Tm 60 uC;
subgroup B chitinase gene, chit33 (fw 59-GCTCCTCAGTGCTTCTTCC-
39 and rv 59-GGGAATGCCGACAAGAAGC-39); subgroup C
chitinase genes, Tm 60 uC (Matarese, 2010); tac1, tac4 and tac8, Tm
57 uC, (Gruber et al., 2011); N-acetylglucosaminidases, nag1, Tm 54 uC
and nag2 Tm 60 uC (Seidl et al., 2006). The tef1 gene, encoding
translation elongation factor 1-a, and the housekeeping gene gpdh
(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase) were used as controls. All
the primers employed in this experiment were designed on T. atroviride
sequences due to the lack of information about the T. gamsii genome.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สำหรับ cDNAผลิต อาร์เอ็นเอมิลลิกรัม 5 ต่อปฏิกิริยาถูกย้อนทับศัพท์โดยใช้การRevertAid H2 แรกสแตรนด์ cDNA สังเคราะห์ชุด (Fermentas) และรองพื้น 18 oligo (dT) ตามคำแนะนำผู้ผลิต Programne ขยาย RT-PCR ประกอบด้วย1 นาทีเริ่มต้น denaturation (94 uC) วงจร 25 การขยาย [1 นาทีที่94 uC, 1 นาทีที่อุณหภูมิหลอมของเฉพาะสีรองพื้น (Tm) 1 นาทีที่ 72 uC] และสุดท้ายขยายระยะเวลา 7 นาทีที่ 72 uC Chitinaseไพรเมอร์ของยีนเฉพาะและของ Tms มีดังนี้: กลุ่มย่อย Achitinase ยีน ech42 ตาม Seidl et al. (2006), uC Tm 60กลุ่มย่อย B chitinase ยีน chit33 (fw: 59 - GCTCCTCAGTGCTTCTTCC -39 และ rv 59-GGGAATGCCGACAAGAAGC-39); กลุ่มย่อย Cchitinase ยีน Tm 60 uC (Matarese, 2010); tac1, tac4 และ tac8, TmuC 57, (Gruber et al., 2011); N-acetylglucosaminidases, nag1, uC Tm 54และ nag2 Tm 60 uC (Seidl et al., 2006) ยีน tef1 เข้ารหัสปัจจัย elongation แปล 1 a และ gpdh ยีนทำความสะอาด(glyceraldehyde-3-ฟอสเฟต dehydrogenase) ใช้เป็นตัวควบคุม ทั้งหมดไพรเมอร์ทำงานในการทดลองนี้ได้รับการออกแบบ atroviride ต.ลำดับเนื่องจากการขาดข้อมูลเกี่ยวกับจีโนม gamsii ต.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สำหรับ cDNA
ผลิต 5 มอาร์เอ็นเอต่อปฏิกิริยาจะถูกคัดลอกกลับใช้
RevertAid H2 สาระชุดแรกสังเคราะห์ cDNA (Fermentas) และ
Oligo (dT) 18 ไพรเมอร์ตามคำแนะนำที่ได้รับจาก
ผู้ผลิต RT-PCR programne ขยายประกอบด้วย
1 นาที denaturation เริ่มต้น (94 UC) 25 รอบของการขยาย [1 นาทีที่
94 UC, 1 นาทีที่อุณหภูมิการหลอมรองพื้นเฉพาะ (TM) 1 นาที
ที่ 72 UC] และเป็นครั้งสุดท้าย ขยายระยะเวลา 7 นาทีที่ 72 UC ไคติเนส
ไพรยีนที่เฉพาะเจาะจงและ Tms ของพวกเขามีดังนี้กลุ่มย่อย
ยีนไคติเนส, ech42 ตาม Seidl และคณะ (2006), Tm 60 UC;
กลุ่มย่อยยีนไคติเน B, chit33 (FW 59 GCTCCTCAGTGCTTCTTCC-
39 และ rv 59 GGGAATGCCGACAAGAAGC-39); กลุ่มย่อย C
ยีนไคติเนส, Tm 60 UC (Matarese, 2010); tac1, tac4 และ tac8, Tm
57 UC (กรูเบอร์และคณะ, 2011.); N-acetylglucosaminidases, nag1, Tm 54 UC
และ nag2 Tm 60 UC (Seidl et al., 2006) ยีน tef1 การเข้ารหัส
การยืดตัวแปลปัจจัยที่ 1 และ gpdh ยีนทำความสะอาด
(dehydrogenase glyceraldehyde-3-ฟอสเฟต) ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุม ทั้งหมด
ไพรเมอร์ที่ใช้ในการทดลองนี้ได้รับการออกแบบใน T. atroviride
ลำดับเนื่องจากขาดข้อมูลเกี่ยวกับจีโนม T. gamsii

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สำหรับการผลิต cDNA
RNA 5 มิลลิกรัม ต่อปฏิกิริยาย้อนกลับ และใช้
revertaid H2 แรกเกลียวยีนสังเคราะห์ชุด ( fermentas ) และ โอลิโก
( DT ) 18 รองพื้นตามคำแนะนำที่ให้โดย
ผู้ผลิต programne ( RT-PCR )
1 ( เริ่มต้นมิน ( 94 UC ) , 25 รอบ นาทีที่ 94 ( [ 1
UC ,1 นาทีที่รองพื้นเฉพาะอุณหภูมิการอบอ่อน ( TM ) , 1 นาทีที่ 72
UC ] และสุดท้ายขยายระยะเวลา 7 นาทีที่ 72 เป็นต้น . - ชนิดของยีนที่เฉพาะเจาะจง
งานดังนี้ : กลุ่มย่อยเป็น
( ยีน ech42 ตาม seidl et al . ( 2006 ) , TM 60 เป็นต้น ;
กลุ่มย่อย B ยีนไคติเนส chit33 ( FW , 59-gctcctcagtgcttcttcc -
39 และ RV 59-gggaatgccgacaagaagc-39 ) ; กลุ่มย่อย C
- ยีนTM 60 เป็นต้น ( matarese 2010 ) ; tac1 tac4 tac8 , และ TM
57 UC ( Gruber et al . , 2011 ) n-acetylglucosaminidases nag1 TM , 54 และ uc
nag2 TM 60 เป็นต้น ( seidl et al . , 2006 ) การ tef1 ยีนเข้ารหัส
แปลยืดตัวปัจจัยกระเทียมดอง และแม่บ้าน ยีน gpdh
( glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase ) ที่ใช้ควบคุม ทั้งหมดที่ใช้ในการทดลองนี้ด้วย

atroviride ออกแบบใน ต.ลำดับ เนื่องจากการขาดข้อมูลเกี่ยวกับจีโนม ต. gamsii .