Biological control, that is, the ap

Biological control, that is, the application of microbial organisms
to control disease-causing agents, has gained importance as
an alternative or complementary approach to fungicides. In this
respect, the genus Trichoderma constitutes a promising pool of
organisms with potential for control of phytopathogenic fungi
(Harman et al., 2004; Laila et al., 2014). Published data show that
78% of the functionally characterized known genes associated with
antagonism were found in Trichoderma species (Daguerre et al.,
2014). Forty-four percent of the genes identified are related to
mycoparasitism, 26% to antibiosis, 12% related to induced systemic
resistance (ISR), 11% to signaling/genetic reprogramming and 5% to
competition. Among the Trichoderma species used in biological
control, those belonging to the Trichoderma harzianum species are
the most studied. The interaction between T. harzianum and phytopathogenic
fungi is characteristically mycoparasitic involving
growth along the host hyphae, production of appressoria-like
structures, coiling, and production of cell wall-degrading enzymes
(CWDEs) (Almeida et al., 2007). Among the CWDEs chitinases,
b-1,3/1,6-glucanases and proteases have been found to be directly
involved in the mycoparasitic interaction between T. harzianum
and its hosts. In general, the cell walls of higher fungi are composed
of linear polymers of b-1,4-N-acetylglucosamine (chitin),
a-1,3-glucans, b-1,3- and b-1,6-glucans, and other proteins, with
extensive cross-linking between these components (Adams, 2004).
http://dx.doi.org/10.1016/j.biocontrol.2015.12.013
1049-9644/
2015 Elsevier Inc. All rights reserved.
⇑ Corresponding author.
E-mail address: [e-mail] (C.J. Ulhoa).
Biological Control 95 (2016) 1–4
Contents lists available at ScienceDirect
Biological Control
journal homepage: www.elsevier.com/locate/ybcon
Our research group has developed several approaches to the
study of the interactions between T. harzianum and certain phytopathogenic
fungi, using methods based on proteomics
(Monteiro et al., 2010), EST libraries (Steindorff et al., 2012), subtractive
library hybridization (Vieira et al., 2013), and RNA-seq
libraries (Steindorff et al., 2014). In these works we identified several
glycosyl hydrolases that were observed only under
mycoparasitism-related conditions, including chitinases, endo-b-
1,3-glucanase, endo-b-1,3(4)-glucanase, a-1,3-glucanases, a-Larabinofuranosidase
and a-1,2-mannosidase. These enzymes may
be involved in the degradation of the amorphous fraction of the
fungal cell wall, but a-1,2-mannosidase may also be involved in
the deglycosylation of glycoproteins present in the fungal cell wall.
In this article, we report expression analysis data for the a-1,2-
mannosidase gene from T. harzianum during interaction with
Fusarium solani, Fusarium oxysporum and Sclerotinia sclerotiorum.real-time PCR. Reactions were performed in the iQ5 real-time
PCR system (Bio-Rad). Each reaction (20 ll) contained 10 ll of
MAXIMA SYBR-green PCR Master mix (Fermentas), forward
(MANF:GCTGTTGTCAAAGATGCAGAAG) and reverse (MANR:
CTTGTACGGGAACGTAGTTGAG) primers (500 nM each), cDNA template,
and nuclease-free water. PCR cycling conditions were 10 min
at 95 C (1 cycle), 15 s at 95 C followed by 1 min at 60 C (40
cycles), and a melting curve of 1 min at 95 C followed by 30 s at
55 C with a final ramp to 95 C with continuous data collection
(1 cycle) to test for primer dimers and non-specific amplification.
The a-actin transcript was used as an internal reference to normalize
the amount of total RNA present in each reaction. The
expression levels of the genes were calculated from the threshold
cycle according to the 2DDCT method (Livak and Schmittgen,
2001). The experiment was conducted with three repetitions for
each sample and results were compared by one-way ANOVA with
Dunnett’s post test (a = 5%) to analyze the differences between
conditions related to controls using GraphPad Prism 5 for
Windows.
3.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ควบคุม คือ การประยุกต์ใช้จุลินทรีย์สิ่งมีชีวิตการควบคุมทำให้เกิดโรคตัวแทน ได้รับความสำคัญเป็นมีทางเลือก หรือยาเสริมวิธีการเชื้อรา ในที่นี้เคารพ สกุล Trichoderma ถือกลุ่มสัญญาสิ่งมีชีวิต มีศักยภาพในการควบคุมเชื้อรา phytopathogenic(Harman และ al. 2004 ไลลา et al. 2014) เผยแพร่ข้อมูลแสดงว่า78% ของยีนรู้จักลักษณะหน้าที่ที่เกี่ยวข้องกับantagonism พบในสายพันธุ์ Trichoderma (Daguerre et al.,2014) สี่สิบสี่เปอร์เซ็นต์ของยีนที่พบเกี่ยวข้องกับmycoparasitism, 26% antibiosis, 12% ที่เกี่ยวข้องกับเกิดระบบความต้านทาน (ISR), 11% การ reprogramming สัญญาณ/พันธุกรรมและ 5% เป็นการแข่งขัน ระหว่างพันธุ์ Trichoderma ที่ใช้ในทางชีวภาพควบคุม Trichoderma harzianum สายพันธุ์ที่มีส่วนใหญ่ศึกษา การโต้ตอบ ระหว่าง T. harzianum และ phytopathogenicเชื้อรานั้นจะเกี่ยวข้องกับ mycoparasiticเจริญเติบโตตาม hyphae โฮสต์ ผลิต appressoria เช่นโครงสร้าง ขด และผลิตเอนไซม์ย่อยสลายผนังเซลล์(CWDEs) (Almeida et al. 2007) จาก CWDEs chitinasesb-1, 3/ปริ มาณฟลักซ์ 1.6-glucanases และ proteases พบได้จะโดยตรงเกี่ยวข้องในการโต้ตอบ mycoparasitic ระหว่าง T. harzianumและโฮสต์ของ ทั่วไป ประกอบด้วยผนังเซลล์ของเชื้อราสูงโพลิเมอร์เชิงเส้นของ b-1, 4-N-acetylglucosamine (ไคทิน),เป็น 1, 3-glucans, b-1, 3 - และ b-ปริมาณฟลักซ์ 1.6-glucans และ โปรตีนอื่น ๆ มีครอบคลุมเชื่อมโยงระหว่างส่วนประกอบเหล่านี้ (Adams, 2004)http://dx.doi.org/10.1016/j.biocontrol.2015.12.0131049-9644 / 2015 Elsevier อิงค์ สงวนลิขสิทธิ์ผู้ได่⇑อีเมล์: [e-mail] (C.J. Ulhoa)ควบคุม 95 (2016) 1-4เนื้อหารายการ ScienceDirectการควบคุมทางชีวภาพหน้าแรกของสมุดรายวัน: www.elsevier.com/locate/ybconกลุ่มวิจัยของเราได้พัฒนาวิธีการต่าง ๆ เพื่อการการศึกษาปฏิสัมพันธ์ระหว่าง T. harzianum บาง phytopathogenicเชื้อรา ใช้ตามรตีโอมิกส์(Monteiro et al. 2010), EST ไลบรารี (Steindorff et al. 2012), แม่ไลบรารี hybridization (Vieira et al. 2013), และ RNA seqไลบรารี (Steindorff et al. 2014) ในการทำงานเหล่านี้ เราระบุหลายhydrolases glycosyl ที่ข้อสังเกตเท่านั้นภายใต้mycoparasitism-เกี่ยวกับสภาพแวดล้อม รวมทั้ง chitinases เอ็นโด-b -1, 3 glucanase เอ็นโด-b-1, 3 (4) -glucanase, a-1, 3-glucanases, a-Larabinofuranosidaseและ a-1, 2-mannosidase เอนไซม์เหล่านี้อาจใช้ในการย่อยสลายของเศษส่วนไปของการผนังเซลล์เชื้อรา แต่เป็น 1, 2-mannosidase อาจจะมีในdeglycosylation ของไกลโคโปรตีนที่อยู่ในผนังเซลล์เชื้อราในบทความนี้ เราได้รายงานข้อมูลวิเคราะห์นิพจน์สำหรับการเป็น-1, 2 -ยีน mannosidase จาก T. harzianum ในระหว่างการโต้ตอบกับFusarium solani, Fusarium oxysporum และ PCR sclerotiorum.real เวลา Sclerotinia ปฏิกิริยาดำเนินใน iQ5 แบบเรียลไทม์ระบบ PCR (Bio Rad) แต่ละปฏิกิริยา (20 ll) อยู่ 10 จะของแมกสีเขียว SYBR PCR หลักผสม (Fermentas), ไปข้างหน้า(MANF:GCTGTTGTCAAAGATGCAGAAG) และย้อนกลับ (MANR:ไพรเมอร์ CTTGTACGGGAACGTAGTTGAG) (500 nM แต่ละ), cDNA แม่และน้ำฟรี nuclease สภาพขี่จักรยาน PCR ก็ 10 นาทีที่ 95 C (1 รอบ), 15 s ที่ 95 C ตาม ด้วยนาทีที่ 60 C (40รอบ), และเส้นโค้งหลอม 1 นาทีที่ 95 C ตาม ด้วย 30 s ที่55 C มีทางลาดสุดท้ายถึง 95 C ด้วยการรวบรวมข้อมูลอย่างต่อเนื่อง(1 รอบ) การทดสอบสำหรับรองพื้น dimers และขยายเฉพาะไม่เสียงบรรยายเป็นแอกตินใช้เป็นการอ้างอิงภายในปกติจำนวนของ RNA ทั้งหมดที่อยู่ในแต่ละปฏิกิริยา การระดับการแสดงออกของยีนได้คำนวณจากขีดจำกัดวนตามวิธีของ DDCT 2 (Livak และ Schmittgen2001) ดำเนินการทดลองกับทำซ้ำสามสำหรับแต่ละอย่างและผลลัพธ์ถูกเปรียบเทียบ โดยทางเดียว ANOVA ด้วยการทดสอบของ Dunnett โพสต์ (5%) การวิเคราะห์ความแตกต่างระหว่างเงื่อนไขที่เกี่ยวข้องกับการควบคุมโดยใช้ 5 ปริซึม GraphPadWindows3

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การควบคุมทางชีวภาพที่เป็นแอพลิเคชันของสิ่งมีชีวิตของจุลินทรีย์
ในการควบคุมตัวแทนก่อให้เกิดโรคได้รับความสำคัญเป็น
ทางเลือกหรือวิธีการเสริมเพื่อฆ่าเชื้อรา ในการนี้
เคารพจำพวกเชื้อรา Trichoderma ถือว่าสระว่ายน้ำมีแนวโน้มของ
สิ่งมีชีวิตที่มีศักยภาพสำหรับการควบคุมของเชื้อราสาเหตุโรคพืช
(Harman et al, 2004;. ไลลา et al, 2014). ข้อมูลที่เผยแพร่แสดงให้เห็นว่า
78% ของลักษณะการทำงานของยีนที่รู้จักกันที่เกี่ยวข้องกับ
การเป็นปรปักษ์กันถูกพบในสายพันธุ์เชื้อรา Trichoderma (Daguerre et al.,
2014) สี่สิบสี่เปอร์เซ็นต์ของยีนที่ระบุเกี่ยวข้องกับ
mycoparasitism, 26% Antibiosis 12% ที่เกี่ยวข้องกับระบบเหนี่ยวนำให้เกิด
ความต้านทาน (ISR) 11% ส่งสัญญาณ / reprogramming ทางพันธุกรรมและ 5% ในการ
แข่งขัน ท่ามกลางสายพันธุ์เชื้อรา Trichoderma ใช้ในทางชีวภาพ
ควบคุมผู้ที่อยู่ในสายพันธุ์เชื้อรา Trichoderma harzianum มี
ศึกษามากที่สุด การทำงานร่วมกันระหว่าง T. harzianum และโรคพืช
เชื้อราคือลักษณะ mycoparasitic ที่เกี่ยวข้องกับ
การเจริญเติบโตของเส้นใยพร้อมเป็นเจ้าภาพการผลิต appressoria เหมือน
โครงสร้างขดลวดและการผลิตของเซลล์เอนไซม์ย่อยสลายผนัง
(CWDEs) (Almeida et al., 2007) ในบรรดา chitinases CWDEs,
B-1,3 / 1,6-glucanases และโปรตีเอสได้รับพบว่าจะโดยตรง
มีส่วนร่วมในการปฏิสัมพันธ์ระหว่าง mycoparasitic เชื้อราไตรโคเด
และเจ้าภาพ โดยทั่วไปผนังเซลล์ของเชื้อราสูงที่มีองค์ประกอบ
ของโพลิเมอร์เชิงเส้นของ B-1,4-N-acetylglucosamine (ไคติน),
A-1,3-glucans, B-1,3- และ B-1,6-glucans และโปรตีนอื่น ๆ ที่มี
ที่กว้างขวางข้ามการเชื่อมโยงระหว่างองค์ประกอบเหล่านี้ (อดัมส์, 2004).
http://dx.doi.org/10.1016/j.biocontrol.2015.12.013
1049-9644 /? 2015 เอลส์อิงค์สงวนลิขสิทธิ์.
⇑ผู้รับผิดชอบ.
E-mail address: [e-mail] (CJ Ulhoa).
การควบคุมทางชีวภาพ 95 (2016) 1-4
สารบัญรายการสามารถดูได้ที่ ScienceDirect
การควบคุมทางชีวภาพ
ในหน้าแรกของสมุดรายวัน: www.elsevier COM / ค้นหา / ybcon
กลุ่มวิจัยของเราได้มีการพัฒนาหลายวิธีที่จะ
ศึกษาปฏิสัมพันธ์ระหว่าง T. harzianum และโรคพืชบางชนิด
เชื้อราโดยใช้วิธีการขึ้นอยู่กับโปรตีน
(มอนเต et al., 2010), ห้องสมุด EST (Steindorff et al., 2012 ) ลด
การผสมพันธุ์ห้องสมุด (Vieira et al., 2013) และ RNA-seq
ห้องสมุด (Steindorff et al., 2014) ในงานนี้เราระบุหลาย
hydrolases glycosyl ที่ถูกเพียงข้อสังเกตภายใต้
เงื่อนไข mycoparasitism ที่เกี่ยวข้องรวมทั้ง chitinases, Endo-B-
1,3-glucanase, Endo-B-1,3 (4) -glucanase A-1,3- glucanases A-Larabinofuranosidase
และ A-1,2-mannosidase เอนไซม์เหล่านี้อาจ
จะมีส่วนร่วมในการย่อยสลายของเศษสัณฐานของ
ผนังเซลล์ของเชื้อรา แต่-1,2-mannosidase นอกจากนี้ยังอาจมีส่วนร่วมใน
deglycosylation ของไกลโคโปรตีนที่อยู่ในผนังเซลล์ของเชื้อรา.
ในบทความนี้เรารายงานการวิเคราะห์การแสดงออก ข้อมูลสำหรับ A-1,2-
ยีน mannosidase จากเชื้อราไตรโคเดระหว่างการมีปฏิสัมพันธ์กับ
เชื้อรา Fusarium solani, เชื้อรา Fusarium oxysporum และ Sclerotinia sclerotiorum.real-time PCR ปฏิกิริยาที่ได้ดำเนินการใน iQ5 เวลาจริง
ระบบ PCR (Bio-Rad) แต่ละปฏิกิริยา (20 LL) มี 10 LL ของ
MAXIMA? สีเขียว SYBR PCR โทผสม (Fermentas) ไปข้างหน้า
(MANF: GCTGTTGTCAAAGATGCAGAAG) และย้อนกลับ (MANR:
CTTGTACGGGAACGTAGTTGAG) ไพรเมอร์ (500 นาโนเมตรในแต่ละ), ยีนแม่
และน้ำ Nuclease ฟรี PCR เงื่อนไขการขี่จักรยาน 10 นาที
ที่ 95 C (1 รอบ) 15 วินาทีที่ 95 C ตามด้วย 1 นาทีที่ 60 C (40
รอบ) และเส้นโค้งการละลายของ 1 นาทีที่ 95 C ตามด้วย 30 วินาทีที่
55 C ด้วย ทางลาดสุดท้ายถึง 95 C ที่มีการเก็บรวบรวมข้อมูลอย่างต่อเนื่อง
(1 รอบ) ในการทดสอบสำหรับ dimers ไพรเมอร์และเครื่องขยายเสียงที่ไม่เฉพาะเจาะจง.
A-โปรตีนหลักฐานถูกนำมาใช้เป็นข้อมูลอ้างอิงภายในที่จะปรับ
ปริมาณของ RNA ทั้งหมดที่มีอยู่ในแต่ละปฏิกิริยา
ระดับการแสดงออกของยีนจะถูกคำนวณจากเกณฑ์
วงจรตามที่ 2? วิธี DDCT (Livak และ Schmittgen,
2001) ทำการทดลองกับสามซ้ำสำหรับ
แต่ละตัวอย่างและผลที่ได้มาเปรียบเทียบโดยหนึ่งใน way ANOVA กับ
Dunnett โพสต์ของการทดสอบ (A = 5%) ในการวิเคราะห์ความแตกต่างระหว่าง
เงื่อนไขที่เกี่ยวข้องกับการควบคุมการใช้ปริซึม GraphPad 5
ของ Windows.
3