The methanol extract of O. rigidum

The methanol extract of O. rigidum was subjected to Sephadex LH-20 gel permeation chromatography followed by flash reversed-phase C18 chromatography.
A 1H NMR spectrum of the major fraction that was obtained from the C18 flash chromatography column (20% H2O in MeOH) identified resonances associated with aromatic, anomeric, alcoholic, and acetate protons.
This fraction was further purified using bonded-phase NH2 HPLC to give two resolved peaks.
The 1H NMR spectra of these two peaks both contained signals observed for the initial fraction, but had subtle differences in the anomeric region of their spectra.
Further, there were a series of sharp singlets between 1.96 and 2.05 ppm, which were attributed to acetate protons.
Although these fractions appeared as single peaks in their chromatograms, the 1H NMR spectra indicated that they were not pure compounds. The two fractions were subjected to an LC-MSTOF experiment to determine the molecular weight of the apparent mixture.
Both fractions appeared as single peaks in the HPLC chromatogram and gave m/z values (negative ESI) of 1185.3568 (tR = 4.40 min) and 1185.3470 (tR = 4.70 min).
These molecular weights indicate identical molecular formulas (M − 1) of C52H65O33 (calculated 1185.3509). On the basis of the observed 1H NMR spectra, mass spectrum, and HPLC chromatogram it was concluded that the two separable peaks represented regioisomeric compounds.
Further, the presence of four peaks in the 1H NMR spectra of the two compounds between 1.96 and 2.05 ppm suggested that the separable peaks were a set of inseparable regioisomers that differed in the position of the
acetate groups.
Further attempts to purify these peaks using other forms of bonded-phase HPLC were fruitless.
Attempting to solve the structure of the two compounds as mixtures of acetates was not viable because the mixture gave a spectrum that could not be interpreted.
To circumvent this problem, we subjected the compounds to mild base hydrolysis.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สารสกัดเมทานอลของโอ rigidum ถูกยัดเยียดให้ Sephadex LH 20 เจลซึม chromatography ตาม chromatography C18 ระยะกลับแฟลช การสเปกตรัม NMR 1H ของเศษส่วนใหญ่ที่ได้รับจากคอลัมน์ C18 chromatography แฟลช (20% H2O ในทานอ) ระบุ resonances ที่เกี่ยวข้องกับหอม anomeric แอลกอฮอล์ acetate และโปรตอน เศษส่วนนี้ได้เพิ่มเติมบริสุทธิ์โดยใช้ HPLC NH2 ระยะถูกผูกมัดให้ยอดสองแก้ไข แรมสเป็คตรา NMR 1H ของสัญญาณเหล่านี้สองยอดเขาทั้งสองอยู่สังเกตสำหรับเศษส่วนเริ่มต้น แต่มีแคว้น anomeric แรมสเป็คตราของนอร์เวย์ เพิ่มเติม มีชุดของ singlets คมระหว่าง 1.96 และ 2.05 ppm ซึ่งถูกบันทึก acetate โปรตอน ถึงแม้ว่าเศษเหล่านี้ปรากฏเป็นยอดเดียวใน chromatograms ของพวกเขา แรมสเป็คตรา NMR 1H ระบุว่า พวกเขาไม่ได้สารที่บริสุทธิ์ ส่วนสองถูกต้องเพื่อการทดลอง LC MSTOF เพื่อกำหนดน้ำหนักโมเลกุลของส่วนผสมที่ชัดเจน เศษส่วนทั้งสองปรากฏเป็นยอดเดียวใน HPLC chromatogram และให้ค่า m/z (ESI ลบ) ของ 1185.3568 (tR = 4.40 นาที) และ 1185.3470 (tR = 4.70 min)น้ำหนักโมเลกุลเหล่านี้บ่งชี้เหมือนโมเลกุลสูตร (M − 1) ของ C52H65O33 (คำนวณ 1185.3509) โดยสังเกต 1 H NMR แรมสเป็คตรา คลื่นใหญ่ และ HPLC chromatogram จะถูกสรุปว่า สองแห่ง separable แสดงสาร regioisomeric เพิ่ม เติม ของยอดสี่ในแรมสเป็คตรา NMR 1H สารสองระหว่าง 1.96 และ 2.05 ppm แนะนำว่า ยอด separable ได้ชุดของ regioisomers ต่อที่แตกต่างในตำแหน่งกลุ่ม acetate ความพยายามต่อไปต้องทำยอดเขาเหล่านี้โดยใช้ HPLC ระยะถูกผูกมัดในรูปแบบอื่น ๆ ได้ที่ fruitless พยายามที่จะแก้ไขโครงสร้างของสารประกอบ 2 เป็นน้ำยาผสมของ acetates ไม่ได้เนื่องจากส่วนผสมให้สเปกตรัมที่ไม่สามารถแปลผล เพื่อหลีกเลี่ยงปัญหานี้ เราต้องสารประกอบไฮโตรไลซ์พื้นฐานอ่อน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สารสกัดเมทานอลของ rigidum ทุมได้ภายใต้การ Sephadex LH-20 โคเจลซึมผ่านตามด้วยแฟลชกลับเฟสโค C18.
สเปกตรัม 1H NMR ของส่วนที่สำคัญที่ได้รับจากคอลัมน์โคแฟลช C18 (20% H2O ในเมธานอล) resonances ระบุเกี่ยวข้องกับหอม anomeric, แอลกอฮอล์และโปรตอนอะซิเตท.
ส่วนนี้ได้บริสุทธิ์ต่อไปโดยใช้ผูกมัดเฟส NH2 HPLC เพื่อที่จะให้สองยอดการแก้ไข.
สเปกตรัม 1H NMR ของทั้งสองยอดเขาทั้งสองมีสัญญาณที่สังเกตสำหรับส่วนเริ่มต้น แต่มี แตกต่างที่ลึกซึ้งในภูมิภาค anomeric ของสเปกตรัมของพวกเขา.
นอกจากนี้ยังมีชุดของ singlets คมระหว่าง 1.96 และ 2.05 ppm ซึ่งถูกนำมาประกอบกับโปรตอนอะซิเตต.
แม้ว่าเศษส่วนเหล่านี้ปรากฏยอดเดียวกับในโครมาโตของพวกเขา NMR สเปกตรัม 1H ระบุว่าพวกเขา ไม่ได้สารบริสุทธิ์ ทั้งสองเศษส่วนถูกยัดเยียดให้การทดลอง LC-MSTOF เพื่อตรวจสอบน้ำหนักโมเลกุลของส่วนผสมที่เห็นได้ชัด.
เศษส่วนทั้งสองดูเหมือนจะเป็นยอดเดียวใน chromatogram HPLC และให้ค่าเมตร / z (ลบ ESI) ของ 1185.3568 (TR = 4.40 นาที) และ . 1185.3470 (TR = 4.70 นาที)
เหล่านี้บ่งบอกถึงน้ำหนักโมเลกุลสูตรโมเลกุลเหมือนกัน (M - 1) ของ C52H65O33 (คำนวณ 1185.3509) บนพื้นฐานของการสังเกตสเปกตรัม 1H NMR สเปกตรัมมวลและ HPLC chromatogram มันก็สรุปได้ว่าสองยอดแยกเป็นตัวแทนสาร regioisomeric.
นอกจากนี้การปรากฏตัวของสี่ยอดในสเปกตรัม 1H NMR ของทั้งสองสารประกอบระหว่าง 1.96 และ 2.05 ppm แนะนำ ที่ยอดเขาแยกเป็นชุดของ regioisomers
แยกออกไม่ได้ที่แตกต่างกันในตำแหน่งของกลุ่มอะซิเตท.
นอกจากนี้ความพยายามในการชำระล้างยอดเหล่านี้โดยใช้รูปแบบอื่น ๆ HPLC ผูกมัดเฟสก็ไร้ผล.
ความพยายามที่จะแก้ปัญหาโครงสร้างของสารสองเป็นสารผสมของอะซีเตท ไม่ได้ทำงานเพราะส่วนผสมให้คลื่นความถี่ที่ไม่สามารถตีความ.
เพื่อหลีกเลี่ยงปัญหานี้เรายัดเยียดสารเพื่อการย่อยสลายฐานที่ไม่รุนแรง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สารสกัดจาก . rigidum เป็นตัวแยก lh-20 เจลซึมโครมตามด้วยแฟลช reversed-phase c18 โครมาโทกราฟี
a 1H NMR สเปกตรัมของสาขาเศษที่ได้จาก c18 แฟลชคอลัมน์โครมาโตกราฟฟี ( H2O 20% ปริมาณ ) ระบุ resonances ที่เกี่ยวข้องกับหอม anomeric แอลกอฮอล์และอะซิเตทโปรตอน .
ส่วนนี้เพิ่มเติมบริสุทธิ์ใช้ผูกมัด nh2 เฟส HPLC ให้สองแก้ไขยอด .
1 H NMR สเปกตรัมของเหล่านี้สองยอด ทั้งมีสัญญาณว่าสัดส่วนเริ่มต้น แต่ยังมีความแตกต่างที่ลึกซึ้งในภูมิภาค anomeric Spectra ของพวกเขา
เพิ่มเติม มีชุดเสื้อกล้ามคมระหว่างกันและ 2.05 มิลลิกรัม ซึ่งเกิดจากอะซิเตทโปรตอน .
แม้ว่าเศษส่วนเหล่านี้ปรากฏเป็นยอดเดียวในกลิ่นของพวกเขา , 1H NMR สเปกตรัม พบว่าพวกเขาไม่ได้เป็นสารประกอบบริสุทธิ์ สองเศษส่วนที่ถูกภายใต้การ lc-mstof ทดลองเพื่อหาน้ำหนักโมเลกุลของส่วนผสมชัดเจน
ทั้งเศษส่วนปรากฏเป็นยอดเดียวใน HPLC chromatogram และให้ M / Z ค่า ( ESI ลบ ) ของ 1185.3568 ( TR = 4.40 นาที ) และเพลง .3470 ( TR = 4.70 min ) .
น้ำหนักโมเลกุลเหล่านี้บ่งชี้สูตรโมเลกุลเหมือนกัน ( m − 1 ) c52h65o33 ( คำนวณ 1185.3509 ) บนพื้นฐานของการตรวจสอบ 1H NMR สเปกตรัมสเปกตรัมมวลและ HPLC chromatogram พบว่าสองแยกยอดแสดง regioisomeric สารประกอบ
เพิ่มเติม การปรากฏตัวของสี่ยอดใน 1H NMR สเปกตรัมของสารประกอบสองชนิดระหว่าง 3% และ 205 ppm พบว่ายอดแยกเป็นชุดของซี้ regioisomers ที่แตกต่างกันในตำแหน่งของ
, กลุ่ม
พยายามต่อไปเพื่อชำระยอดเหล่านี้โดยใช้รูปแบบอื่น ๆของผูกเฟส HPLC ก็ไร้ผล .
พยายามแก้โครงสร้างของสารประกอบสองชนิดเป็นสารผสมของอะซีเตทไม่ได้เพราะส่วนผสมให้สเปกตรัมที่ไม่สามารถตีความได้