O157:H7, the ail gene in Y. enterocolitica and the nuc gene in S. aureus were suitable as selected target genes for each
of the five pathogens of the pork, respectively. In this study, a set of primers of the five pathogens were designed and adapted to the multiplex assay. The BLAST results showed that non-targeted organisms did not contain
the primer sequences of the target organisms. Primer specificities were thoroughly tested by the m-PCR method
[10] which demonstrated their suitability for detecting these five major pathogens. For the m-PCR assay to be successful, the relative concentrations of primers, PCR buffer concentration, the balance between magnesium and DNA, cycling temperatures, amounts of template DNA and Taq DNA polymerase are very important [38]. In this research, the reaction
conditions (Mg2? concentration, Taq DNA polymerase concentration, Buffer concentration and concentration of
primers) were taken from the literature [24]. The number of PCR cycles and annealing temperature were optimized in
the study. A potential advantage of the m-PCR is that it has a high of sensitivity. The experiments showed that a detection
limit using the m-PCR was 103 cfu/mL for the simultaneous detection of Salmonella, E. coli O157:H7, S. aureus, Y. enterocolitica and L. monocytogenes. The m-PCR systems compare favorably with other monoplex PCR-based assays in which a detection sensitivity of 10 cfu/mL [10] of Salmonella, less than 10 cfu/mL [39] of Y. enterocolitica, 10 cfu/mL of E. coli O157:H7 [10], less than 10 cfu/mL [40] of L. monocytogenes and 10 cfu/mL [41] of S. aureus, have been reported.
Although the infectious dose varies among pathogen types, it is generally believed that most bacterial pathogens are able to cause infection when more than 103 cfu/mL are ingested [42]. Thus, the detection sensitivity of the multiplex
assay described in this study is within the infectious dose of most pathogens. The experimental findings also supported the fact that using a DNA extraction kit to extract genomic DNA successfully isolated DNA from PCR inhibitory components. The m-PCR assay developed in this study was effective for the detection of the target pathogens. The results also
demonstrated that amplification of the five sets of primers was efficient for producing five clear bands. Previous studies have shown that if the m-PCR method used more than three primer pairs, the method had a low sensitivity and poor repeatability compared with that when three pair primers or fewer were used [43]. There is little need for more than five isolated strains to be simultaneously evaluated from natural pork. Therefore, in this study, rapid and accurate methods established using the m-PCR were sufficient for the detection of pathogens likely to be found during inspection of pork.
Classical technology and monoplex PCR approaches are not suitable for such studies of complex food consisting of
multiple microbial species. However, the m-PCR approaches have been largely applied to detect different species of
several microbial niches, to differentiate closely related species and to recognize single species. The m-PCR is
likely to be the more rapid and reliable tool to simultaneously identify several microbial species cultivated in
pure culture, but cross-amplification reactions and false positive signals may become a major concern when this
technique is used as a defining method for differentiating microorganisms in complex food matrices. Furthermore,
inhibitors of the m-PCR can be found in microbial DNA solutions extracted from food such as pork [44].
However, the m-PCR not only may replace the more labor-intensive conventional culturing techniques, but also
allows the detection of species that are present at low levels (three or four orders of magnitude lower than the dominant
species) that can remain undetected by plating. At a certain level, the m-PCR might be considered a quantitative (or
better yet, a semi-quantitative) technique, since, once it has been established, the detection limit can be retrieved and
used as the minimal microbial concentration detectable [45]. In conclusion, this research has shown that the higher
specificity and sensitivity obtained was a comparatively reliable and useful method for rapid screening of these
pathogens in pure bacterial culture and pork. The m-PCR applied in this study provided better results with number of
positive results and further reduced the labor, reagent cost and testing time for multiple bacterial pathogens. Such a
rapid detection method using the m-PCR is likely to be very valuable for the food industry and various regulatory
agencies.
 
O157: H7, ยีน Ail ใน Y. enterocolitica และยีน NUC ในเชื้อ S. aureus มีความเหมาะสมเป็นยีนเป้าหมายเลือกไว้สำหรับแต่ละ
ของห้าเชื้อโรคเนื้อหมูตามลำดับ ในการศึกษานี้ชุดของไพรเมอร์ในห้าของเชื้อโรคที่ได้รับการออกแบบและปรับให้เข้ากับการทดสอบทวีคูณ ผลการระเบิดแสดงให้เห็นว่าสิ่งมีชีวิตที่ไม่ใช่เป้าหมายไม่ได้มี
ลำดับไพรเมอร์ของสิ่งมีชีวิตเป้าหมาย ไม่เฉพาะเจาะจงประถมศึกษาได้รับการทดสอบอย่างละเอียดโดยวิธี M-PCR 
[10] ซึ่งแสดงให้เห็นถึงความเหมาะสมของพวกเขาสำหรับการตรวจสอบเหล่านี้ห้าเชื้อโรคที่สำคัญ สำหรับการทดสอบ M-PCR จะประสบความสำเร็จ, ความเข้มข้นของญาติของไพรเมอร์, ความเข้มข้นของบัฟเฟอร์ PCR, ความสมดุลระหว่างแมกนีเซียมและดีเอ็นเออุณหภูมิขี่จักรยานปริมาณของดีเอ็นเอแม่แบบและดีเอ็นเอโพลิเมอร์ Taq มีความสำคัญมาก [38] ในงานวิจัยนี้ปฏิกิริยา
เงื่อนไข (Mg2 เข้มข้น? เข้มข้นโพลิเมอร์ Taq DNA เข้มข้นบัฟเฟอร์และความเข้มข้นของ
ไพรเมอร์) ถูกนำมาจากวรรณคดี [24] จำนวนรอบของ PCR และอุณหภูมิการหลอมได้รับการเพิ่มประสิทธิภาพใน
การศึกษา ประโยชน์ที่มีศักยภาพของ M-PCR คือว่ามันมีความไวสูง การทดลองแสดงให้เห็นว่าการตรวจสอบ
การ จำกัด การใช้ M-PCR เป็น 103 โคโลนี / มิลลิลิตรสำหรับการตรวจสอบพร้อมกันของเชื้อ Salmonella, เชื้อ E. coli O157: H7, S. aureus, Y. enterocolitica และ L. monocytogenes ระบบ M-PCR เปรียบเทียบเหมาะกับการตรวจอื่น ๆ ที่ใช้วิธี PCR monoplex ซึ่งในการตรวจสอบความไว 10 cfu / mL [10] ของเชื้อ Salmonella, น้อยกว่า 10 โคโลนี / มิลลิลิตร [39] ของวาย enterocolitica, 10 โคโลนี / มิลลิลิตร E . coli O157:. H7 [10], น้อยกว่า 10 โคโลนี / มิลลิลิตร [40] ของ L. monocytogenes และ 10 cfu / mL [41] ของเชื้อ S. aureus, ได้รับรายงาน
ถึงแม้ว่าปริมาณการติดเชื้อแตกต่างกันระหว่างประเภทเชื้อโรคมันเป็น เชื่อกันโดยทั่วไปว่าแบคทีเรียส่วนใหญ่จะสามารถที่จะทำให้เกิดการติดเชื้อเมื่อกว่า 103 โคโลนี / มิลลิลิตรกิน [42] ดังนั้นการตรวจสอบความไวของมัลติเพล็ก
ทดสอบที่อธิบายไว้ในการศึกษาครั้งนี้อยู่ในปริมาณที่ติดเชื้อของเชื้อโรคมากที่สุด ผลการศึกษาทดลองยังได้รับการสนับสนุนความเป็นจริงว่าการใช้ชุดสกัดดีเอ็นเอในการสกัดดีเอ็นเอดีเอ็นเอที่แยกได้ประสบความสำเร็จจากองค์ประกอบยับยั้ง PCR ทดสอบ M-PCR การพัฒนาในการศึกษาครั้งนี้มีประสิทธิภาพในการตรวจหาเชื้อโรคเป้าหมาย ผลนอกจากนี้ยัง
แสดงให้เห็นว่าการขยายของห้าชุดของไพรเมอร์มีประสิทธิภาพในการผลิตห้าวงที่ชัดเจน การศึกษาก่อนหน้านี้ได้แสดงให้เห็นว่าหากวิธี M-PCR ที่ใช้มากกว่าสามคู่ไพรเมอร์, วิธีการที่มีความไวแสงต่ำและการทำซ้ำที่ไม่ดีเมื่อเทียบกับว่าเมื่อสามไพรคู่หรือน้อยกว่าถูกนำมาใช้ [43] มีความจำเป็นน้อยกว่าห้าสายพันธุ์ที่แยกได้รับการประเมินพร้อมกันจากเนื้อหมูที่เป็นธรรมชาติ ดังนั้นในการศึกษาครั้งนี้วิธีการอย่างรวดเร็วและถูกต้องที่จัดตั้งขึ้นโดยใช้ M-PCR เพียงพอสำหรับการตรวจหาเชื้อโรคที่มีแนวโน้มที่จะพบในระหว่างการตรวจสอบของหมู. 
เทคโนโลยีคลาสสิกและวิธี PCR monoplex ไม่เหมาะสำหรับการศึกษาดังกล่าวของอาหารที่ซับซ้อนซึ่งประกอบด้วย
หลาย สายพันธุ์จุลินทรีย์ อย่างไรก็ตามวิธี M-PCR ได้ถูกนำมาใช้ส่วนใหญ่จะตรวจพบสายพันธุ์ที่แตกต่างกันของ
ซอกจุลินทรีย์หลายสายพันธุ์ที่แตกต่างที่เกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิดและจะรับรู้ชนิดเดียว M-PCR เป็น
แนวโน้มที่จะเป็นเครื่องมือที่มากขึ้นอย่างรวดเร็วและเชื่อถือได้ไปพร้อม ๆ กันระบุชนิดของจุลินทรีย์หลายปลูกใน
วัฒนธรรมบริสุทธิ์ แต่ปฏิกิริยาข้ามเครื่องขยายเสียงและสัญญาณบวกปลอมอาจจะกลายเป็นความกังวลหลักเมื่อ
มีการใช้เทคนิคเป็นวิธีการที่กำหนดสำหรับความแตกต่าง จุลินทรีย์ในการฝึกอบรมอาหารที่ซับซ้อน นอกจากนี้
สารยับยั้งของ M-PCR สามารถพบได้ในการแก้ปัญหาของจุลินทรีย์ดีเอ็นเอที่สกัดจากอาหารเช่นเนื้อหมู [44]. 
อย่างไรก็ตาม M-PCR ไม่เพียง แต่อาจแทนที่แรงงานเข้มข้นมากขึ้นเทคนิคการเพาะเลี้ยงแบบเดิม แต่ยัง
ช่วยให้การตรวจสอบของ ชนิดที่มีอยู่ในระดับต่ำ (สามหรือสี่คำสั่งของขนาดต่ำกว่าที่โดดเด่น
ชนิด) ที่สามารถยังคงตรวจไม่พบโดยชุบ ได้ในระดับหนึ่ง, M-PCR อาจได้รับการพิจารณาเชิงปริมาณ (หรือ
ดีกว่ายังกึ่งเชิงปริมาณ) เทคนิคตั้งแต่เมื่อมันได้รับการจัดตั้งการตรวจสอบวงเงินที่สามารถดึงและ
ใช้เป็นความเข้มข้นของจุลินทรีย์ที่ตรวจพบน้อยที่สุด [45 ] สรุปได้ว่าการวิจัยครั้งนี้ได้แสดงให้เห็นว่าสูงกว่า
ความจำเพาะและความไวได้เป็นวิธีการเปรียบเทียบที่เชื่อถือได้และมีประโยชน์สำหรับการตรวจคัดกรองอย่างรวดเร็วของเหล่า
เชื้อโรคในวัฒนธรรมแบคทีเรียบริสุทธิ์และหมู M-PCR นำไปใช้ในการศึกษาครั้งนี้ให้ผลลัพธ์ที่ดีกว่าที่มีจำนวนของ
ผลบวกและต่อแรงงานลดค่าใช้จ่ายและเวลาที่น้ำยาทดสอบสำหรับแบคทีเรียหลาย ดังกล่าวเป็น
วิธีการตรวจสอบอย่างรวดเร็วโดยใช้ M-PCR มีแนวโน้มที่จะมีค่ามากสำหรับอุตสาหกรรมอาหารและกฎระเบียบต่าง ๆ
หน่วยงาน
การแปล กรุณารอสักครู่..

 
 
O157:H7, the ail gene in Y. enterocolitica and the nuc gene in S. aureus were suitable as selected target genes for each
of the five pathogens of the pork, respectively.  In this study, a set of primers of the five pathogens were designed and adapted to the multiplex assay.  The BLAST results showed that non-targeted organisms did not contain
the primer sequences of the target organisms.รองพื้น - มีการทดสอบอย่างละเอียด โดย m-pcr วิธี 
 [ 10 ] ซึ่งแสดงให้เห็นถึงความเหมาะสมของพวกเขาสำหรับการตรวจหาเชื้อโรคที่สำคัญเหล่านี้ห้า สำหรับ m-pcr วิธีที่จะประสบความสำเร็จในความเข้มข้นสัมพัทธ์ของ PCR ไพรเมอร์ , บัฟเฟอร์ความเข้มข้น สมดุล ระหว่าง แมกนีเซียม และดีเอ็นเอ ( จักรยาน , ปริมาณของดีเอ็นเอแม่แบบและดีเอ็นเอพอลิเมอเรสแท็กสำคัญมาก [ 38 ]ในงานวิจัยนี้ ศึกษาเงื่อนไขปฏิกิริยา 
 ( mg2 ? สมาธิ , แท็ก DNA polymerase ของความเข้มข้นของบัฟเฟอร์ และความเข้มข้นของ 
 ไพรเมอร์ ) นำมาจากวรรณกรรม [ 24 ] จำนวนรอบของ PCR และการอบอ่อนที่อุณหภูมิเหมาะสมใน 
 การศึกษา ประโยชน์จากศักยภาพของ m-pcr คือว่ามันสูงไว ผลการศึกษาพบว่า การตรวจหา 
limit using the m-PCR was 103 cfu/mL for the simultaneous detection of Salmonella, E. coli O157:H7, S. aureus, Y. enterocolitica and L. monocytogenes.  The m-PCR systems compare favorably with other monoplex PCR-based assays in which a detection sensitivity of 10 cfu/mL [10] of Salmonella, less than 10 cfu/mL [39] of Y. enterocolitica, 10 cfu/mL of E. coli O157:H7 [10], less than 10 cfu/mL [40] of L. monocytogenes and 10 cfu/mL [41] of S. aureus, have been reported.
Although the infectious dose varies among pathogen types, it is generally believed that most bacterial pathogens are able to cause infection when more than 103 cfu/mL are ingested [42].  Thus, the detection sensitivity of the multiplex
วิธีที่อธิบายไว้ในการศึกษานี้ คือ ภายในปริมาณการติดเชื้อของเชื้อโรคมากที่สุด ผลการทดลองยังสนับสนุนความจริงที่ว่า การใช้ชุดสกัดดีเอ็นเอ เพื่อสกัด genomic DNA PCR พบว่าดีเอ็นเอจากชิ้นส่วนแยกเรียบร้อยแล้ว . ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ คือ m-pcr พัฒนาประสิทธิภาพการตรวจหาเป้าหมายสูงขึ้น ผลยัง 
แสดงให้เห็นว่าการเพิ่มห้าชุดไพรเมอร์มีประสิทธิภาพการผลิตแถบใส 5 การศึกษาก่อนหน้านี้ได้แสดงให้เห็นว่าถ้าใช้วิธี m-pcr มากกว่าสามคู่ไพรเมอร์ , วิธีมีความไวต่ำ และการที่ไม่ดีเมื่อเทียบกับเมื่อ 3 คู่ไพรเมอร์หรือน้อยกว่าถูกใช้ [ 43 ]มีความต้องการน้อยสำหรับมากกว่าห้าแยกสายพันธุ์ได้พร้อมกัน ประเมินจากหมูธรรมชาติ ดังนั้นในการศึกษานี้รวดเร็วและถูกต้องโดยใช้วิธีการสร้าง m-pcr มีเพียงพอสำหรับการตรวจหาเชื้อโรคที่อาจพบในระหว่างการตรวจสอบหมู 
 เทคโนโลยีคลาสสิกและ monoplex PCR วิธีที่ไม่เหมาะสม เช่น การศึกษาที่ซับซ้อนประกอบด้วย 
 อาหารหลายสายพันธุ์ของจุลินทรีย์ อย่างไรก็ตาม m-pcr วิธีการได้รับส่วนใหญ่ใช้เพื่อตรวจสอบชนิดของจุลินทรีย์ 
 หลาย niches แตกต่างกันชนิดที่เกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิดและรู้จักชนิดเดียว การ m-pcr คือ 
 มีแนวโน้มที่จะมากขึ้นอย่างรวดเร็วและเชื่อถือได้กับเครื่องมือหลายชนิดพร้อมกันระบุจุลินทรีย์ปลูก 
 วัฒนธรรมบริสุทธิ์ but cross-amplification reactions and false positive signals may become a major concern when this
technique is used as a defining method for differentiating microorganisms in complex food matrices.  Furthermore,
inhibitors of the m-PCR can be found in microbial DNA solutions extracted from food such as pork [44].
However,การ m-pcr เท่านั้นไม่อาจแทนที่การใช้แรงงานมากกว่าปกติเทคนิค แต่ยังช่วยให้การตรวจจับ 
 ชนิดที่อยู่ในระดับต่ำ ( คำสั่งของขนาดต่ำกว่าสายพันธุ์เด่น 
 สามหรือสี่ ) ที่ยังคงตรวจไม่พบโดยการชุบ ในระดับหนึ่ง , m-pcr อาจจะมีการพิจารณาเชิงปริมาณ ( หรือ 
 ดีกว่า ยังเป็นกึ่งปริมาณ ) เทคนิค ตั้งแต่เมื่อมีการก่อตั้ง ขีดจำกัดที่สามารถดึง และใช้ความเข้มข้นน้อยที่สุด 
 จุลินทรีย์ที่ตรวจพบ [ 45 ] สรุป การวิจัยได้แสดงให้เห็นว่ามีความจำเพาะและความไวสูง 
 ได้รับความน่าเชื่อถือและมีประโยชน์สำหรับการคัดกรองโดยวิธีการอย่างรวดเร็วของเชื้อโรคเหล่านี้ 
 บริสุทธิ์แบคทีเรียวัฒนธรรม และหมู The m-PCR applied in this study provided better results with number of
positive results and further reduced the labor, reagent cost and testing time for multiple bacterial pathogens.  Such a
rapid detection method using the m-PCR is likely to be very valuable for the food industry and various regulatory
agencies.
การแปล กรุณารอสักครู่..
