Phytase activity was measured in te

Phytase activity was measured in terms of inorganic
orthophosphate released from the phytic acid by
phytase, using a modification of the method of Fiske
and Subbarow (1925). A reaction mixture containing
150 Al of enzyme preparation or cell suspension and
600 Al of substrate (3 mM Na-phytate in 0.2 M Naacetate,
pH 4.0) was incubated at 45 jC (Shimizu,
1992). The reaction was stopped by adding 750 Al of
5% trichloroacetic acid (Sigma, T-6399). The released
inorganic phosphate was measured by adding with
750 Al of colour reagent prepared daily by mixing four
volumes of 1.5% (w/v) ammonium molybdate
(Sigma, A7302) in a 5.5% (v/v) sulphuric acid solution
(Carlo Erba Reagenti, 410301) and one volume
of a 2.7% (w/v) ferrous sulphate (Sigma, F-7002)
solution. The absorbance was measured at 700 nm.
One unit of phytase activity was defined as the
amount of enzyme required to liberate 1 nmol of
phosphate per min under the assay conditions. The
specific phytase activity was defined as U per mg of
protein. Protein concentration in the enzyme preparations
and during the purification steps was determined
by the method of Bradford (1976), using bovine
serum albumin as standard.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กิจกรรมโอสเตบิลถูกวัดอนินทรีย์ออกจากกรดไฟติกโดย orthophosphateใช้การเปลี่ยนแปลงวิธีการฟิกส์ โอสเตบิลและ Subbarow (1925) ส่วนผสมปฏิกิริยาที่ประกอบด้วยอัล 150 ระงับการเตรียมหรือเซลล์เอนไซม์ และอัล 600 ของพื้นผิว (3 mM นา phytate 0.2 M Naacetateค่า pH 4.0) incubated ที่ jC 45 (ซุ1992) หยุดปฏิกิริยา โดยเพิ่ม 750 อัลของ5% กรด trichloroacetic (Sigma, T-6399) การนำออกใช้อนินทรีย์ฟอสเฟตโดยวัดจากการเพิ่มด้วยอัล 750 ของรีเอเจนต์สีไว้ ด้วยผสมสี่ปริมาณ 1.5% (w/v) แอมโมเนีย molybdate(ซิกม่า A7302) ในโซลูชันกรดซัลฟูริก 5.5% (v/v)(Carlo Erba Reagenti, 410301) และระดับเสียงหนึ่งของซัลเฟต 2.7% (w/v) เหล็ก (Sigma, F-7002)การแก้ปัญหา ค่าที่ถูกวัดที่ 700 nmหนึ่งหน่วยกิจกรรมโอสเตบิลถูกกำหนดเป็นการปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นต้องปลดปล่อยนาโน 1 โมลของฟอสเฟตต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ การกิจกรรมโอสเตบิลเฉพาะถูกกำหนดเป็น U ต่อมิลลิกรัมโปรตีนที่มี ความเข้มข้นของโปรตีนในการเตรียมเอนไซม์และในระหว่างขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์ที่กำหนดโดยวิธีการของแบรดฟอร์ด (1976), ใช้วัวserum albumin เป็นมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

กิจกรรม phytase วัดในแง่ของอนินทรี
ออร์โธฟอสเฟตปล่อยออกมาจากกรดไฟติกโดย
phytase โดยใช้การปรับเปลี่ยนวิธีการ Fiske ที่
และ Subbarow (1925) ส่วนผสมที่มีปฏิกิริยา
150 อัลของการเตรียมเอนไซม์หรือเซลล์แขวนลอยและ
600 อัลของพื้นผิว (3 มินาไฟเตทใน 0.2 M Naacetate,
ค่า pH 4.0) ถูกบ่มที่ 45 JC (ชิมิซุ,
1992) ปฏิกิริยาก็หยุดโดยการเพิ่ม 750 อัลของ
กรดไตรคลอโร 5% (ซิกม่า T-6399) ปล่อย
ฟอสเฟตอนินทรีวัดโดยการเพิ่มกับ
750 อัลของสารสีที่เตรียมไว้ในชีวิตประจำวันโดยการผสมสี่
ปริมาณ 1.5% แอมโมเนียมโมลิบ (v / w)
(Sigma, A7302) ใน 5.5% (v / v) สารละลายกรดซัลฟูริก
(Carlo Erba Reagenti, 410,301) และปริมาณหนึ่ง
ของ 2.7% (w / v) เฟอรัสซัลเฟต (Sigma F-7002)
วิธีการแก้ปัญหา ค่าการดูดกลืนวัดที่ 700 นาโนเมตร.
หนึ่งหน่วยของกิจกรรม phytase ถูกกำหนดเป็น
ปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นในการปลดปล่อย 1 nmol ของ
ฟอสเฟตต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ
กิจกรรม phytase เฉพาะถูกกำหนดเป็น U ต่อมิลลิกรัม
โปรตีน โปรตีนเข้มข้นในการเตรียมเอนไซม์
และในระหว่างขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์ถูกกำหนด
โดยวิธีการของแบรดฟอนี้ (1976) โดยใช้วัว
ซีรั่มอัลบูมินที่เป็นมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

กิจกรรมที่ 1 เป็นวัดในแง่ของอนินทรีย์ฟอสเฟตออกจากกรดไฟติกโดยและการปรับเปลี่ยนวิธีการประมงและ subbarow ( 1925 ) ปฏิกิริยาที่ผสมที่มี150 ล ของการเตรียมเอนไซม์หรือเซลล์แขวนลอยและ600 ล ของพื้นผิว ( 3 มม. na ไฟเตท ใน naacetate 0.2 M ,pH 4.0 ) คือ บ่มที่ 45 JC ( ชิมิซึ ,1992 ) ปฏิกิริยาที่ถูกหยุดโดยการเพิ่ม 750 อัลของ5 % กรดไตรคลอโรอะซิติก ( Sigma , t-6399 ) การปล่อยตัวอนินทรีย์ฟอสเฟตถูกวัดโดยการเพิ่มด้วย750 AL ของสารเคมีที่เตรียมไว้ทุกวัน โดยผสมสี่สีปริมาณ 1.5 % ( w / v ) แอมโมเนียมโมลิบเดท( Sigma , a7302 ) ใน 5.5 % ( v / v ) สารละลายกรดซัลฟิวริก( คาร์โล มา reagenti 410301 , และปริมาณของ 2.7 % ( w / v ) เฟอรัสซัลเฟต ( Sigma , f-7002 )โซลูชั่น นเป็นวัดที่ 700 นาโนเมตรหนึ่งหน่วยของกิจกรรมที่ 1 คือ หมายถึงปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นเพื่อปลดปล่อย 1 ? ของฟอสเฟตต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ ที่กิจกรรมกลุ่มที่เฉพาะเจาะจงได้ เช่น คุณต่อมิลลิกรัมโปรตีน ความเข้มข้นของโปรตีนในเอนไซม์ การเตรียมการและในระหว่างการพิจารณาขั้นตอนโดยวิธีการของ แบรดฟอร์ด ( 1976 ) , การใช้วัวซีรัมอัลบูมิน เป็นมาตรฐาน