Isolation and identification of P.

Isolation and identification of P. acnes The samples were taken by squeezing acne lesions from human volunteers with sterile cotton swabs and directly inoculated on
brain heart infusion blood agar (BHI; Difco, Sparks, USA). The plates were incubated at 37 C for 5e7 days in anaerobic chamber (Bactron, Oregon, USA) with 90% N2, 5% CO2, 5% H2. Well isolated colonies were transferred to BHI agar supplemented with 0.5% yeast extract and 1% glucose (supplemented BHI) and incubated at 37 C for 3e5 days. P. acnes was identified on the basis of colony characteristic, Gram-stain, catalase test, indole test, nitrate reduction test, gelatinase test, and carbohydrate fermentation test. P. acnes DMST 14916 was included as a reference strain. The cultures were stored in glycerol broth at 20 C until use. 2.2. Screening for enzymes associated in virulent factors of P. acnes Inocula were prepared by subculturing isolates on supplemented BHI agar and incubated under anaerobic condition at 37 C for 72 h. The isolates were inoculated into supplemented BHI broth for 24 h and then transferred to supplemented BHI agar with 1% tributyrin (Fluka, Buchs, Switzerland) to study lipase activity and 2% casein (Sigma, Steinhelm, Germany) for protease enzyme. The inoculated plates were incubated at 37 C for 72 h under anaerobic condition. The presence of clear zone was taken as an indication of lipase activity. The isolates producing opalescent zones around the colony were identified as protease positive. 2.3. Antibacterial agents The ethanol extract of R. tomentosa and rhodomyrtone were prepared according to the methods as previously described [15,16]. Erythromycin was purchased from Fluka. 2.4. Preliminary test for antibacterial activity of the ethanol extract of R. tomentosa Screening for antibacterial activity of the ethanol extract of R. tomentosa was determined by agar disk diffusion method [18]. The ethanol extract was dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO). Ten microliter of crude extract (250 mg/mL) was loaded onto sterile filter paper disk (diameter 6 mm). Fresh colonies of P. acnes on supplemented BHI agar were inoculated in supplemented BHI broth and incubated overnight under anaerobic condition. The bacterial suspensions were adjusted to McFarland standard No. 0.5 and spreaded onto supplemented BHI agar plates. The disks containing the ethanol extract were placed on the seeded plates and incubated at 37 C for 72 h under anaerobic condition. The diameters of the inhibition zones were measured and the mean was recorded. The disk containing DMSO was used as control. 2.5. Determination of minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal bactericidal concentration (MBC) The minimal inhibitory concentration (MIC) was determined by broth macrodilution method [19]. One hundred microliter of the ethanol extract and rhodomyrtone were diluted to final concentrations ranging from 0.5 to 1024 mg/mL and 0.06e32 mg/mL, respectively. Five hundred microliter of the bacterial suspension (2 106 colony forming unit/ml, CFU/mL) and 400 ml of supplemented BHI broth were added and incubated at 37 C for 72 h under anaerobic condition. The MIC is defined as the lowest concentration that produced a completely inhibition of bacterial growth. Minimal bactericidal concentration (MBC) is performed with the extract that gave significant MIC values using a sterile loop streaking on supplemented BHI agar. Experiments were done in triplicate. Bacterial culture with 1% DMSO was used as negative control. In addition, erythromycin, a common antibiotic used in acne treatment was included as a positive control. The MIC break point (mg/mL) of erythroerythromycin as previously mentioned: susceptible 0.5, intermediate ¼ 1e4, and resistant 8 [20]. 2.6. Time-kill study of the ethanol extract of R. tomentosa and rhodomyrtone on P. acnes Time-kill kinetic experiment of the extracts was performed in supplemented BHI broth. An inoculum of 2 106 CFU/mL of growing cultures was added to the medium supplemented with 0.5, 1, 2, and 4MIC of the extract and incubated at 37 C under anaerobic condition. The viable counts were determined by drop plate method. Briefly, the samples were collected at time intervals and diluted in serial 10-fold dilution. Each dilution was dropped on supplemented BHI agar plate. Control tube with 1% DMSO was incubated under the same condition. The experiment was carried out in duplicate and the graphs were plotted in log number of the organisms versus time intervals. 2.7. Cytotoxicity assay of the ethanol extract of R. tomentosa and rhodomyrtone against human dermal fibroblast Human dermal fibroblast cells were grown in Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM) supplemented with 10% fetal bovine serum, 2 mM L-glutamine, 100 unit/mL penicillin and 100 ug/ml streptomycin. The cells were incubated at 37 C in a fully humidified, 5% CO2 atmosphere. The ethanol extract and rhodomyrtone were dissolved in DMSO to the concentration of 100 and 20 mg/mL, respectively and then serially two-fold diluted in the culture medium. The extracts were added to the cell culture and incubated for 24 h at 37 C under 5% CO2 atmosphere. After the medium with the extracts was removed, the cells were reincubated in fresh medium for 24 h. The cell viability was determined using MTT assay in which 3-(4,5-dimetylthiazol-2-yl)-2,5- diphenyl tetrazolium bromide (MTT) is reduced to formazan. MTT (5 mg/mL in PBS) was added to each well and incubated for 4 h. The formazan crystal was dissolved in DMSO. The optical density was measured at the wavelength of 570 nm. 3

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แยกและรหัสของ P. สิวตัวอย่างได้มา โดย squeezing สิวได้จากอาสาสมัครมนุษย์กับ swabs ผ้ากอซ และ inoculated โดยตรงบนสมองหัวใจคอนกรีตเลือด agar (BHI Difco สปาร์ค สหรัฐอเมริกา) แผ่นก็ incubated ที่ 37 C 5e7 วันในหอไม่ใช้ออกซิเจน (Bactron ออริกอน สหรัฐอเมริกา) 90% N2, 5% CO2, 5% H2 อาณานิคมแยกดีถูกโอนย้ายไป agar BHI เสริม ด้วยสารสกัดจากยีสต์ 0.5% และ 1% กลูโคส (เสริม BHI) และ incubated ที่ 37 C วัน 3e5 สิว P. ที่ระบุตามลักษณะโคโลนี คราบกรัม ทดสอบ catalase อินโดลทดสอบ ทดสอบลดไนเตรต gelatinase ทดสอบ และทดสอบการหมักคาร์โบไฮเดรต สิว P. DMST 14916 เป็นต้องใช้อ้างอิงได้ วัฒนธรรมถูกเก็บไว้ในกลีเซอรซุปที่ 20 C จนถึงใช้ 2.2 การตรวจคัดกรองสำหรับเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องใน virulent ปัจจัยของสิว P. Inocula โดยแยก subculturing บนเสริม BHI agar และ incubated ภายใต้เงื่อนไขไม่ใช้ที่ 37 C 72 h แยกได้ inoculated เข้าเสริม BHI ซุปใน 24 ชม และโอนย้ายแล้ว จะเสริม agar BHI tributyrin 1% (Fluka, Buchs สวิตเซอร์แลนด์) การศึกษากิจกรรมของเอนไซม์ไลเปสและเคซีน 2% (ซิก Steinhelm เยอรมนี) สำหรับเอนไซม์รติเอส แผ่น inoculated ได้ incubated ที่ 37 C สำหรับ h 72 ภายใต้เงื่อนไขที่ไม่ใช้ออกซิเจน ของโซนใสถูกนำมาเป็นตัวบ่งชี้ของกิจกรรมเอนไซม์ไลเปส การแยกผลิตโซน opalescent รอบ ๆ โคโลนีได้ระบุเป็นรติเอสบวก 2.3 การตัวแทนต้านเชื้อแบคทีเรียสารสกัดเอทานอลที่ของอาร์ tomentosa และ rhodomyrtone ได้จัดทำตามวิธีการอธิบายไว้ก่อนหน้านี้เป็น [15,16] Erythromycin ถูกซื้อจาก Fluka 2.4. เบื้องต้นทดสอบกิจกรรมต้านเชื้อแบคทีเรียของเอทานอลสกัดของ R. tomentosa ตรวจกิจกรรมต้านเชื้อแบคทีเรียของสารสกัดเอทานอลของอาร์ tomentosa ถูกกำหนด โดยวิธีการแพร่ดิสก์ agar [18] สารสกัดเอทานอลถูกละลายใน dimethyl sulfoxide (DMSO) 10 ไมโครลิตรของสารสกัดหยาบ (250 mg/mL) ถูกโหลดลงบนกระดาษกรองใส่ดิสก์ (เส้นผ่าศูนย์กลาง 6 มิลลิเมตร) อาณานิคมสดของสิว P. ใน agar BHI เสริมถูก inoculated ในซุป BHI เสริม และ incubated ค้างคืนภายใต้เงื่อนไขที่ไม่ใช้ออกซิเจน บริการแบคทีเรียถูกปรับปรุงให้มาตรฐานหมายเลข 0.5 McFarland และ spreaded ไปเสริมแผ่น agar BHI ดิสก์ที่ประกอบด้วยสารสกัดเอทานอลถูกวางบนแผ่น seeded และ incubated ที่ 37 C สำหรับ h 72 ภายใต้เงื่อนไขที่ไม่ใช้ออกซิเจน ปัจจุบันโซนยับยั้งถูกวัด และบันทึกค่าเฉลี่ย มีใช้ดิสก์ประกอบด้วย DMSO เป็นตัวควบคุม 2.5 การกำหนดสมาธิลิปกลอสไขต่ำสุด (MIC) และความเข้มข้น bactericidal น้อย (ช่อง MBC) เข้มข้นลิปกลอสไขต่ำสุด (MIC) ถูกกำหนด โดยวิธี macrodilution ซุป [19] ร้อยหนึ่งไมโครลิตรของสารสกัดเอทานอลและ rhodomyrtone ถูกทำให้เจือจางเพื่อความเข้มข้นสุดท้ายตั้งแต่ 0.5 0.06e32 mg/mL และ 1024 mg/mL ตามลำดับ 500 ไมโครลิตรของระงับแบคทีเรีย (2 106 โคโลนีที่ขึ้นรูปหน่วย/มล CFU/mL) และ 400 ml ของซุป BHI เสริมเพิ่ม และ incubated ที่ 37 C สำหรับ h 72 ภายใต้เงื่อนไขที่ไม่ใช้ออกซิเจน MIC ถูกกำหนดเป็นความเข้มข้นต่ำสุดที่ผลิตที่สมบูรณ์ยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย ทำสมาธิ bactericidal น้อย (ช่อง MBC) ด้วยสารสกัดที่ให้ค่า MIC สำคัญใช้วนกอซ streaking บนเสริม BHI agar ทดลองทำใน triplicate วัฒนธรรมจากแบคทีเรีย ด้วย DMSO 1% ถูกใช้เป็นตัวควบคุมค่าลบ นอกจากนี้ erythromycin ยาปฏิชีวนะทั่วไปที่ใช้ในการรักษาสิวนั้นเป็นตัวควบคุมบวก จุดแบ่ง MIC (mg/mL) ของ erythroerythromycin กล่าวว่า ก่อนหน้านี้: ไวต่อ 0.5 กลาง¼ 1e4 และ 8 ทน [20] 2.6 การแยกศึกษาฆ่าเวลาเอทานอลของอาร์ tomentosa และ rhodomyrtone บนสิว P. ฆ่าเวลาที่ทำการทดลองสารสกัดจากเดิม ๆ ในเสริมซุป BHI การ inoculum 2 106 CFU/mL เติบโตวัฒนธรรมถูกเพิ่มสื่อเสริม ด้วย 0.5, 1, 2 และ 4MIC ของการดึงข้อมูล และ incubated ที่ 37 C ภายใต้เงื่อนไขที่ไม่ใช้ออกซิเจน นับได้ถูกกำหนด โดยวิธีปล่อยแผ่น สั้น ๆ ตัวอย่างถูกรวบรวมไว้ในช่วงเวลา และข้อยกเว้นในอนุกรม 10-fold เจือจาง เจือจางแต่ละถูกตัดทิ้งในเสริมจาน agar BHI หลอดควบคุม ด้วย 1% DMSO เป็น incubated ภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน ทดลองถูกทำสำเนา และถูกพล็อตกราฟบันทึกจำนวนสิ่งมีชีวิตเมื่อเทียบกับช่วงเวลา 2.7 cytotoxicity วิเคราะห์ของเอทานอลสกัดของ R. tomentosa และ rhodomyrtone กับเซลล์ fibroblast มนุษย์ประมาณ fibroblast ผิวหนังมนุษย์ได้เติบโตในของดุลเบกโกแก้ไขอีเกิลของกลาง (DMEM) เสริม ด้วย 10% ซีรั่มวัวครรภ์ 2 มม. L glutamine ยาเพนนิซิลลิน 100 หน่วย/มล และ streptomycin ยู จี/ml 100 เซลล์ถูก incubated ที่ 37 C ในบรรยากาศ 5% CO2 humidified เต็ม สารสกัดเอทานอลและ rhodomyrtone ถูกละลายใน DMSO เพื่อความเข้มข้น 20 mg/mL และ 100 ตามลำดับแล้ว serially พับสองยกเว้นในสื่อวัฒนธรรม สารสกัดที่จะเพาะเลี้ยงเซลล์ และ incubated ใน 24 ชมที่ 37 C ภายใต้ 5% CO2 บรรยากาศ หลังจากที่สื่อกับบางส่วนถูกลบ เซลล์ถูก reincubated ใน 24 ชมสดปานกลาง ชีวิตเซลล์ถูกกำหนดใช้ MTT assay ซึ่งฟีนิลได 3-(4,5-dimetylthiazol-2-yl)-2,5-tetrazolium โบรไมด์ (MTT) จะลดลงเป็น formazan MTT (5 mg/mL ใน PBS) ถูกเพิ่มในแต่ละดี และ incubated สำหรับ 4 h คริสตัล formazan ถูกละลายใน DMSO ความหนาแน่นออปติคัลได้วัดที่ความยาวคลื่นของ 570 nm 3

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การแยกและจำแนกของพีสิวตัวอย่างถูกนำด้วยการบีบสิวจากอาสาสมัครที่มีฝ้ายผ่านการฆ่าเชื้อและเชื้อโดยตรงใน
หัวใจสมองวุ้นเลือดแช่ (BHI; Difco, ประกายไฟ, USA) แผ่นบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลาวัน 5e7 ในห้องแบบไม่ใช้ออกซิเจน (Bactron, โอเรกอนประเทศสหรัฐอเมริกา) กับ N2 90% CO2 5%, 5% H2 ดีอาณานิคมแยกถูกย้ายไป BHI วุ้นเสริมด้วยสารสกัดจากยีสต์ 0.5% และ 1% glucose (เสริม BHI) และบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลาวัน 3E5 P. สิวที่ถูกระบุบนพื้นฐานของลักษณะอาณานิคมแกรมคราบทดสอบ catalase ทดสอบ indole ทดสอบการลดไนเตรต, ทดสอบ gelatinase และทดสอบการหมักคาร์โบไฮเดรต P. สิว DMST 14916 ถูกรวมเป็นสายพันธุ์อ้างอิง วัฒนธรรมที่ถูกเก็บไว้ในน้ำซุปกลีเซอรอลที่ 20 เซลเซียสจนกว่าจะใช้ 2.2 การคัดเลือกเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องในปัจจัยความรุนแรงของสิว P. Inocula ถูกจัดทำขึ้นโดยเชื้อที่แยกได้ในการเสริม BHI วุ้นและบ่มภายใต้สภาวะไร้อากาศที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 72 ชั่วโมง สายพันธุ์ที่ได้รับเชื้อเข้าไปเสริมน้ำซุป BHI เป็นเวลา 24 ชั่วโมงและจากนั้นก็ย้ายไปเสริมอาหารเลี้ยงเชื้อ BHI 1% tributyrin (Fluka, Buchs วิตเซอร์แลนด์) เพื่อศึกษากิจกรรมเอนไซม์ไลเปสและเคซีน 2% (Sigma, steinhelm, เยอรมนี) สำหรับเอนไซม์โปรติเอส แผ่นเชื้อไปบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 72 ชั่วโมงภายใต้สภาวะไร้อากาศ การปรากฏตัวของโซนที่ชัดเจนถูกนำมาเป็นข้อบ่งชี้ของกิจกรรมเอนไซม์ไลเปส การผลิตไอโซเลทโซนสีเหลือบรอบอาณานิคมถูกระบุว่าเป็นโปรติเอบวก 2.3 ตัวแทนต้านเชื้อแบคทีเรียสารสกัดเอทานอลของอาร์ tomentosa และ rhodomyrtone ได้จัดทำตามวิธีการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [15,16] erythromycin ซื้อมาจาก Fluka 2.4 การทดสอบเบื้องต้นสำหรับฤทธิ์ต้านแบคทีเรียของสารสกัดเอทานอลของอาร์ tomentosa คัดกรองฤทธิ์ต้านแบคทีเรียของสารสกัดเอทานอลของอาร์ tomentosa ถูกกำหนดโดยวิธีการแพร่ดิสก์วุ้น [18] สารสกัดเอทานอลที่ได้รับการละลายใน dimethyl sulfoxide (DMSO) สิบไมโครลิตรของสารสกัดหยาบ (250 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) ถูกโหลดลงบนดิสก์กระดาษกรองหมัน (เส้นผ่าศูนย์กลาง 6 มม) อาณานิคมสดของสิว P. เสริมในอาหารเลี้ยงเชื้อ BHI ถูกเชื้อในน้ำซุปเสริม BHI และบ่มค้างคืนภายใต้สภาวะไร้อากาศ สารแขวนลอยแบคทีเรียถูกปรับให้ McFarland มาตรฐานที่ 0.5 และกระจายไปยังเสริม BHI แผ่นวุ้น ดิสก์ที่มีสารสกัดเอทานอลถูกวางไว้บนแผ่นเมล็ดและบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 72 ชั่วโมงภายใต้สภาวะไร้อากาศ เส้นผ่าศูนย์กลางของโซนยับยั้งถูกวัดและค่าเฉลี่ยที่ถูกบันทึกไว้ ดิสก์ที่มี DMSO ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุม 2.5 การกำหนดความเข้มข้นน้อยที่สุด (MIC) และน้อยที่สุดความเข้มข้นของเชื้อแบคทีเรีย (MBC) ความเข้มข้นน้อยที่สุด (MIC) ถูกกำหนดโดยน้ำซุปวิธี macrodilution [19] หนึ่งร้อยไมโครลิตรของสารสกัดเอทานอลและ rhodomyrtone ถูกเจือจางความเข้มข้นสุดท้ายตั้งแต่ 0.5-1024 mg / ml และ 0.06e32 mg / ml ตามลำดับ ห้าร้อยไมโครลิตรของการระงับแบคทีเรีย (2 106 โคโลนีหน่วย / ml CFU / มิลลิลิตร) และ 400 มิลลิลิตรของน้ำซุปเสริม BHI ถูกเพิ่มและบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 72 ชั่วโมงภายใต้สภาวะไร้อากาศ MIC ถูกกำหนดให้เป็นความเข้มข้นต่ำสุดที่ผู้ผลิตอย่างสมบูรณ์การยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย น้อยที่สุดความเข้มข้นของแบคทีเรีย (MBC) จะดำเนินการด้วยสารสกัดที่สำคัญที่ทำให้ค่า MIC โดยใช้ลายเส้นวงผ่านการฆ่าเชื้อในอาหารเลี้ยงเชื้อ BHI เสริม การทดลองทำในเพิ่มขึ้นสามเท่า วัฒนธรรมแบคทีเรียที่มี DMSO 1% ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมเชิงลบ นอกจากนี้ erythromycin, ยาปฏิชีวนะที่ใช้ในการรักษาสิวที่ถูกรวมเป็นควบคุมบวก จุดพัก MIC (มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) erythroerythromycin เป็นที่กล่าวถึงก่อนหน้านี้: 0.5 อ่อนไหวกลาง¼ 1E4 และทน 8 [20] 2.6 การศึกษาเวลาฆ่าของสารสกัดเอทานอลของอาร์ tomentosa และ rhodomyrtone บน P. สิวฆ่าเวลาการทดลองเกี่ยวกับการเคลื่อนไหวของสารสกัดที่ได้ดำเนินการในการเสริมน้ำซุป BHI หัวเชื้อ 2 106 CFU / mL ของวัฒนธรรมที่เจริญเติบโตถูกบันทึกอยู่ในสื่อที่เสริมด้วย 0.5, 1, 2 และ 4MIC ของสารสกัดและบ่มที่อุณหภูมิ 37 C ภายใต้สภาวะไร้อากาศ นับทำงานได้ถูกกำหนดโดยวิธีการลดลงจาน สั้น ๆ เก็บตัวอย่างในช่วงเวลาและเจือจางในอนุกรมเจือจาง 10 เท่า เจือจางแต่ละคนก็หล่นลงบนแผ่นเสริมอาหารเลี้ยงเชื้อ BHI หลอดควบคุมด้วย DMSO 1% ถูกบ่มภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน การทดลองดำเนินการในที่ซ้ำกันและถูกพล็อตกราฟในจำนวนการเข้าสู่ระบบของสิ่งมีชีวิตเมื่อเทียบกับช่วงเวลา 2.7 การทดสอบความเป็นพิษของสารสกัดเอทานอลของอาร์ tomentosa และ rhodomyrtone กับ fibroblast ผิวหนังของมนุษย์เซลล์ fibroblast ผิวหนังมนุษย์ได้รับการปลูกใน Dulbecco ของการปรับเปลี่ยนของนกอินทรีขนาดกลาง (DMEM) เสริมด้วย 10% ของทารกในครรภ์ในซีรั่มวัว 2 มิลลิ L-glutamine 100 หน่วย / penicillin มิลลิลิตรและ 100 ไมโครกรัม / มล streptomycin เซลล์ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสความชื้นอย่างเต็มที่บรรยากาศ CO2 5% สารสกัดเอทานอลและ rhodomyrtone ถูกละลายใน DMSO กับความเข้มข้นของ 100 และ 20 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรตามลำดับแล้วเป็นลำดับสองเท่าเจือจางในอาหารเลี้ยงเชื้อ สารสกัดถูกเพิ่มเข้ามาในการเพาะเลี้ยงเซลล์และบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 C ภายใต้บรรยากาศ CO2 5% หลังจากที่สื่อด้วยสารสกัดจากถูกลบออกเซลล์ถูก reincubated ในสื่อสดเป็นเวลา 24 ชั่วโมง มีชีวิตเซลล์ถูกกำหนดโดยใช้การทดสอบ MTT ที่ 3 (4,5-dimetylthiazol-2-YL) -2,5- diphenyl tetrazolium โบรไมด์ (MTT) จะลดลงไป formazan MTT (5 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรในพีบีเอส) ถูกบันทึกอยู่ในแต่ละดีและบ่มเป็นเวลา 4 ชั่วโมง คริสตัล formazan ถูกละลายใน DMSO ความหนาแน่นของแสงวัดที่ความยาวคลื่น 570 นาโนเมตร 3

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การแยกและวิเคราะห์ลักษณะของ P . acnes การวิจัยถูกบีบแผลสิวจากอาสาสมัครมนุษย์กับ swabs ฝ้ายเป็นหมันและโดยตรงจากบน
สมองแช่หัวใจเลือดวุ้น ( BHI ; difco , ประกายไฟ , USA ) จานถูกบ่มที่ 37 องศาเซลเซียส 5e7 วัน ห้องแอโรบิค ( bactron , Oregon , USA ) กับ 90 % N2 , CO2 5 % , 5 % H2 .แยกดีอาณานิคมถูกย้าย BHI agar ที่เติมสารสกัดจากยีสต์ 0.5% และ 1% กลูโคส ( อาหาร BHI ) บ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3e5 วัน P . acnes ถูกระบุบนพื้นฐานของลักษณะโคโลนีกรัมคราบ ทดสอบอินโดล Catalase , ไนเตรท ทดสอบเจลลติเนสและทดสอบการหมักคาร์โบไฮเดรต P . acnes DMST 14916 ถูกรวมเป็นข้อมูลอ้างอิง ความเครียดวัฒนธรรมที่ถูกเก็บไว้ในน้ำซุปกลีเซอรอลที่ 20 C ถึงใช้ 2.2 . การคัดเลือกเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องในด้านของ P . acnes inocula รุนแรง เตรียมเลี้ยงสายพันธุ์ในอาหารวุ้น BHI บ่มภายใต้สภาวะไร้ออกซิเจนที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 72 ชั่วโมงการแยกเชื้อ BHI broth เติมได้ตลอด 24 ชั่วโมง และจากนั้น ย้ายไปเสริมอาหารวุ้น BHI 1% tributyrin ( fluka buchs , สวิตเซอร์แลนด์ ) เพื่อศึกษากิจกรรมของเอนไซม์และ 2% เคซีน ( Sigma , steinhelm , เยอรมนี ) สำหรับเอนไซม์โปรติเอส ส่วนแผ่นเป็นเชื้อบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 72 ชั่วโมง ภายใต้สภาวะไร้ออกซิเจนการปรากฏตัวของเคลียร์โซนถูกนำมาเป็นข้อบ่งชี้ของกิจกรรมเอนไซม์ . แยกโซนที่ผลิตเป็นสีน้ำนมรอบอาณานิคมที่ถูกระบุว่าเป็นโปรบวก 2.3 ตัวแทนต้านเชื้อแบคทีเรียสารสกัดเอทานอลของ tomentosa rhodomyrtone และเตรียมตามวิธีการที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ 15,16 [ ] ซินซื้อมาจาก fluka . 2.4 .ทดสอบเบื้องต้น ฤทธิ์ต้านแบคทีเรียของสารทั้งของ tomentosa การคัดกรองฤทธิ์ต้านแบคทีเรียของสารทั้งของ tomentosa ถูกกำหนดโดยวิธี agar diffusion ดิสก์ [ 18 ] สารสกัดเอทานอลละลายในไดเมทิลซัลฟอกไซด์ ( DMSO ) 10 ไมโครลิตร สกัด ( 250 mg / ml ) ถูกโหลดลงบนกระดาษปลอดเชื้อกรองดิสก์ ( เส้นผ่าศูนย์กลาง 6 มม. ) สดอาณานิคมของพีสิวบนอาหารวุ้น BHI broth ปลูกเชื้อในอาหาร BHI บ่มค้างคืนภายใต้สภาวะไร้ออกซิเจน สารแขวนลอย แบคทีเรีย และปรับมาตรฐานไม่ แมคฟาร์แลนด์ 0.5 และกระจายลงบนอาหารวุ้น BHI จาน ดิสก์ที่มีสารทั้งถูกวางไว้บนจานเมล็ดบ่มที่ 37 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 72 ชั่วโมง ภายใต้สภาวะไร้ออกซิเจนขนาดเส้นผ่านศูนย์กลางของการยับยั้ง โซนวัดค่าเฉลี่ยอย่างมีนัยสำคัญ ดิสก์ที่มี DMSO ที่ใช้เป็นควบคุม 2.5 การหาความเข้มข้นน้อยที่สุดที่สามารถยับยั้งแบคทีเรีย ( MIC ) และความเข้มข้นที่น้อยที่สุด ( MBC ) ความเข้มข้นของสารน้อย ( MIC ) ถูกกำหนดโดยวิธี broth macrodilution [ 19 ]100 ไมโครลิตร และสารสกัดเอทานอล rhodomyrtone เพื่อลดความเข้มข้นสุดท้ายตั้งแต่ 0.5 mg / ml และขนาด 0.06e32 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ตามลำดับ 500 ไมโครลิตร ระงับเชื้อแบคทีเรีย ( 2 106 โคโลนีสร้างหน่วยโคโลนี / มิลลิลิตร ) และ 400 มิลลิลิตร BHI broth เติมเพิ่ม บ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 72 ชั่วโมง ภายใต้สภาวะไร้ออกซิเจนไมค์ หมายถึง ค่าความเข้มข้นที่ผลิตทั้งหมดยับยั้งการเติบโตของแบคทีเรีย แบคทีเรียความเข้มข้นน้อยที่สุด ( MBC ) คือสารสกัดที่ให้ดำเนินการกับค่า MIC ที่สําคัญใช้ฆ่าเชื้อบนห่วง streaking อาหาร BHI วุ้น ทดลองทำทั้งสามใบ แบคทีเรียวัฒนธรรมกับ 1% DMSO เป็นเครื่องมือควบคุมลบ นอกจากนี้ อีริทโธรมัยซิน ,ยาปฏิชีวนะที่ใช้ในการรักษาสิวทั่วไปอยู่เป็นตัวควบคุมบวก จุดพักไมค์ ( มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ) ของ erythroerythromycin ตามที่กล่าวถึงก่อนหน้านี้ : ไว 0.5 , 1e4 ¼กลางและทน 8 [ 20 ] 2.6 เวลาฆ่าการศึกษาของสารทั้ง อาร์ และ tomentosa rhodomyrtone บนหน้า สิว เวลาฆ่าการทดลองจลนศาสตร์ของการเสริมสารสกัดใน BHI broth .เป็นเชื้อ 2 106 cfu / ml ของวัฒนธรรมคือการเพิ่มเติม 0.5 , 1 , 2 , และ 4mic ของสารสกัดและบ่มที่ 37 องศาเซลเซียส ภายใต้สภาวะไร้ออกซิเจน นับได้ถูกกำหนดโดยวิธีจานหล่น สั้นจำนวน ในช่วงเวลา และเจือจาง 10 เท่าแบบเจือจาง เจือจางลงในแต่ละสูตรวุ้น BHI จานควบคุมหลอดด้วย 1% DMSO ถูกบ่มภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน ทำการทดลองในที่ซ้ำกันและกราฟถูกวางแผนในหมายเลขเข้าสู่ระบบของสิ่งมีชีวิตเมื่อเทียบกับช่วงเวลา 2.7 . การทดสอบพิษของสารทั้งของtomentosa rhodomyrtone กับมนุษย์และมนุษย์เซลล์เนื้อเยื่อเกี่ยวพันเนื้อเยื่อเกี่ยวพันชนิดซึ่งปลูกในดัลเบโค่การนกอินทรีขนาดกลาง ( dmem ) เสริมด้วย 10% fetal bovine serum , 2 มม. Glutamine , 100 หน่วยต่อมิลลิลิตร เพนนิซิลลิน และ streptomycin 100 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร . เซลล์ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส ในอย่างเต็มที่ humidified , 5% CO2 ในชั้นบรรยากาศสารสกัดเอทานอล และ rhodomyrtone ถูกละลายใน DMSO ที่ความเข้มข้น 100 และ 20 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ตามลำดับ และเป็นสองเท่า ซึ่งในสังคมสื่อ สารสกัดถูกเพิ่มไปยังเซลล์เพาะบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ภายใต้ 5% CO2 ในชั้นบรรยากาศ หลังกลางด้วยสารสกัดถูกกำจัด เซลล์ก็ reincubated ปานกลาง สด 24 ชั่วโมงเซลล์สามารถใช้วิเคราะห์วิธี MTT ที่ 3 - ( 4,5-dimetylthiazol-2-yl ) - 2 , 5 - ไดฟีนิล tetrazolium โบรไมด์ ( MTT ) จะลดลงถึงปฏิบัติการ . MTT ( 5 mg / ml ใน PBS ) ที่ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละ และบ่มเป็นเวลา 4 ชั่วโมงปฏิบัติการคริสตัลละลายใน DMSO . ความหนาแน่นของแสง คือ วัดที่ความยาวคลื่น 570 นาโนเมตร 3