2. Materials and methods
2.1. Sample collection
All food samples implicated in suspected food poisoning
complaints and foodborne outbreaks that were submitted to the
Alberta Provincial Laboratory for Public Health (ProvLab) for
microbial testing between January 1, 2007 and December 31, 2010
were included in this study. These samples were part of epidemiological
investigations originating from restaurants, retail facilities,
or private homes and were collected by public health inspectors
and submitted for testing.
2.2. Bacterial isolation and identification
All food samples submitted to ProvLab were screened for the
presence of Bacillus cereus, Clostridium perfringens, S. aureus, Aeromonas
spp., Campylobacter spp., Escherichia coli O157:H7, Salmonella,
Shigella spp., and Yersinia spp. as per routine laboratory
standard operating procedures (Health Canada, 2011; U.S. Food and
Drug Administration, 1998). Aerobic plate count (APC) (Standard
Plate Count Agar, Oxoid, UK) was performed to determine the
estimated level of background contamination. All food samples
were initially prepared in a sterile WhirlPak (Nasco, WI) bag as a 1
in 10 dilution using the appropriate broth media as previously
described (U.S. Food and Drug Administration, 1998). The suspension
was then mixed by stomaching for no more than 2 min to
achieve a homogeneous slurry. Slurries were incubated and planted
on the appropriate media for organism identification as per standard
microbiological methods for food testing (Health Canada,
2011; U.S. Food and Drug Administration, 1998). Presumptive
S. aureus colonies were confirmed using a tube coagulase test with
rabbit plasma (BD, USA). Endpoint PCR to detect the nuc gene,
a marker of S. aureus, was performed on all culture-confirmed
S. aureus isolates to confirm identification.
2.3. Antimicrobial susceptibility
All S. aureus isolates were screened for methicillin-resistance
using disc diffusion and endpoint PCR to detect the mecA gene,
a determinant of methicillin-resistance. Disk diffusion was performed
on Mueller-Hinton agar plates (BD, USA) as per the Clinical
and Laboratory Standards Institute (Clinical and Laboratory
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 การเก็บตัวอย่าง
ตัวอย่างอาหารทั้งหมดที่สงสัยว่ามีส่วนเกี่ยวข้องในอาหารเป็นพิษ
ร้องเรียนและการระบาดที่เกิดจากอาหารที่ถูกส่งไปยังห้องปฏิบัติการ
alberta จังหวัดเพื่อสุขภาพของประชาชน (provlab) สําหรับการทดสอบจุลินทรีย์
ระหว่าง 1 มกราคม 2007 และ 31 ธันวาคม 2010
ถูกรวมอยู่ในนี้ การศึกษา ตัวอย่างเหล่านี้เป็นส่วนหนึ่งของการระบาด
การตรวจสอบที่มาจากร้านอาหารสิ่งอำนวยความสะดวกการค้าปลีก
หรือบ้านส่วนตัวและได้รับการเก็บรวบรวมโดยเจ้าหน้าที่สาธารณสุข
และส่งสำหรับการทดสอบ.
2.2 การแยกเชื้อแบคทีเรียและบัตรประจำตัว
ทุกตัวอย่างอาหารส่งไปยัง provlab ถูกคัดกรองสำหรับการแสดงตนของ
cereus บาซิลลัส, Clostridium perfringens, s aureus, Aeromonas spp
, campylobacter เอสพีพี, Escherichia coli O157:.. h7, เชื้อ Salmonella,
Shigella spp. และ Yersinia เอสพีพี ตามขั้นตอนการตรวจทางห้องปฏิบัติการ
วิธีการปฏิบัติการมาตรฐาน (สุขภาพแคนาดา, 2011; เราอาหารและ
ยา, 1998) นับจานแอโรบิก (APC) (มาตรฐาน
นับจานเลี้ยงเชื้อ oxoid, uk) ได้ดำเนินการเพื่อตรวจสอบระดับ
ประมาณของการปนเปื้อนพื้นหลัง ตัวอย่างอาหารทั้งหมดที่เตรียม
ครั้งแรกใน whirlpak หมัน (Nasco, Wi) ถุงเป็น 1
10 ในการลดสัดส่วนการใช้สื่อน้ำซุปตามความเหมาะสมก่อนหน้านี้อธิบาย
(เราอาหารและยา, 1998) ระงับ
ผสมแล้วโดย stomaching ไม่เกิน 2 นาทีถึง
บรรลุสารละลายเป็นเนื้อเดียวกัน slurries บ่มและปลูก
บนสื่อที่เหมาะสมในการจำแนกสิ่งมีชีวิตตามมาตรฐาน
วิธีการสำหรับการทดสอบทางจุลชีววิทยาอาหาร (สุขภาพแคนาดา
2011; เราอาหารและยา, 1998) สันนิษฐาน
s อาณานิคมเรียสได้รับการยืนยันโดยใช้หลอดทดสอบ Coagulase ด้วย
กระต่ายพลาสม่า (bd, usa) pcr ปลายทางในการตรวจสอบยีน NUC
เครื่องหมายของ s เรียสได้รับการดำเนินการเกี่ยวกับวัฒนธรรมได้รับการยืนยันทั้งหมด
s aureus ที่แยกเพื่อยืนยันตัว.
2.3 ความไวต่อยาต้านจุลชีพทุก
s aureus สายพันธุ์ที่ถูกคัดกรอง methicillin-ต้านทาน
โดยใช้แผ่นดิสก์การกระจายและปลายทาง PCR ในการตรวจสอบยีน Meca
ปัจจัยของ methicillin-ต้านทาน ดิสก์แพร่ได้ดำเนินการใน
mueller-Hinton agar แผ่น (bd, usa) ตามคลินิก
และมาตรฐานห้องปฏิบัติการสถาบัน (ทางคลินิกและตรวจทางห้องปฏิบัติการ
การแปล กรุณารอสักครู่..
2. วัสดุและวิธีการ
2.1 ตัวอย่างชุด
ตัวอย่างอาหารทั้งหมดที่เกี่ยวข้องในอาหารเป็นพิษที่สงสัย
ข้อร้องเรียนและแพร่กระจาย foodborne ที่ถูกส่งไป
อัลเบอร์ตาปฏิบัติจังหวัดสาธารณสุข (ProvLab) สำหรับ
จุลินทรีย์ทดสอบระหว่างวันที่ 1 มกราคม 2550 และวันที่ 31 ธันวาคม 2010
รวมอยู่ในการศึกษานี้ ตัวอย่างเหล่านี้มีส่วนของความ
สอบสวนมาจากร้านอาหาร สิ่งอำนวยความสะดวกขายปลีก,
หรือบ้านส่วนตัว และถูกรวบรวม โดยผู้ตรวจสาธารณ
และส่งทดสอบ
2.2 แยกแบคทีเรียและรหัส
มีฉายตัวอย่างอาหารทั้งหมดที่ส่งไปที่ ProvLab สำหรับการ
ของ cereus คัดเชื้อ Clostridium perfringens S. หมอเทศข้าง ลาย Aeromonas
โอ Campylobacter โอ Escherichia coli O157:H7 สาย,
โอ shigella และโอ Yersinia ตามห้องปฏิบัติการประจำ
วิธีปฏิบัติมาตรฐาน (สุขภาพแคนาดา 2011 สหรัฐอเมริกาอาหาร และ
ยาดูแล 1998) จำนวนแผ่นแอโรบิก (APC) (มาตรฐาน
Agar จำนวนจาน Oxoid, UK) ทำการตรวจสอบ
ประเมินระดับการปนเปื้อนพื้นหลัง ตัวอย่างอาหารทั้งหมด
เริ่มถูกเตรียมในถุง WhirlPak (Nasco, WI) ใส่เป็น 1
ในการใช้สื่อที่เหมาะสมซุปเป็นก่อนหน้านี้เจือจาง 10
อธิบาย (สหรัฐอเมริกาอาหารและยา 1998) การระงับ
ถูกแล้วผสม โดย stomaching สำหรับไม่เกิน 2 นาทีเพื่อ
ให้สารละลายเป็นเนื้อเดียวกัน Incubated และปลูก slurries
บนสื่อที่เหมาะสมสำหรับการระบุสิ่งมีชีวิตตามมาตรฐาน
วิธีทางจุลชีววิทยาในอาหารทดสอบ (สุขภาพแคนาดา,
2011 สหรัฐอเมริกา อาหารและยา 1998) Presumptive
หมอเทศข้างลาย S. อาณานิคมได้ยืนยันการใช้ coagulase หลอดทดสอบกับ
กระต่ายพลาสมา (BD สหรัฐอเมริกา) ปลายทาง PCR เพื่อตรวจหายีน nuc,
เครื่องหมายของ S. หมอเทศข้างลาย ทำตามทั้งหมดยืนยันวัฒนธรรม
S. หมอเทศข้างลายแยกเพื่อยืนยันรหัส.
2.3 ภูมิไวรับจุลินทรีย์
isolates หมอเทศข้างลาย S. ทั้งหมดถูกฉายสำหรับต้านทาน methicillin
ใช้ดิสก์แพร่และปลายทาง PCR เพื่อตรวจหายีน mecA,
ดีเทอร์มิแนนต์ของ methicillin ต้านทาน ทำดิสก์แพร่
บน Mueller Hinton agar แผ่น (BD สหรัฐอเมริกา) ตาม Clinical
สถาบันมาตรฐานห้องปฏิบัติการ (Clinical และห้องปฏิบัติการและ
การแปล กรุณารอสักครู่..