real-time PCR. Reactions were perfo

real-time PCR. Reactions were performed in the iQ5 real-time
PCR system (Bio-Rad). Each reaction (20 ll) contained 10 ll of
MAXIMA SYBR-green PCR Master mix (Fermentas), forward
(MANF:GCTGTTGTCAAAGATGCAGAAG) and reverse (MANR:
CTTGTACGGGAACGTAGTTGAG) primers (500 nM each), cDNA template,
and nuclease-free water. PCR cycling conditions were 10 min
at 95 C (1 cycle), 15 s at 95 C followed by 1 min at 60 C (40
cycles), and a melting curve of 1 min at 95 C followed by 30 s at
55 C with a final ramp to 95 C with continuous data collection
(1 cycle) to test for primer dimers and non-specific amplification.
The a-actin transcript was used as an internal reference to normalize
the amount of total RNA present in each reaction. The
expression levels of the genes were calculated from the threshold
cycle according to the 2DDCT method (Livak and Schmittgen,
2001). The experiment was conducted with three repetitions for
each sample and results were compared by one-way ANOVA with
Dunnett’s post test (a = 5%) to analyze the differences between
conditions related to controls using GraphPad Prism 5 for
Windows.
3.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

PCR แบบเรียลไทม์ ปฏิกิริยาดำเนินใน iQ5 แบบเรียลไทม์ระบบ PCR (Bio Rad) แต่ละปฏิกิริยา (20 ll) อยู่ 10 จะของแมกสีเขียว SYBR PCR หลักผสม (Fermentas), ไปข้างหน้า(MANF:GCTGTTGTCAAAGATGCAGAAG) และย้อนกลับ (MANR:ไพรเมอร์ CTTGTACGGGAACGTAGTTGAG) (500 nM แต่ละ), cDNA แม่และน้ำฟรี nuclease สภาพขี่จักรยาน PCR ก็ 10 นาทีที่ 95 C (1 รอบ), 15 s ที่ 95 C ตาม ด้วยนาทีที่ 60 C (40รอบ), และเส้นโค้งหลอม 1 นาทีที่ 95 C ตาม ด้วย 30 s ที่55 C มีทางลาดสุดท้ายถึง 95 C ด้วยการรวบรวมข้อมูลอย่างต่อเนื่อง(1 รอบ) การทดสอบสำหรับรองพื้น dimers และขยายเฉพาะไม่เสียงบรรยายเป็นแอกตินใช้เป็นการอ้างอิงภายในปกติจำนวนของ RNA ทั้งหมดที่อยู่ในแต่ละปฏิกิริยา การระดับการแสดงออกของยีนได้คำนวณจากขีดจำกัดวนตามวิธีของ DDCT 2 (Livak และ Schmittgen2001) ดำเนินการทดลองกับทำซ้ำสามสำหรับแต่ละอย่างและผลลัพธ์ถูกเปรียบเทียบ โดยทางเดียว ANOVA ด้วยการทดสอบของ Dunnett โพสต์ (5%) การวิเคราะห์ความแตกต่างระหว่างเงื่อนไขที่เกี่ยวข้องกับการควบคุมโดยใช้ 5 ปริซึม GraphPadWindows3

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Real-time PCR ปฏิกิริยาที่ได้ดำเนินการใน iQ5 เวลาจริง
ระบบ PCR (Bio-Rad) แต่ละปฏิกิริยา (20 LL) มี 10 LL ของ
MAXIMA? สีเขียว SYBR PCR โทผสม (Fermentas) ไปข้างหน้า
(MANF: GCTGTTGTCAAAGATGCAGAAG) และย้อนกลับ (MANR:
CTTGTACGGGAACGTAGTTGAG) ไพรเมอร์ (500 นาโนเมตรในแต่ละ), ยีนแม่
และน้ำ Nuclease ฟรี PCR เงื่อนไขการขี่จักรยาน 10 นาที
ที่ 95 C (1 รอบ) 15 วินาทีที่ 95 C ตามด้วย 1 นาทีที่ 60 C (40
รอบ) และเส้นโค้งการละลายของ 1 นาทีที่ 95 C ตามด้วย 30 วินาทีที่
55 C ด้วย ทางลาดสุดท้ายถึง 95 C ที่มีการเก็บรวบรวมข้อมูลอย่างต่อเนื่อง
(1 รอบ) ในการทดสอบสำหรับ dimers ไพรเมอร์และเครื่องขยายเสียงที่ไม่เฉพาะเจาะจง.
A-โปรตีนหลักฐานถูกนำมาใช้เป็นข้อมูลอ้างอิงภายในที่จะปรับ
ปริมาณของ RNA ทั้งหมดที่มีอยู่ในแต่ละปฏิกิริยา
ระดับการแสดงออกของยีนจะถูกคำนวณจากเกณฑ์
วงจรตามที่ 2? วิธี DDCT (Livak และ Schmittgen,
2001) ทำการทดลองกับสามซ้ำสำหรับ
แต่ละตัวอย่างและผลที่ได้มาเปรียบเทียบโดยหนึ่งใน way ANOVA กับ
Dunnett โพสต์ของการทดสอบ (A = 5%) ในการวิเคราะห์ความแตกต่างระหว่าง
เงื่อนไขที่เกี่ยวข้องกับการควบคุมการใช้ปริซึม GraphPad 5
ของ Windows.
3

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

PCR แบบเรียลไทม์ ปฏิกิริยาที่แสดงใน iq5 แบบเรียลไทม์ระบบดีเอ็นเอ ( Bio ราด ) แต่ละปฏิกิริยา ( 20 จะ ) ที่มีอยู่ 10 จะของMaxima SYBR สีเขียว PCR Master Mix ( fermentas ) ไปข้างหน้า( manf : gctgttgtcaaagatgcagaag ) และกลับ ( manr :cttgtacgggaacgtagttgag ) ไพรเมอร์ ( 500 nm แต่ละสายพันธุ์ ) , แม่แบบ ,นิวเคลียสและน้ำฟรี ตรวจสภาพจักรยานเป็น 10 นาที95 C ( 1 รอบ ) , 15 s 95 C ตามด้วย 1 นาทีที่ 60 C ( 40รอบ ) และละลายโค้ง 1 นาทีที่ 95 C ตามด้วย 30 S ที่55 C กับทางลาดสุดท้ายถึง 95 องศาเซลเซียส การเก็บข้อมูลแบบต่อเนื่อง( 1 รอบ ) เพื่อทดสอบและขยายสายของไพรเมอร์ที่ไม่เฉพาะเจาะจง .การ a-actin หลักฐานถูกใช้เป็นอ้างอิงภายในปกติปริมาณอาร์เอ็นเอทั้งหมดที่มีอยู่ในแต่ละปฏิกิริยา ที่ระดับการแสดงออกของยีนที่ได้จากธรณีประตูวงจรตามไป 2ddct วิธี ( livak schmittgen และ ,2001 ) โดยทำการทดลองกับสาม repetitions สำหรับผลลัพธ์ในแต่ละตัวอย่างและวิเคราะห์เปรียบเทียบโดยการวิเคราะห์ความแปรปรวนด้วยทดสอบโพสต์ Dunnett ( A = 5% ) เพื่อวิเคราะห์ความแตกต่างระหว่างเงื่อนไขที่เกี่ยวข้องกับการควบคุมการใช้ graphpad ปริซึม 5 สำหรับหน้าต่าง3 .