The monomeric structure of HydA was

The monomeric structure of HydA was demonstrated on
an SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)
after Coomassie blue staining (Fig. 3A). The N-terminal amino acid sequence of the mature protein was determined
by Edman degradation, which matched the amino acid
sequence deduced from the cDNA sequence (AGPTSECDCPPTPQAKLPHW).
The first 21 amino acids are missing
in the native protein and probably function as a transit
peptide since this sequence terminates with a characteristic
stroma peptidase cleavage site (Val, Arg, Ala) [19]. The
predicted polypeptide derived from the complete open reading
frame of the hydA cDNA has a length of 436 amino
acids with a calculated molecular mass of 47.3 kDa. The
calculated weight of the polypeptide without the transit
peptide region is 45 kDa, which corresponds to the molecular
mass of the purified native protein (Fig. 3B). The
truncated coding region of the hydA cDNA lacking the
transit peptide sequence was amplified by RT-PCR, cloned
into the NdeI/BamHI sites of pET9a and expressed in E. coli
strain BL21 (DE3) pLysS. Antibodies raised against HydA
from C. reinhardtii cross-reacted with the recombinant
HydA protein as well as with the isolated hydrogenase from
C. fusca (Fig. 3B). The heterologous hydrogenase enzyme
was not active, probably because E. coli cannot assemble
the unique active site of the [Fe]-hydrogenase [9].

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

โครงสร้างของ HydA monomeric ถูกแสดงบนelectrophoresis เป็นเจล SDS polyacrylamide (SDS-หน้า)หลังจากย้อมสี (Fig. 3A) สี Coomassie กำหนดลำดับกรดอะมิโน N-เทอร์มินัลโปรตีนผู้ใหญ่โดยการลดประสิทธิภาพของ Edman ซึ่งตรงกับกรดอะมิโนลำดับ deduced จากลำดับ cDNA (AGPTSECDCPPTPQAKLPHW)กรดอะมิโน 21 ก่อนจะหายไปในโปรตีนดั้งเดิมคงหน้าที่การขนส่งเพปไทด์ตั้งแต่ลำดับนี้สิ้นสุดลง ด้วยลักษณะstroma peptidase ปริไซต์ (Val อาร์กิวเมนต์ของค่า อลา) [19] ที่คาดการณ์ polypeptide มาอ่านเปิดสมบูรณ์กรอบของ hydA cDNA มีความยาวของอะมิโน 436กรดกับคำนวณมวลโมเลกุลของ 47.3 kDa ที่คำนวณน้ำหนักของ polypeptide ไม่มีการส่งต่อเพปไทด์เป็น kDa 45 ซึ่งตรงกับที่โมเลกุลมวลของโปรตีนดั้งเดิมบริสุทธิ์ (Fig. 3B) ที่ตัดรหัสภูมิภาคของ hydA cDNA ขาดการส่งต่อเพปไทด์ลำดับถูกขยาย โดย RT-PCR โคลนในเว็บไซต์ NdeI/BamHI pET9a และแสดงใน E. coliสายพันธุ์ BL21 (DE3) pLysS แอนตี้ขึ้นกับ HydAจาก C. reinhardtii cross-reacted กับวททชเช่นกันกับ hydrogenase แยกจากโปรตีน HydAค. fusca (Fig. 3B) เอนไซม์ heterologous hydrogenaseไม่ใช้งาน คงเนื่องจาก E. coli ไม่ประกอบเว็บไซต์ใช้งานเฉพาะของ [Fe] -hydrogenase [9]

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โครงสร้าง monomeric ของ Hyda ได้แสดงให้เห็นใน
เจลอิเล็ก SDS-polyacrylamide (SDS-PAGE)
หลังจากการย้อมสี Coomassie สีฟ้า (รูป. 3A) N-ขั้วลำดับกรดอะมิโนของโปรตีนผู้ใหญ่ถูกกำหนด
โดยการย่อยสลาย Edman ซึ่งตรงกับกรดอะมิโน
ลำดับอนุมานจากลำดับยีน (AGPTSECDCPPTPQAKLPHW).
แรก 21 กรดอะมิโนที่ขาดหายไป
ในโปรตีนพื้นเมืองและอาจจะทำงานเป็นระบบขนส่ง
เปปไทด์ ตั้งแต่ลำดับนี้สิ้นสุดลงด้วยลักษณะ
stroma peptidase เว็บไซต์แตกแยก (Val, หาเรื่อง, Ala) [19]
polypeptide ทำนายที่ได้มาจากการอ่านเปิดสมบูรณ์
กรอบของ cDNA Hyda มีความยาว 436 อะมิโน
กรดที่มีมวลโมเลกุลคำนวณ 47.3 กิโลดาลตัน
น้ำหนักคำนวณของ polypeptide โดยไม่ต้องขนส่ง
ภูมิภาคเปปไทด์เป็น 45 กิโลดาลตันซึ่งสอดคล้องกับโมเลกุล
มวลของโปรตีนพื้นเมืองบริสุทธิ์ (รูป. 3B)
ภูมิภาคเข้ารหัสถูกตัดทอนของ cDNA Hyda ขาด
ลำดับเปปไทด์การขนส่งได้รับการขยายโดย RT-PCR โคลน
เข้าไปในเว็บไซต์ NdeI / BamHI ของ pET9a และแสดงออกใน E. coli
สายพันธุ์ BL21 (DE3) pLysS แอนติบอดีขึ้นกับ Hyda
จาก C. reinhardtii ข้ามปฏิกิริยากับ recombinant
โปรตีน Hyda เช่นเดียวกับ Hydrogenase แยกจาก
C. fusca (รูป. 3B) เอนไซม์ Hydrogenase heterologous
ไม่ได้ใช้งานอาจจะเป็นเพราะเชื้อ E. coli ไม่สามารถประกอบ
ใช้งานเว็บไซต์ที่เป็นเอกลักษณ์ของ [เฟ] -hydrogenase [9]

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

โครงสร้างของ hyda เกิดถูกแสดงบน
เป็น SDS polyacrylamide gel electrophoresis ( SDS-PAGE )
หลังจากที่เหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้าคราบ ( รูปที่ 3 ) ที่ถูกลำดับกรดอะมิโนของโปรตีนที่ผู้ใหญ่กำหนด
โดยงูหัวกระโหลกซึ่งตรงกับลำดับกรดอะมิโน
deduced จากลำดับเบสของยีน agptsecdcpptpqaklphw )

หายไปก่อน 21 กรดอะมิโนในโปรตีนพื้นเมือง และอาจใช้เป็นขนส่ง
เปปไทด์ตั้งแต่ลำดับนี้สิ้นสุดลงด้วยลักษณะ
สโตรลูกเต้าแยกออกเว็บไซต์ ( Val arg , ala ) [ 19 ]
ทำนาย polypeptide มาจากสมบูรณ์อ่าน
เปิดกรอบของ hyda cDNA มีความยาว 410 อะมิโนกรดด้วย
คำนวณมวลโมเลกุลของ 330 กิโลดาลตัน
คำนวณน้ำหนักของพอลิเพปไทด์โดยการขนส่ง
เปปไทด์ เขต 45 กิโลดาลตัน ซึ่งสอดคล้องกับมวล โมเลกุลของโปรตีนบริสุทธิ์พื้นเมือง
( รูปที่ 3B )
ตัดรหัสภูมิภาคของ hyda cDNA ขาด
การขนส่งเปปไทด์ลำดับถูกขยายโดยวิธี PCR ,
ใน ndei / เว็บไซต์ของ pet9a BamHI และแสดงออกใน E . coli
สายพันธุ์ BL21 ( DE3 ) plyss . แอนติบอดีขึ้นต่อต้าน hyda
จาก reinhardtii ข้ามทำปฏิกิริยากับโปรตีน
hyda โปรตีนเช่นเดียวกับแยกไฮโดรจีเนสจาก
C . fallax ( รูปที่ 3B ) ส่วนชนิดไฮโดรจีเนสเอนไซม์
ไม่ได้ใช้งาน อาจจะเพราะ E . coli ไม่สามารถประกอบ
เอกลักษณ์ปราดเปรียวเว็บไซต์ของ [ Fc ] - ไฮโดรจีเนส [ 9 ]