and the bacteria containing superna

and the bacteria containing supernatant was fixed in 4% (w/v) paraformaldheyde
in PBS (pH 7.2) overnight at 4 C. Fixed samples were
washed in PBS and stored in a known volume of 50% (v/v) ethanol-
PBS at 20 C until time of hybridization. Aliquots (5 ll) of fixed
bacterial cells were applied to Teflon-coated microscopic slides
(BIOLAB, New Zealand; 10 wells) and air dried. The bacterial cells
were then dehydrated with a series of solutions containing 50%,
80%, and 99.5% ethanol (3 min for each concentration). The bacterial
cells fixed on the glass slides were hybridized by addition of
8 ll of hybridization buffer (0.9 M NaCl, 0.01% sodium dodecyl sulfate,
20 mM Tris-HCl, 20% deionized formamide; pH 7.2) with
0.5 ll of Cy3-labeled oligonucleotide specific probes (50 ng/ll).
The slides were hybridized at 46 C for 2 h in a plastic box containing
wet sponges (soaked in hybridization buffer). After hybridization,
the slides were rinsed with warm hybridization buffer at
48 C and washed in pre-warmed washing buffer (225 mM NaCl,
0.01% sodium dodecyl sulfate, 20 mM Tris-HCl; pH 7.2) for
20 min at 48 C. After the washing step, the slides were rinsed with
ice-cold distilled water and thoroughly dried before being observed
using a fluorescence scanning microscope.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

และแบคทีเรียที่มีใสได้รับการแก้ไขใน 4% (w / v) paraformaldheyde
ในพีบีเอส (pH 7.2) ค้างคืนที่ 4 องศาเซลเซียส ได้รับตัวอย่างคงที่
ล้างในพีบีเอสและเก็บไว้ในปริมาณที่รู้จักกันจาก 50% (v / v) ethanol-
พีบีเอสที่? 20? C จนกว่าจะถึงเวลาของการผสมข้ามพันธุ์ aliquots (5 LL) คง
เซลล์แบคทีเรียที่ถูกนำไปใช้เคลือบเทฟล่อนสไลด์กล้องจุลทรรศน์
(ไบโอแลป, นิวซีแลนด์ 10 หลุม) และอากาศแห้ง เซลล์แบคทีเรีย
ได้รับการอบแห้งแล้วกับชุดของการแก้ปัญหาที่มี 50%,
80% และเอทานอล 99.5% (3 นาทีสำหรับแต่ละความเข้มข้น) แบคทีเรีย
เซลล์คงที่สไลด์แก้วถูกไฮบริดโดยนอกเหนือจาก
8 LL ของบัฟเฟอร์ hybridization (0.9 ล้านโซเดียมคลอไรด์, โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต 0.01%,
20 มม Tris-HCl 20% ปราศจากไอออน Formamide; ค่า pH 7.2) ที่มี
0.5 LL ของ Cy3 ที่มีสัญลักษณ์ oligonucleotide probes เฉพาะ (50 ng / LL).
ภาพนิ่งถูกไฮบริดที่ 46 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมงในกล่องพลาสติกที่มี
ฟองน้ำเปียก (แช่ในบัฟเฟอร์ hybridization) หลังจากผสมพันธุ์
ภาพนิ่งถูกล้างด้วยบัฟเฟอร์การผสมพันธุ์อย่างอบอุ่นที่
48 C และล้างในบัฟเฟอร์ซักผ้าก่อนอุ่น? (225 มิลลิโซเดียมคลอไรด์,
โซเดียม 0.01% โดเดซิลซัลเฟต, 20 mM Tris-HCl; ค่า pH 7.2) สำหรับ
20 นาทีที่ 48 C? . หลังจากขั้นตอนการซักผ้า, ภาพนิ่งถูกล้างด้วย
เย็นน้ำกลั่นและแห้งอย่างทั่วถึงก่อนที่จะถูกตั้งข้อสังเกต
โดยใช้กล้องจุลทรรศน์สแกนเรืองแสง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

และแบคทีเรียที่มีสูงคงที่ 4 เปอร์เซ็นต์ ( w / v ) paraformaldheyde
ใน PBS ( pH 7.2 ) ค้างคืนที่ 4  C คงที่จำนวน
ล้างใน PBS และเก็บไว้ในทราบปริมาณ 50 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) เอทานอล -
PBS ที่  20  C จนถึงเวลาของลูกผสม เฉยๆ ( 5 จะ ) ถาวร
เซลล์แบคทีเรียเพื่อใช้เคลือบเทฟลอนสไลด์
( ไบโอแลป นิวซีแลนด์ ; 10 หลุม ) และอากาศแห้ง เซลล์แบคทีเรีย
แล้วอบแห้งกับชุดของโซลูชั่นที่มี 50%
80% และเอทานอล 99.5% ( 3 นาทีสำหรับแต่ละความเข้มข้น ) เชื้อแบคทีเรีย
เซลล์คงที่บนเป็นกระจกสไลด์โดยนอกเหนือจาก
8 จะทำบัฟเฟอร์ ( 0.9 M NaCl , 0.01 % โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต ,
20 mm หรือ HCl , 20% คล้ายเนื้อเยื่อประสาน Formamide ; pH 7.2 )
0.5 จะ cy3 ป้ายวัดเฉพาะซึ่ง ( 50 กรัม /
ll )ภาพนิ่งเป็น 46  C 2 H ในกล่องพลาสติกที่มี
ฟองน้ำเปียก ( แช่ ( บัฟเฟอร์ ) หลังจาก hybridization ) , สไลด์ล้างด้วย

อบอุ่น ( บัฟเฟอร์ที่ 48  C และล้างก่อนอุ่นล้างบัฟเฟอร์ ( 225 มม. NaCl
0.01 % โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต 20 มม. โดย HCl ; pH 7.2 )
20 นาทีที่ 48  C หลังจากซักก้าว ภาพนิ่งถูกล้างด้วย
เย็นน้ำและแห้งอย่างละเอียดก่อนที่จะถูกสังเกต
โดยใช้ fluorescence กล้องจุลทรรศน์ .