2.2. Inoculum preparationFive serov

2.2. Inoculum preparation
Five serovars of Salmonella that were previously associated with
outbreaks were used in this study. The serovars, Thompson FSIS 120
(chicken isolate), Enteritidis H3527 (clinical isolate, phage type
13a), Typhimurium H3380 (clinical isolate, phage type DT104),
Heidelberg F5038BG1 (ham isolate) and Montevideo FSIS 051 (beef
isolate), were obtained from the Utah State University culture
collection of Dr. Jeff Broadbent. Stock cultures were maintained
frozen (80
C). Individual inocula were prepared by scraping cells
from an agar lawn as described by Danyluk, Uesugi, and Harris
(2005) with slight adjustments. Frozen stock cultures were
streaked onto tryptic soy agar (TSA; tryptic soy broth and 1.5% agar;
Becton Dickinson, MD, USA) plates and incubated for 24 ± 2 h at
35
C. A single isolated colony was transferred to 10 mL tryptic soy
broth (TSB; Neogen, Lansing, MI, USA) and incubated at 35
C for
21 ± 2 h. One milliliter of the overnight culture was then evenly
spread (0.25 mL in each) over four TSA plates (100 by 15 mm) and
incubated at 35
C for 24 ± 2 h to produce a bacterial lawn. The
Salmonella lawns grown on the TSA plates were overlaid with 0.1%
peptone solution (about 4 mL each plate). A sterile plastic spreader
was used to loosen/scrap off the bacterial lawn from the agar plates
and collected (from 3 sets of 4-TSA plates) into a 50-mL conical
centrifuge tube. Cells were pelleted by centrifugation (2100g for
15 min) and re-suspended in 40 mL fresh 0.1% peptone solution,
twice. The mix of five serovars was prepared by combining equal
volume of aliquots of each strain in a sterile, 250-mL glass bottle. To
determine cell populations, appropriate serial dilutions (1:10 in
0.1% peptone solution) of the inoculum was made and plated onto
Salmonella-Shigella agar (Acumedia Manufacturers Inc., Lansing,
MI, USA). Colonies were counted after incubating the plates at 35
C
for 24 ± 2 h.
2.3. Dry sand inoculum preparation
Dry pepper or HVP could have been inoculated to simulate
Salmonella-contaminated dry spices. However, these fine-sized and
light-weight particulate spices could potentially generate airborne
Salmonella during handling of the inoculated spices. In addition, a
greater amount of liquid inoculum would be needed to completely
and uniformly inoculate the samples. Also, the samples would from

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 การเตรียมหัวเชื้อห้า serovars ของเชื้อ Salmonella ที่มีความสัมพันธ์ก่อนหน้านี้กับการระบาดของโรคถูกนำมาใช้ในการศึกษานี้ serovars ธ อมป์สัน FSIS 120 (ไก่แยก) Enteritidis H3527 (คลินิกแยกประเภท phage 13a) Typhimurium H3380 (คลินิกแยกประเภท phage DT104) ไฮเดลเบิร์ก F5038BG1 (แฮมแยก) และมอนเตวิเด FSIS 051 (เนื้อแยก) ที่ได้รับ จากวัฒนธรรมมหาวิทยาลัยแห่งรัฐยูทาห์คอลเลกชันของดร. เจฟฟ์บรอดเบนท์ วัฒนธรรมที่ได้รับการดูแลสต็อกสินค้าแช่แข็ง (? 80? C) inocula ส่วนบุคคลที่ถูกจัดทำขึ้นโดยการขูดเซลล์จากสนามหญ้าวุ้นตามที่อธิบายDanyluk ซุกิและแฮร์ริส(2005) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย หุ้นถูกแช่แข็งวัฒนธรรมลายลงบนถั่วเหลือง tryptic วุ้น (TSA; น้ำซุปถั่วเหลือง tryptic และวุ้น 1.5%; Becton ดิกคินสัน, แมรี่แลนด์สหรัฐอเมริกา) จานและบ่มเป็นเวลา 24 ± 2 ชั่วโมงที่35 องศาเซลเซียส อาณานิคมแยกเดี่ยวถูกย้ายไป 10 มิลลิลิตร tryptic ถั่วเหลืองน้ำซุป(TSB; Neogen แลนซิง, MI, USA) และบ่มที่ 35 องศาเซลเซียสเป็นเวลา? 21 ± 2 ชั่วโมง หนึ่งมิลลิลิตรของวัฒนธรรมข้ามคืนก็เท่า ๆ กันการแพร่กระจาย(0.25 มิลลิลิตรในแต่ละครั้ง) กว่าสี่แผ่น TSA (15 100 มิลลิเมตร) และบ่มที่35 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ± 2 ชั่วโมงในการผลิตหญ้าแบคทีเรีย สนามหญ้าเชื้อ Salmonella ที่ปลูกบนแผ่น TSA ถูกบุด้วย 0.1% วิธีการแก้ปัญหาเปปโตน (ประมาณ 4 มิลลิลิตรแต่ละแผ่น) กระจายผ่านการฆ่าเชื้อพลาสติกถูกนำมาใช้เพื่อคลาย / เศษออกจากสนามหญ้าแบคทีเรียจากจานอาหารเลี้ยงเชื้อและรวบรวม(จาก 3 ชุดแผ่น 4 TSA) เป็นรูปกรวย 50 มิลลิลิตรหลอดหมุนเหวี่ยง เซลล์ที่ถูกเม็ดโดยการหมุนเหวี่ยง (2100? กรัมสำหรับ15 นาที) และอีกครั้งที่ถูกระงับใน 40 มิลลิลิตรสด 0.1% วิธีการแก้ปัญหาเปปโตน, ครั้งที่สอง การผสมผสานของห้า serovars ที่ได้รับการจัดทำขึ้นโดยรวมเท่ากับปริมาณของaliquots ของแต่ละสายพันธุ์ในการฆ่าเชื้อขวดแก้ว 250 มิลลิลิตร เพื่อตรวจสอบประชากรเซลล์เจือจางอนุกรมที่เหมาะสม (1:10 ใน 0.1% วิธีการแก้ปัญหาเปปโตน) ของเชื้อที่ถูกสร้างขึ้นและชุบลงบนอาหารเลี้ยงเชื้อSalmonella-Shigella (Acumedia ผู้ผลิตอิงค์แลนซิงMI, USA) อาณานิคมนับหลังจากฟักแผ่นเปลือกโลกที่ 35 องศาเซลเซียสเป็นเวลา24 ± 2 ชม. 2.3 หัวเชื้อทรายแห้งเตรียมพริกแห้งหรือ HVP จะได้รับการฉีดวัคซีนเพื่อจำลองเชื้อSalmonella ที่ปนเปื้อนเครื่องเทศแห้ง แต่เหล่านี้ปรับขนาดและน้ำหนักเบาเครื่องเทศอนุภาคอาจสร้างอากาศSalmonella ในระหว่างการจัดการของเครื่องเทศเชื้อ นอกจากนี้ยังมีจำนวนมากของเชื้อของเหลวจะต้องสมบูรณ์และสม่ำเสมอฉีดวัคซีนตัวอย่าง นอกจากนี้กลุ่มตัวอย่างจะมาจาก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . การเตรียมเชื้อ Salmonella โน
5 ที่ก่อนหน้านี้ที่เกี่ยวข้องกับ
ระบาด การใช้แบบสอบถาม ที่โน Thompson FSIS 120
ไก่ ( แยก ) , enteritidis h3527 ( คลินิกแยกประเภทว่า
13a ) , สาร h3380 ( คลินิกแยก , เฟจชนิด dt104 )
f5038bg1 Heidelberg ( แฮมแยก ) และ Montevideo FSIS 051 ( เนื้อ
แยก )ได้มาจากวัฒนธรรม
มหาวิทยาลัยรัฐยูทาห์คอลเลกชันของ ดร. เจฟฟ์ บรอดเบนต์ . หุ้นวัฒนธรรมยังคง
แช่แข็ง (  80
C ) inocula บุคคลเตรียมขูดเซลล์
จากวุ้นสนามหญ้าตามที่อธิบายไว้โดย danyluk อุเอซูกิซัง และแฮร์ริส
( 2005 ) มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย หุ้นวัฒนธรรมแช่แข็งเป็นลายบนอาหารวุ้นถั่วเหลือง
( TSA ; อาหารซุปถั่วเหลือง 1.5% วุ้น ;
เบคตอนดิกคินสัน , MD ,สหรัฐอเมริกา ) แผ่น และบ่มเป็นเวลา 24 ±
2 H ที่ 35
C . เดี่ยวแยกอาณานิคมถูกย้ายไป 10 ml อาหารถั่วเหลือง
broth ( TSB ; neogen แลนซิง , มิชิแกน , สหรัฐอเมริกา ) และบ่มที่อุณหภูมิ 35
C
21 ± 2 ชั่วโมงหนึ่งมิลลิลิตรของวัฒนธรรมค้างคืนได้ทั่วถึง
แพร่กระจาย ( 0.25 มล. ในแต่ละ ) 4 แผ่น ( 100 โดย TSA 15 มิลลิเมตร ) และ อุณหภูมิ 35

เป็นเวลา 24 ± 2 H ผลิตสนามหญ้า แบคทีเรีย
ซัลโมเนลลา สนามหญ้าที่ปลูกบน TSA จานถูกวางทับด้วย 0.1 %
เปปโตนโซลูชั่น ( แต่ละแผ่นประมาณ 4 ml ) a
ถ่างพลาสติกใช้แก้หมัน / เศษออกจากสนามหญ้าแบคทีเรียจากอาหาร และเก็บจาน
( จาก 3 ชุด 4-tsa จาน ) เป็น 50 ml รูปกรวย
centrifuge หลอด เซลล์มีเม็ดโดยการเหวี่ยงแยก ( 2100  g
15 นาที ) และแขวนลอยใน 40 ml สด 0.1% สารละลาย
extract ,สองครั้ง ส่วนผสมของห้าโนถูกเตรียมโดยรวมปริมาณเท่ากับ
ของเฉยๆของแต่ละสายพันธุ์ในการฆ่าเชื้อ , 250 ml . ขวดแก้ว .

ตรวจสอบประชากรเซลล์วิธีการอนุกรมที่เหมาะสม ( 1 : 10 ใน
โซลูชั่นเปปโตน 0.1% ) ของเชื้อซัลโมเนลลาาและชุบลงบน
ชิเกลลา ( acumedia ผู้ผลิตอิงค์แลนซิง
MI , สหรัฐอเมริกา ) อาณานิคมได้ถูกนับหลังจากการแช่แผ่น 35
C
24 ± 2 H .
2.3 ทรายแห้ง
การเตรียมเชื้อแห้งพริกไทยหรือเกลืออาจได้รับเชื้อ Salmonella จำลอง
เครื่องเทศแห้งปนเปื้อน อย่างไรก็ตาม , เหล่านี้ปรับขนาด และ น้ำหนักเบา เครื่องเทศอาจสร้างอนุภาค

อากาศเชื้อระหว่างการขนย้ายของที่ใส่เครื่องเทศ นอกจากนี้ ปริมาณของเหลวมากขึ้น

จะต้องสมบูรณ์โดยการฉีดวัคซีนและตัวอย่าง นอกจากนี้ ตัวอย่างจาก