The second hybrid system is based o

The second hybrid system is based on a variant of carbonic
anhydrase (CA), an enzyme that binds Zn2+ with a KD of
approximately 4 pM. In elegant molecular engineering work,
the Fierke laboratory was able to tune the specificity and affinity
of CA to create a series of probes that could respond to
physiological concentrations of Zn2+.159 Early generations of
these probes featured a small-molecule fluorophore covalently
linked to carbonic anhydrase. When Zn2+ binds carbonic
anhydrase, a second cofactor (the fluorophore dapoxyl
sulfonamide) binds to an open site on the Zn2+ ion, allowing
energy transfer from the dapoxyl moiety to the fluorophore on
the enzyme. Recently, Zeng et al. reported a long wavelength,
emission ratiometric modification of the carbonic anhydrase
Zn2+ sensor that could be amenable to imaging in tissues.160
This new system uses Alexa Fluor 594 as a FRET donor and
Chesapeake Blue sulfonamide as the acceptor fluorophore. One
limitation of these versions of the sensor is the requirement for
microinjection or the attachment of cell-penetrating peptides to
introduce it into cells, because covalent attachment of the
fluorophore prevented the probe from being genetically
encodable.40 However, recent iterations have replaced the
small-molecule fluorophore with a FP, thus allowing part of the
probe (CA-FP) to be genetically encoded and transfected into
cells. The membrane-permeable dapoxyl sulfonamide can be
added directly to cells to complete the hybrid system

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ระบบไฮบริดที่สองตามตัวแปรของสึกคาร์บอanhydrase (CA), เอนไซม์ที่ผูก Zn2 + กับ KD ของประมาณ 4 pM ในงานวิศวกรรมโมเลกุลหรูหราห้องปฏิบัติการ Fierke ก็สามารถปรับแต่งความจำเพาะและความสัมพันธ์ของ CA จะสร้างชุดของโพรบที่สามารถตอบสนองต่อความเข้มข้นทางสรีรวิทยาของรุ่นแรก Zn2+.159วัดเหล่านี้แนะนำ fluorophore มีโมเลกุลขนาดเล็กด้วยเชื่อมโยงกับ anhydrase สึกคาร์บอ เมื่อ Zn2 + ผูกสึกคาร์บอanhydrase ปัจจัยที่สอง (fluorophore dapoxylซัลโฟนาไมด์) binds ไปยังไซต์เปิดใน Zn2 + ไอออน ช่วยให้ระหว่างพลังงาน dapoxyl moiety ไป fluorophore บนเอนไซม์ เมื่อเร็ว ๆ นี้ เซงร้อยเอ็ดรายงานมีความยาวคลื่นยาวปรับเปลี่ยนการปล่อย ratiometric anhydrase สึกคาร์บอZn2 + เซ็นเซอร์ที่สามารถคล้อยตามการถ่ายภาพใน tissues.160ระบบใหม่นี้ใช้ 594 ฟลูออ Alexa เป็นผู้บริจาค FRET และซัลโฟนาไมด์เชสปีกสีฟ้าเป็น fluorophore ให้เป็นผู้รับ หนึ่งข้อจำกัดของเซนเซอร์รุ่นเหล่านี้คือ ความต้องการสำหรับmicroinjection หรือสิ่งที่แนบมาของเปปไทด์ที่เจาะเซลล์ไปแนะนำเข้าสู่เซลล์ เนื่องจากโควาเลนต์ที่แนบมาfluorophore ป้องกันการสอบสวนพันธุencodable.40 อย่างไรก็ตาม ล่าซ้ำได้แทนfluorophore โมเลกุลเล็กกับ FP ซึ่งเป็นส่วนหนึ่งของการโพรบ (CA-FP) จะถูกเข้ารหัสพันธุกรรม และ transfected เป็นมีเซลล์ ซัลโฟนาไมด์ dapoxyl ซึมเข้าไปได้เมมเบรนสามารถเพิ่มโดยตรงกับเซลล์เพื่อให้ระบบไฮบริด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ระบบไฮบริดที่สองจะขึ้นอยู่กับตัวแปรของคาร์บอ
anhydrase (CA) เป็นเอนไซม์ที่ผูก Zn2 + กับ KD ของ
ประมาณ 04:00 ในงานวิศวกรรมหรูหราโมเลกุล
ห้องปฏิบัติการ Fierke ก็สามารถที่จะปรับแต่งจำเพาะและความสัมพันธ์ที่ใกล้ชิด
ของ CA เพื่อสร้างชุดของยานสำรวจที่สามารถตอบสนองต่อ
ความเข้มข้นทางสรีรวิทยาของ Zn2 + 0.159 คนรุ่นแรกของ
ยานสำรวจเหล่านี้ให้ความสำคัญเป็นสารเรืองแสงโมเลกุลขนาดเล็ก covalently
เชื่อมโยงกับคาร์บอ anhydrase เมื่อ Zn2 + ผูกคาร์บอ
anhydrase เป็นปัจจัยที่สอง (คนสารเรืองแสง dapoxyl
sulfonamide) ผูกกับเว็บไซต์ที่เปิดให้บริการใน Zn2 + ไอออนช่วยให้
การถ่ายโอนพลังงานจากครึ่ง dapoxyl เพื่อสารเรืองแสงใน
เอนไซม์ เมื่อเร็ว ๆ นี้เซง, et al รายงานความยาวคลื่นยาว
การปล่อยก๊าซปรับเปลี่ยน ratiometric ของ anhydrase คาร์บอ
Zn2 + เซ็นเซอร์ที่อาจจะคล้อยตามการถ่ายภาพใน tissues.160
ระบบใหม่นี้จะใช้ Alexa Fluor 594 เป็นผู้บริจาคฉลุและ
เชสบลู sulfonamide เป็นสารเรืองแสงผู้ยอมรับ หนึ่งใน
ข้อ จำกัด ของรุ่นนี้ของเซ็นเซอร์เป็นความต้องการสำหรับ
microinjection หรืออายัดเปปไทด์เซลล์เจาะเพื่อ
แนะนำเข้าสู่เซลล์เพราะสิ่งที่แนบมาโควาเลนต์ของ
สารเรืองแสงป้องกันไม่ให้เกิดการสอบสวนจากการเป็นพันธุกรรม
encodable.40 อย่างไรก็ตามการทำซ้ำที่ผ่านมาได้ถูกแทนที่ด้วย
ขนาดเล็ก สารเรืองแสง -molecule กับ FP จึงทำให้ส่วนหนึ่งของ
การสอบสวน (CA-FP) ที่จะเข้ารหัสพันธุกรรมและ transfected เข้าไปใน
เซลล์ เมมเบรนดูดซึม dapoxyl sulfonamide สามารถ
เพิ่มโดยตรงกับเซลล์ที่จะเสร็จสมบูรณ์ระบบไฮบริด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ระบบไฮบริดที่สองจะขึ้นอยู่กับตัวแปรของคาร์บอนิกanhydrase ( CA ) เป็นเอนไซม์ที่ zn2 + กับชนิดของยาประมาณ 4 โมงเย็น หรูหราระดับโมเลกุลวิศวกรรมงานห้องปฏิบัติการ fierke สามารถปรับความจำเพาะและความสัมพันธ์ของ CA เพื่อสร้างชุดของฟิวส์ที่สามารถตอบสนองความเข้มข้นทางสรีรวิทยาของ zn2 + 159 รุ่นแรกของวัดเหล่านี้โดดเด่น fluorophore โมเลกุลขนาดเล็ก covalentlyเชื่อมโยงไปยังฉะนี้แล . เมื่อ zn2 + ผูกคาร์บอนิกanhydrase เป็นโคแฟกเตอร์ ( fluorophore dapoxyl วินาทีซัลโฟนาไมด์ ) ผูกกับเว็บไซต์เปิด zn2 + ไอออนช่วยการถ่ายโอนพลังงานจาก dapoxyl กึ่งหนึ่งให้ fluorophore บนเอนไซม์ เมื่อเร็วๆ นี้ เซง et al . มีความยาวคลื่นยาวการเปลี่ยนแปลงของ ratiometric anhydrase คาร์บอนิกzn2 + เซ็นเซอร์ที่สามารถให้ความร่วมมือในการถ่ายภาพใน tissues.160ระบบใหม่นี้จะใช้ Alexa Fluor 594 เป็นผู้บริจาคและหงุดหงิดเชสสบลูซัลโฟนาไมด์เป็นพระนาสิก fluorophore . หนึ่งข้อจำกัดของรุ่นนี้ของเซ็นเซอร์คือความต้องการสำหรับไมโครอินเจคชันหรือสิ่งที่แนบของเปปไทด์ในการเจาะเซลล์แนะนำลงในเซลล์ เพราะสิ่งที่แนบมาของโควาเลนต์fluorophore ป้องกันการสอบสวนจากพันธุกรรมencodable.40 อย่างไรก็ตามล่าสุด ซ้ำต้องเปลี่ยนfluorophore โมเลกุลเล็กกับ FP จึงทำให้ส่วนหนึ่งของโพรบ ( ca-fp ) เป็น transfected ในการเข้ารหัส และพันธุกรรมเซลล์ เยื่อซึมผ่านได้ dapoxyl ซัลโฟนาไมด์เพิ่มโดยตรงกับเซลล์ที่สมบูรณ์ของระบบไฮบริด