One whole fish taken as a sample was withdrawn from its plastic bag
and was aseptically cut into small pieces prior to homogenization and
dilution. The homogenates were aseptically prepared using a Stomacher
400 Lab Blender (Seward Ltd.,Worthington, UK) at high speed for 3 min.
Serial decimal dilutions were prepared in saline peptone water (0.1%
(w/v) peptone and 0.85% (w/v) NaCl in distilled water) and used as
inoculums in triplicate for colony counting and isolation by the spread
plate technique (Speck, 1984). LAB were isolated using microaerobic
incubation in a candle jar at 30 °C for 3–5 days on MRS agar (Man et al.,
1960) modified by the addition of 1.0% (w/v) CaCO3. Acid producing
bacterial colonies were picked from the agar plates. Where possible, up
to 100 isolates were taken for each sample time. All isolates were
purified and primarily confirmed as LAB based on their microscopic and
biochemical characterizations by performing the Gram's stain, catalase
test, and O–F glucose fermentative test. All LAB isolates were stored at
−80 °C in a freezing medium (Gibson and Khoury, 1986) until
identification by amplified ribosomal DNA restriction analysis
(ARDRA) and ribosomal DNA sequencing.
ทั้งปลาถ่ายเป็นตัวอย่างที่ถูกถอนจากถุงพลาสติก
และ aseptically หั่นเป็นชิ้นเล็กๆก่อนการเจือจางและ
. การ homogenates เป็น aseptically เตรียมใช้แผงประดับหน้าอก
400 Lab เครื่องปั่น ( ซีเวิร์ดจำกัด , Worthington , UK ) ที่ความเร็วสูง 3 นาที
อนุกรมทศนิยมถูกเตรียมในน้ำเกลือเจือจางเปปโตนน้ำ ( 0.1 %
( w / v ) ตามลำดับ และ 085 % ( w / v ) เกลือโซเดียมคลอไรด์ในน้ำ ) และใช้เป็น
18 ชั่วโมงทั้งสามใบสำหรับอาณานิคมนับและการแยกโดยเทคนิคกระจาย
จาน ( จุด , 1984 ) แล็บทดลองแยกใช้ microaerobic
บ่มในเทียนขวด 30 °องศาเซลเซียส เป็นเวลา 3 - 5 วัน นางวุ้น ( et al . ,
1960 ) ดัดแปลงโดยเพิ่ม 1% ( w / v ) CaCO3 . แบคทีเรียที่ผลิตกรด
อาณานิคมถูกเลือกจาก วุ้นแผ่น ที่เป็นไปได้ขึ้น
100 ไอโซเลทนำสำหรับแต่ละตัวอย่างเวลา ทุกสายพันธุ์เป็นหลักยืนยัน
บริสุทธิ์และห้องปฏิบัติการ ตามด้วย
ชีวเคมี characterizations โดยการดำเนินการของกรัมคราบ , ซิลิกา
, o F กลูโคสและวิศวกรรมเคมี ทดสอบ ทั้งหมดแล็บเชื้อที่อุณหภูมิ 80 องศา C
−ในการแช่แข็งปานกลาง ( กิ๊บสัน และเคารี่ , 1986 ) จนกว่า
ไรโบโซมอลดีเอ็นเอจำกัดระบุโดยการวิเคราะห์
ขยาย ( ardra ) ลำดับ DNA และ Protein .
การแปล กรุณารอสักครู่..