Examples of other antibody derivati

Examples of other antibody derivatives provided by the การประดิษฐ์นี้ 5 รวมถึง single chain antibodies, diabodies, domain antibodies, nanobodies, and
unibodies. ในบาง รูปลักษณะ, the โมโนโคลนอล antibodies may be ไคเมริก
antibodies, ฮิวเมไนซ์ antibodies, ฮิวเมน antibodies, DeImmunizedTM antibodies,
ไบสเปซิฟิก antibodies, single-chain antibodies, fragments, ที่รวมถึง Fab, F(ab')2, Fv
or other fragments which retain the antigen binding function of the parent
10 antibody. Single chain antibodies ("ScFv") and the method of their construction are
described in U.S. Patent No. 4,946,778.
A "single-chain antibody" (scFv) consists of a single โพลีเปปไทด์ chain
ซึ่งประกอบรวมด้วย a VL domain linked to a VH domain โดยที่ VL domain and VH
domain are paired to form a monovalent molecule. Single chain antibody can be
15 prepared according to method known in the art (see, for example, Bird et al., (1988)
Science 242:423-426 and Huston et al., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-
5883). A "diabody" consists of two chains, each chain ซึ่งประกอบรวมด้วย a heavy chain
variable region connected to a บริเวณ แปรผัน สายเบา on the same โพลีเปปไทด์
chain connected by a short peptide linker, โดยที่ the two regions on the same
20 chain do not pair with each other but with complementary domains on the other
chain to form a ไบสเปซิฟิก molecule. Methods of preparing diabodies are known in
the art (See, e.g., Holliger P. et al., (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 906444-6448,
and Poljak R. J. et al., (1994) Structure 2:1121-1123). Domain antibodies (dAbs) are
small functional binding units of antibodies, corresponding to the variable regions 25 of either the heavy หรือ light chains of antibodies. Domain antibodies are well
expressed in bacterial, yeast, and mammalian cell systems. Further details of
domain antibodies and methods of production ของมัน are known in the art (see, for
example, U.S. Patent Nos. 6,291,158; 6,582,915; 6,593,081; W004/003019 and
W003/002609). Nanobodies are derived from the heavy chains of an antibody. A 30 nanobody typically ประกอบรวมด้วย a single variable domain and two constant domains
(CH2 and CH3) and retains antigen-binding capacity of the original antibody.
Nanobodies can be prepared by methods known in the art (see e.g., U.S. Patent No.
6,765,087, U.S. Patent No. 6,838,254, WO 06/079372). Unibodies consist of one


light chain and one heavy chain of an IgG4 antibody. Unibodies may be made by
the removal of the hinge region of IgG4 antibodies. Further details of unibodies and methods of preparing them may be found in W02007/059782.
In addition to the binding moiety, the molecules of the การประดิษฐ์ may
5 further ประกอบรวมด้วย a moiety for increasing the in vivo half-life of the molecule, such
as but not limited to polyethylene glycol (PEG), ฮิวเมน serum albumin,
glycosylation groups, fatty acids and dextran. Such further มอยอิตี้ may be
conjugated หรือ otherwise combined with the binding moiety using methods well known in the art.
10 A further aspect of the การประดิษฐ์ provides a nucleic acid molecule encoding
an amino acid sequence of a CD134-binding โมเลกุลยึดเกาะ according to the first
aspect of the การประดิษฐ์. The amino acid sequence encoded by the nucleic acid
molecule may be any portion of an intact antibody, such as a CDR, a sequence
ซึ่งประกอบรวมด้วย one, two, หรือ three CDRs, หรือ a variable region of a heavy chain หรือ light 15 chain, หรือ may be a full-length heavy chain หรือ light chain. ในบาง รูปลักษณะ, the
nucleic acid molecule เข้ารหัส an amino acid sequence that ประกอบรวมด้วย (1) a CDR3
region, particularly a heavy chain CDR3 region, of antibodies clone 12H3 and/or
clone 20E5; (2) a variable region of a heavy chain หรือ variable region of a light chain
of antibodies clone 12H3 and/or clone 20E5; หรือ (3) a heavy chain หรือ a light chain of 20 antibodies clone 12H3 and/or clone 20E5. In other embodiments, the nucleic acid
molecule เข้ารหัส a โพลีเปปไทด์ that ประกอบรวมด้วย an amino acid sequence selected
from the group consisting ของ SEQ ID NO: 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 หรือ 19, หรือ from
the group consisting ของ SEQ ID NO: 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 หรือ 11.
The nucleic acid molecules provided by the การเปิดเผย may be obtained from 25 any source that produces a CD134 antibody in accordance with the การประดิษฐ์.
mRNA from แอนติ-CD134 antibody-producing cells may be isolated by standard
techniques, cloned and/or amplified using PCR and library construction techniques,
and screened using standard protocols to obtain nucleic acid molecules encoding an
amino acid sequence of an แอนติ-CD134 antibody. The mRNA may be used to
30 produce cDNA for use in the polymerase chain reaction (PCR) หรือ cDNA cloning of
antibody genes. ในหนึ่ง รูปลักษณะ, the nucleic acid molecule คือ obtained from a
hybridoma that expresses an แอนติ-CD134 antibody, as described above, preferably a
hybridoma that has as one of its fusion partners a non-ฮิวเมน transgenic animal


cell that expresses ฮิวเมน immunoglobulin genes. ในอีกหนึ่ง รูปลักษณะ, the
hybridoma คือ derived from a non-ฮิวเมน, non-transgenic animal.
A nucleic acid molecule encoding the heavy chain of an แอนติ-CD134 antibody
may be constructed by fusing a nucleic acid molecule encoding the heavy variable 5 region with a nucleic acid molecule encoding a constant region of a heavy chain.
Similarly, a nucleic acid molecule encoding the light chain of an แอนติ-CD134
antibody may be constructed by fusing a nucleic acid molecule encoding the light
chain variable region with a nucleic acid molecule encoding a constant region of a
light chain. The nucleic acid molecules encoding the VH and VL chain may be
10 converted to full-length antibody genes by inserting them into expression vectors
already encoding heavy chain constant and light chain constant regions,
ตามลำดับ, such that the VH segment คือ operatively linked to the heavy chain
constant region (CH) segment(s) within the vector and the VL segment คือ
operatively linked to the light chain constant region (CL) segment within the
15 vector. Alternatively, the nucleic acid molecules encoding the VH หรือ VL chains are
converted into full-length antibody genes by linking, e.g., ligating, the nucleic acid
molecule encoding a VH chain to a nucleic acid molecule encoding a CH chain using
standard molecular biological techniques. The same may be achieved using nucleic
acid molecules encoding the VL and the CL chains. Nucleic acid molecules encoding 20 the full-length heavy and/or light chains may then be expressed from a cell into
which they have been introduced and the แอนติ-CD134 antibody isolated.
The nucleic acid molecules may be used to รีคอมบิแนนต์ly express large
quantities of แอนติ-CD134 antibodies, as described below. The nucleic acid molecules
may also be used to produce other โมเลกุลยึดเกาะs provided by the การเปิดเผย, 25 such as ไคเมริก antibodies, single chain antibodies, immunoadhesins, diabodies,
mutated antibodies, ไบสเปซิฟิก antibodies, and antibody derivatives, as described
elsewhere herein. ในหนึ่ง รูปลักษณะ, a nucleic acid molecule คือ used as probe หรือ
PCR primer for specific antibody sequences. For instance, a nucleic acid molecule
probe may be used in diagnostic methods หรือ a nucleic acid molecule PCR primer 30 may be used to amplify regions of DNA that could be used, inter alia, to isolate
nucleic acid sequences for use in producing variable regions of the แอนติ-CD134
antibodies.
Once DNA molecules encoding the VH and VL segments of an แอนติ-CD134
antibody are obtained, these DNA molecules can be further manipulated by
รีคอมบิแนนต์ DNA techniques, for example to convert the variable region genes to
full-length antibody chain genes, to Fab fragment genes, to a scFv gene, หรือ they 5 can be incorporated into ไบสเปซิฟิก antibodies.
A further aspect of the การประดิษฐ์ provides a vector, which ประกอบรวมด้วย a
nucleic acid molecule described herein above. The nucleic acid molecule may encode
a portion of a light chain หรือ heavy chain (such as a CDR หรือ a variable region), a
full-length light หรือ heavy chain, โพลีเปปไทด์ that ประกอบรวมด้วย a portion หรือ full-length 10 of a heavy หรือ light chain, หรือ an amino acid sequence of an antibody derivative หรือ
antigen-binding fragment.
An example of a suitable expression vector คือ one that เข้ารหัส a functionally
complete ฮิวเมน CH หรือ CL immunoglobulin sequence, with appropriate restriction
sites engineered so that any VH หรือ VL sequence can be inserted and expressed. The 15 expression vector can encode a signal peptide that facilitates secretion of the amino
acid sequence of the antibody chain from a host cell. The DNA encoding the amino
acid sequence of an antibody chain may be cloned into the vector such that the
signal peptide คือ linked in-frame to the amino terminus of the amino acid sequence
of the antibody chain. The signal peptide can be an immunoglobulin signal peptide 20 หรือ a heterologous signal peptide (i.e., a signal peptide from a non-immunoglobulin
protein). In addition to the nucleic acid sequence encoding an amino

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตัวอย่างของตราสารอนุพันธ์อื่น ๆ แอนติบอดีโดยแอนตี้โซ่เดียว 5 รวมถึงการประดิษฐ์นี้ diabodies โดเมนแอนตี้ nanobodies และ unibodies ในบางรูปลักษณะ แอนตี้โมโนโคลนอลอาจไคเมริก แอนตี้ แอนตี้ฮิวเมไนซ์ ฮิวเมนแอนตี้ แอ นตี้ DeImmunizedTM ไบสเปซิฟิกแอนตี้ แอนตี้เดียวโซ่ ชิ้นส่วน ที่รวมถึง Fab, F(ab') 2, Fv หรือชิ้นส่วนอื่น ๆ ที่รักษาฟังก์ชันรวมตรวจหาของ แอนติบอดี 10 แอนตี้สายเดียว ("ScFv") และวิธีการก่อสร้างของพวกเขาอธิบายในสหรัฐอเมริกาสิทธิบัตรหมายเลข 4,946,778"โซ่เดียวแอนติบอดี" (scFv) ประกอบด้วยโซ่โพลีเปปไทด์เดียวซึ่งประกอบรวมด้วย VL โดเมนกับโดเมน VH โดเมนโดยที่ VL และ VHโดเมนจะถูกจับคู่ในรูปแบบโมเลกุล monovalent แอนติบอดีสายเดี่ยวได้15 เตรียมตามวิธีที่รู้จักกันในศิลปะ (ดู เช่น al. นกร้อยเอ็ด, (1988)242:423 วิทยาศาสตร์-426 และ al. et Huston, 85:5879-Proc. Natl. Acad. Sci. ประเทศสหรัฐอเมริกา (1988) 5883) . "diabody" ประกอบด้วย 2 โซ่ ซึ่งประกอบรวมด้วยโซ่แต่ละโซ่หนัก ตัวแปรภูมิภาคที่เชื่อมต่อกับสายเบาแปรผันเป็นบริเวณในโพลีเปปไทด์เดียวกัน ห่วงโซ่ที่เชื่อมต่อกัน ด้วยตัวเชื่อมโยงเขตเพปไทด์สั้น โดยที่สองภูมิภาคบนเหมือนกัน 20 โซ่คู่กัน แต่โดเมนเพิ่มเติมอื่น ๆ โซ่แบบโมเลกุลไบสเปซิฟิก วิธีการเตรียม diabodies รู้จักกันใน ศิลปะ (ดู เช่น Holliger P. et al., (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. 906444-6448 สหรัฐอเมริกา และ Poljak R. J. et al., 2:1121 (1994) โครงสร้าง-1123) เป็นโดเมนแอนตี้ (ป้าย) รวมขนาดเล็กทำงานของแอนตี้ ที่สอดคล้องกับตัวแปรภูมิภาค 25 ของใดหนักหรือเบาโซ่ของแอนตี้ระบุหน่วย แอนตี้โดเมนอยู่ แสดงในแบคทีเรีย ยีสต์ และระบบเซลล์ mammalian รายละเอียดเพิ่มเติม แอนตี้โดเมนและวิธีการผลิตของมันรู้จักกันในศิลปะ (ดู สำหรับ ตัวอย่าง สหรัฐอเมริกาสิทธิบัตรชุด 6,291,158 6,582,915 6,593,081 W004/003019 และ W003/002609) Nanobodies มาจากโซ่หนักของแอนติบอดีที่ 30 nanobody ประกอบรวมด้วยโดยปกติแล้วโดเมนตัวแปรเดี่ยวและสองโดเมนคง (CH2 และ CH3) และยังคงตรวจหารวมกำลังการผลิตของแอนติบอดีที่เดิม สามารถเตรียม โดยวิธีที่รู้จักกันในศิลปะ (ดูเช่น สิทธิบัตรสหรัฐอเมริกาหมายเลข Nanobodies 6,765,087 หมายเลขสิทธิบัตรสหรัฐอเมริกา 6,838,254, WO 06/079372) Unibodies ประกอบด้วยหนึ่งสายไฟและสายหนึ่งหนักของแอนติบอดี IgG4 ที่ Unibodies อาจจะทำโดยเอาภาคบานพับของ IgG4 แอนตี้ รายละเอียดเพิ่มเติมของ unibodies และวิธีการเตรียมดังกล่าวอาจพบใน W02007/059782นอกจากผูก moiety โมเลกุลของการประดิษฐ์อาจ5 เพิ่มเติมประกอบรวมด้วย moiety สำหรับเพิ่ม half-life ในสัตว์ทดลองของโมเลกุล เช่นเป็นวันแต่ไม่จำกัดเฉพาะการ polyethylene glycol (PEG), ฮิวเมน serum albuminglycosylation กลุ่ม กรดไขมันและเดกซ์แทรน มอยอิตี้เพิ่มเติมเช่นอาจกลวงหรือที่อื่นใดรวมกับ moiety ผูกใช้วิธีที่รู้จักกันดีในศิลปะ10 ด้านการประดิษฐ์การต่อให้เป็นกรดนิวคลีอิกโมเลกุลเข้าลำดับกรดอะมิโนเป็นของโมเลกุลยึดเกาะ CD134 ผูกตามครั้งแรก ด้านการประดิษฐ์ ลำดับกรดอะมิโนที่ถูกเข้ารหัส ด้วยกรดนิวคลีอิก โมเลกุลอาจจะส่วนหนึ่งส่วนใดของแอนติบอดียังเหมือนเดิม เช่น CDR ลำดับ ซึ่งประกอบรวมด้วยหนึ่ง สอง สามหรือ CDRs สาย 15 ไฟหรือแคว้นหรือโซ่หนักตัวแปร หรืออาจเป็นสายไฟหรือสายจัดหนัก ในบางรูปลักษณะ กรดนิวคลีอิกโมเลกุลเข้ารหัสเป็นกรดอะมิโนลำดับที่ประกอบรวมด้วย (1) เป็น CDR3 ภูมิภาค โดยเฉพาะอย่างยิ่งการหนักโซ่ CDR3 ภูมิภาค แอนตี้โคลนราคา 12H 3 / 20E5 โคลน (2) ภูมิภาคตัวแปรของภูมิภาคแปรหรือโซ่หนักของสายไฟ ของแอนตี้ 12H 3 โคลน หรือโคลน 20E5 หรือ (3) หรือลูกโซ่หนักโซ่ไฟของแอนตี้ 20 12H 3 โคลน หรือโคลน 20E5 ในอื่น ๆ embodiments กรดนิวคลีอิก เลือกที่ประกอบรวมด้วยลำดับที่กรดอะมิโนโมเลกุลเข้ารหัสโพลีเปปไทด์เป็น จากกลุ่มที่ประกอบด้วยรหัสของลำดับนั้น ๆ ไม่: 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 หรือ 19 หรือจาก กลุ่มที่ประกอบด้วยรหัสของลำดับนั้น ๆ ไม่: 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 หรือ 11โมเลกุลของกรดนิวคลีอิกที่โดยการเปิดเผยที่ได้จาก 25 แหล่งการผลิตแอนติบอดี CD134 ตามการประดิษฐ์ mRNA จากเซลล์การผลิตแอนติบอดีแอนติ CD134 อาจแยกต่างหากตามมาตรฐาน เทคนิค โคลน / ขยายโดยใช้ PCR และไลบรารีเทคนิค และฉายโดยใช้โพรโทคอลมาตรฐานโมเลกุลของกรดนิวคลีอิกที่เข้ารับการ ลำดับกรดอะมิโนของแอนติบอดีมีแอนติ CD134 MRNA อาจใช้ 30 ผลิต cDNA สำหรับใช้ในการพอลิเมอเรสปฏิกิริยาลูกโซ่ (PCR) หรือ cDNA โคลนของ ยีนแอนติบอดี ในหนึ่งรูปลักษณะ คือโมเลกุลกรดนิวคลีอิกได้รับจากการ hybridoma ที่แสดงเป็นแอนติบอดีแอนติ CD134 ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ควร เป็น hybridoma ที่เป็นหนึ่งของการหลอมเหลวของพันธมิตรไม่ใช่ฮิวเมนถั่วเหลืองสัตว์เซลล์ที่แสดงยีน immunoglobulin ฮิวเมน ในอีกหนึ่งรูปลักษณะhybridoma คือมาไม่ใช่-ฮิวเมน ไม่ใช่ถั่วเหลืองสัตว์โมเลกุลกรดนิวคลีอิกที่เข้าโซ่หนักของแอนติบอดีมีแอนติ CD134 อาจสร้างขึ้นโดยโมเลกุลกรดนิวคลีอิกการเข้ารหัสตัวแปรหนัก 5 ภูมิภาค ด้วยโมเลกุลของกรดนิวคลีอิกเข้าแคว้นเชนหนักคง ในทำนองเดียวกัน โมเลกุลกรดนิวคลีอิกเป็นสายไฟของแอนติ-CD134 การเข้ารหัส แอนติบอดีอาจสร้างขึ้นโดยโมเลกุลของกรดนิวคลีอิกเข้าไฟ โซ่โมเลกุลกรดนิวคลีอิกที่เข้าพื้นที่คงตัวแปรภาคการ สายไฟ โมเลกุลของกรดนิวคลีอิกที่เข้าสาย VH และ VL อาจ 10 แปลงเป็นแอนติบอดีที่ปราศจากยีนเหล่านั้นใส่ลงในเวกเตอร์นิพจน์เข้าแล้วหนักโซ่โซ่คง และแสงคงภูมิภาคตามลำดับ VH เซ็กเมนต์คือ operatively ที่เชื่อมโยงกับห่วงโซ่หนัก segment(s) คงภูมิภาค (CH) เวกเตอร์และคือส่วน VL operatively กับส่วนภูมิภาคคง (CL) สายไฟภายใน เวกเตอร์ 15 มีโมเลกุลของกรดนิวคลีอิกที่เข้ารหัส VH หรือ VL โซ่หรือ แปลงเป็นแอนติบอดีที่ปราศจากยีน โดยการเชื่อมโยง เช่น ligating กรดนิวคลีอิก เข้ารหัสโซ่ VH กับโมเลกุลกรดนิวคลีอิกที่เข้ารหัสโดยใช้ CH โซ่โมเลกุล เทคนิคโมเลกุลชีวภาพมาตรฐาน เดียวกันอาจทำได้โดยใช้ nucleic โมเลกุลกรดที่เข้ารหัสแบบ VL และโซ่ CL โมเลกุลของกรดนิวคลีอิกที่เข้ารหัส 20 จัดหนัก / เบาโซ่อาจแล้วแสดงจากเซลล์ออก ซึ่งพวกเขาได้รับการแนะนำและแอนติบอดีแอนติ CD134 แยกต่างหากโมเลกุลของกรดนิวคลีอิกอาจใช้ รีคอมบิแนนต์ly ด่วนมากปริมาณของแอนตี้แอนติ CD134 ตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง โมเลกุลของกรดนิวคลีอิก ยังสามารถใช้ในการผลิตอื่น ๆ โดยการเปิดเผย 25 ไคเมริกแอนตี้ แอนตี้ในโซ่เดียว immunoadhesins, diabodies, โมเลกุลยึดเกาะs แอนตี้กลาย แอนตี้ไบสเปซิฟิก และตรา สารอนุพันธ์แอนติบอดี ดังที่ อื่น ๆ นี้ ในหนึ่งรูปลักษณะ คือโมเลกุลของกรดนิวคลีอิกที่ใช้เป็นโพรบ รองพื้น PCR สำหรับแอนติบอดีที่เฉพาะลำดับ ตัวอย่าง โมเลกุลกรดนิวคลีอิก อาจใช้โพรบในวิธีการวินิจฉัยหรืออาจใช้เป็นกรดนิวคลีอิกโมเลกุล PCR พื้น 30 ขยายขอบเขตของดีเอ็นเอที่สามารถใช้ได้ inter alia อ้างว้าง ลำดับกรดนิวคลีอิกสำหรับใช้ในการผลิตผันแปรแคว้นแอนติ CD134 แอนตี้กันเมื่อดีเอ็นเอโมเลกุลเข้ากลุ่มเป็นแอนติ-CD134 VH และ VL จะได้รับแอนติบอดี โมเลกุลดีเอ็นเอเหล่านี้สามารถมีจัดการเพิ่มเติมโดย เทคนิคดีเอ็นเอรีคอมบิแนนต์ ตัวอย่างการแปลงยีนภูมิภาคแปรไป แอนติบอดีที่ปราศจากโซ่ยีน การ Fab ส่วนยีน การยีน scFv หรือพวกเขาสามารถรวมอยู่ในแอนตี้ไบสเปซิฟิก 5ลักษณะเพิ่มเติมของการประดิษฐ์มีเวกเตอร์ ประกอบรวมด้วยซึ่งเป็นข้างนี้โมเลกุลกรดนิวคลีอิก โมเลกุลกรดนิวคลีอิกอาจเข้ารหัส ส่วนของโซ่หนักหรือเบาโซ่ (เช่นแบบ CDR หรือภูมิภาคแปร), การ ห่วงโซ่หนักหรือจัดเบา โพลีเปปไทด์ที่ประกอบรวมด้วยหรือส่วน 10 ปราศจากหรือหนักเป็นลำดับกรดอะมิโนหรือการพัฒนาแอนติบอดีสาย หรือไฟ ส่วนตรวจหารวมตัวอย่างของนิพจน์เหมาะเวกเตอร์คือหนึ่งเข้ารหัสที่เป็นฟังก์ชัน ทำฮิวเมน CH หรือ CL immunoglobulin ลำดับ ด้วยข้อจำกัดที่เหมาะสม เว็บไซต์ที่ออกแบบทางวิศวกรรมเพื่อให้สามารถใส่ และแสดงลำดับใด VL หรือ VH เวกเตอร์นิพจน์ 15 สามารถเข้ารหัสเพปไทด์สัญญาณที่อำนวยความสะดวกการหลั่งของอะมิโน ลำดับกรดของแอนติบอดีจากเซลล์โฮสต์ ดีเอ็นเอเข้าอะมิโน อาจถูก cloned ลำดับกรดของแอนติบอดีที่เป็นเวกเตอร์เช่นว่านี้ สัญญาณเพปไทด์คือลิงค์ในเฟรมให้นัสอะมิโนลำดับกรดอะมิโน ของแอนติบอดี เพปไทด์สัญญาณสามารถเป็น immunoglobulin สัญญาณเพปไทด์ 20 หรือเพปไทด์สัญญาณ heterologous (เช่น เป็นเพปไทด์ส่งสัญญาณจากการไม่-immunoglobulin โปรตีน) นอกจากลำดับกรดนิวคลีอิกเข้าเป็นอะมิโน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตัวอย่างของสัญญาซื้อขายล่วงหน้าแอนติบอดีอื่น ๆ ที่จัดไว้ให้โดยการประดิษฐ์นี้ 5 รวมถึงแอนติบอดีโซ่เดียว diabodies แอนติบอดีโดเมน nanobodies และ
unibodies ในบางรูปลักษณะที่โมโนโคลนอลแอนติบอดีที่อาจจะเป็นไคเมริกแอนติบอดี้, ฮิวเมไนซ์แอนติบอดี้, ฮิวเมนแอนติบอดีแอนติบอดี DeImmunizedTM, ไบสเปซิแอนติบอดีฟิกแอนติบอดีเดียวโซ่เศษเล็กเศษน้อยที่รวมถึง Fab, f (AB) 2 Fv หรือชิ้นส่วนอื่น ๆ ที่ยังคงมีแอนติเจนฟังก์ชั่นที่มีผลผูกพันของแม่10 แอนติบอดี แอนติบอดีโซ่เดี่ยว ("scFv") และวิธีการในการก่อสร้างของพวกเขาได้รับการอธิบายไว้ในสิทธิบัตรสหรัฐอเมริกาเลขที่4946778. A "แอนติบอดีเดียวโซ่" (scFv) ประกอบด้วยเดียวโพลีเปปไทด์ห่วงโซ่ซึ่งประกอบรวมด้วยVL โดเมนที่เชื่อมโยงไปยังโดเมน VH โดยที่โดเมนและ VL VH โดเมนจะจับคู่ในรูปแบบโมเลกุล monovalent แอนติบอดีโซ่เดียวสามารถ15 จัดทำขึ้นตามวิธีการที่รู้จักกันในงานศิลปะ (ดูตัวอย่างเช่นนก, et al (1988). วิทยาศาสตร์ 242:.... 423-426 และฮัส, et al (1988) พร Natl Acad วิทย์ USA. 85: 5879- 5883) A "diabody" ประกอบด้วยสองโซ่แต่ละห่วงโซ่ซึ่งประกอบรวมด้วยโซ่หนักภูมิภาคตัวแปรที่เชื่อมต่อกับบริเวณแปรผันสายเบาที่เดียวกันโพลีเปปไทด์ห่วงโซ่เชื่อมต่อกันด้วยตัวเชื่อมโยงเปปไทด์ระยะสั้นโดยที่ทั้งสองภูมิภาคในเดียวกัน20 ห่วงโซ่ไม่ได้จับคู่กับแต่ละอื่น ๆ แต่มีโดเมนเสริมอื่น ๆ ในห่วงโซ่ในรูปแบบไบสเปซิฟิกโมเลกุล วิธีการเตรียมความพร้อม diabodies เป็นที่รู้จักกันในศิลปะ(ดูเช่น Holliger พี, et al (1993) พร Natl Acad วิทย์สหรัฐอเมริกา 906444-6448..... และ Poljak RJ, et al (1994) โครงสร้าง 2. 1121-1123) แอนติบอดีโดเมน (dabs) ที่มีขนาดเล็กที่มีผลผูกพันหน่วยการทำงานของแอนติบอดี้ที่สอดคล้องกับภูมิภาคตัวแปร25 ของทั้งโซ่หนักหรือเบาของแอนติบอดี แอนติบอดีโดเมนเป็นอย่างดีแสดงออกในแบคทีเรียยีสต์และระบบเซลล์เลี้ยงลูกด้วยนม รายละเอียดเพิ่มเติมของแอนติบอดีโดเมนและวิธีการของการผลิตของมันเป็นที่รู้จักกันในงานศิลปะ(ดูตัวอย่างเช่นสหรัฐอเมริกาสิทธิบัตรเลขที่6,291,158. 6,582,915; 6,593,081; W004 / 003,019 และW003 / 002609) Nanobodies จะได้มาจากโซ่หนักของแอนติบอดี 30 nanobody มักจะประกอบรวมด้วยโดเมนตัวแปรเดียวและสองโดเมนคงที่(CH2 และ CH3) และยังคงรักษาความสามารถในการแอนติเจนผูกพันของแอนติบอดีเดิม. Nanobodies สามารถจัดทำโดยวิธีการที่รู้จักกันในงานศิลปะ (ดูเช่นสิทธิบัตรสหรัฐอเมริกาเลขที่6765087 , สิทธิบัตรสหรัฐอเมริกาเลขที่ 6838254, WO 06/079372) Unibodies ประกอบด้วยหนึ่งในห่วงโซ่แสงและเป็นหนึ่งในห่วงโซ่หนักของแอนติบอดีIgG4 Unibodies อาจจะทำโดยการกำจัดของภูมิภาคบานพับของแอนติบอดีIgG4 ที่ รายละเอียดเพิ่มเติมของ unibodies และวิธีการเตรียมความพร้อมให้พวกเขาอาจพบได้ใน W02007 / 059782. นอกจากครึ่งผูกพันโมเลกุลของการประดิษฐ์อาจจะเป็นการ5 ต่อไปประกอบรวมด้วยครึ่งหนึ่งสำหรับการเพิ่มขึ้นในร่างกายครึ่งชีวิตของโมเลกุล ดังกล่าวเป็นแต่ไม่ จำกัด เฉพาะเอทิลีนไกลคอล (PEG), ฮิวเมนเซรั่มอัลบูมิ, กลุ่มไกลโคซิเล, กรดไขมันและ dextran ดังกล่าวต่อไปมอยอิตี้อาจจะผันหรือรวมอย่างอื่นที่มีครึ่งผูกพันโดยใช้วิธีการที่รู้จักกันดีในงานศิลปะ. 10 ด้านที่ต่อไปของการประดิษฐ์ให้โมเลกุลของกรดนิวคลีอิกเข้ารหัสลำดับกรดอะมิโนของโมเลกุลCD134 ผูกพันยึดเกาะ ตามที่แรกทุกแง่มุมของการประดิษฐ์ ลำดับกรดอะมิโนเข้ารหัสโดยกรดนิวคลีอิกโมเลกุลอาจจะเป็นส่วนหนึ่งส่วนใดของแอนติบอดีเหมือนเดิมเช่น CDR, ลำดับซึ่งประกอบรวมด้วยหนึ่งสองหรือสามCDRs, หรือภูมิภาคตัวแปรของห่วงโซ่หนักหรือเบา 15 ห่วงโซ่ , หรืออาจจะเป็นความยาวเต็มห่วงโซ่ห่วงโซ่หนักหรือเบา ในบางรูปลักษณะที่โมเลกุลของกรดนิวคลีอิกเข้ารหัสลำดับกรดอะมิโนที่ประกอบรวมด้วย (1) CDR3 ภูมิภาคโดยเฉพาะอย่างยิ่งห่วงโซ่หนักภูมิภาค CDR3 ของแอนติบอดีโคลน 12H3 และ / หรือโคลน20E5; (2) ภูมิภาคตัวแปรของห่วงโซ่หนักหรือภูมิภาคตัวแปรของห่วงโซ่แสงของแอนติบอดีโคลน12H3 และ / หรือโคลน 20E5; หรือ (3) ห่วงโซ่หนักหรือห่วงโซ่แสง 20 แอนติบอดีโคลน 12H3 และ / หรือโคลน 20E5 ใน embodiments อื่น ๆ กรดนิวคลีอิกโมเลกุลเข้ารหัสโพลีเปปไทด์ที่ประกอบรวมด้วยลำดับกรดอะมิโนที่เลือกจากกลุ่มประกอบด้วยของSEQ ID NO: 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 หรือ 19 หรือจากกลุ่มประกอบด้วยของSEQ ID NO: 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 หรือ 11 โมเลกุลกรดนิวคลีอิกจัดไว้ให้โดยการเปิดเผยอาจจะได้รับจาก 25 แหล่งที่มาใด ๆ ที่ผลิตแอนติบอดี CD134 สอดคล้องกับ การประดิษฐ์. mRNA จากแอนติ -CD134 แอนติบอดีผลิตเซลล์อาจจะแยกออกจากมาตรฐานเทคนิคโคลนและ/ หรือขยายโดยใช้เทคนิค PCR และการก่อสร้างห้องสมุดและการคัดเลือกโดยใช้โปรโตคอลมาตรฐานที่จะได้รับโมเลกุลของกรดนิวคลีการเข้ารหัสลำดับกรดอะมิโนแอนติ -CD134 แอนติบอดี mRNA อาจจะใช้ในวันที่30 ยีนผลิตสำหรับใช้ในวิธี polymerase chain reaction (PCR) หรือโคลน cDNA ของยีนแอนติบอดี ในหนึ่งรูปลักษณะโมเลกุลของกรดนิวคลีอิกคือได้รับจากไฮบริว่าเป็นการแสดงออกถึงแอนติ -CD134 แอนติบอดีตามที่อธิบายไว้ข้างต้นโดยเฉพาะอย่างไฮบริที่ได้เป็นหนึ่งในหุ้นส่วนของฟิวชั่นที่ไม่ใช่ฮิวเมนพันธุ์สัตว์เซลล์ที่แสดงออกฮิวเมนยีนอิมมูโน ในอีกหนึ่งรูปลักษณะที่ไฮบริคือมาจากที่ไม่ใช่ฮิวเมนสัตว์ที่ไม่ใช่พันธุ์. โมเลกุลของกรดนิวคลีอิกเข้ารหัสห่วงโซ่หนักของแอนติ -CD134 แอนติบอดีอาจถูกสร้างขึ้นโดยการหลอมรวมโมเลกุลของกรดนิวคลีอิกเข้ารหัสตัวแปรหนัก 5 ภูมิภาคที่มีโมเลกุลของกรดนิวคลีอิกเข้ารหัสภูมิภาคอย่างต่อเนื่องของห่วงโซ่หนัก. ในทำนองเดียวกันโมเลกุลกรดนิวคลีอิกเข้ารหัสห่วงโซ่แสงของแอนติ -CD134 แอนติบอดีอาจถูกสร้างขึ้นโดยการหลอมรวมเป็นโมเลกุลของกรดนิวคลีอิกเข้ารหัสแสงตัวแปรห่วงโซ่พื้นที่ที่มีโมเลกุลของกรดนิวคลีอิกเข้ารหัสภูมิภาคอย่างต่อเนื่องของห่วงโซ่แสง โมเลกุลของกรดนิวคลีอิกเข้ารหัส VH และห่วงโซ่ VL อาจจะ10 แปลงเป็นยีนแอนติบอดียาวเต็มรูปแบบโดยการใส่พวกเขาเป็นพาหะแสดงออกแล้วเข้ารหัสคงห่วงโซ่หนักและห่วงโซ่แสงภูมิภาคอย่างต่อเนื่องตามลำดับเช่นว่าส่วนVH คือการเชื่อมโยงผ่าตัดไป ห่วงโซ่หนักภูมิภาคคงที่(CH) ส่วน (s) ภายในเวกเตอร์และส่วน VL คือการเชื่อมโยงห่วงโซ่การผ่าตัดแสงภูมิภาคอย่างต่อเนื่อง(CL) ส่วนภายใน15 เวกเตอร์ อีกทางเลือกหนึ่งโมเลกุลของกรดนิวคลีเข้ารหัสโซ่ VH หรือ VL จะถูกแปลงเป็นยีนแอนติบอดียาวเต็มรูปแบบโดยการเชื่อมโยงเช่นligating, กรดนิวคลีอิกโมเลกุลเข้ารหัสโซ่VH ไปยังโมเลกุลของกรดนิวคลีอิกเข้ารหัสโซ่ชโดยใช้เทคนิคทางชีววิทยาโมเลกุลมาตรฐาน เดียวกันอาจทำได้โดยใช้นิวคลีอิกโมเลกุลของกรดเข้ารหัส VL และโซ่ CL โมเลกุลของกรดนิวคลีอิกเข้ารหัส 20 ความยาวเต็มรูปแบบหนักและ / หรือโซ่แสงอาจจะแสดงแล้วจากมือถือเข้ามาในการที่พวกเขาได้รับการแนะนำและแอนติ-CD134 แอนติบอดีแยก. โมเลกุลของกรดนิวคลีอิกอาจถูกใช้เพื่อรีคอมบิแน นต์เหมือนแสดงขนาดใหญ่ปริมาณของแอนติ-CD134 แอนติบอดีตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง โมเลกุลของกรดนิวคลีอิกอาจจะถูกใช้ในการผลิตอื่น ๆ โมเลกุลยึดเกาะของการให้บริการโดยการเปิดเผย 25 เช่นไคเมริกแอนติบอดีแอนติบอดีโซ่เดียว immunoadhesins, diabodies, แอนติบอดีกลายพันธุ์ไบสเปซิฟิกแอนติบอดีและอนุพันธ์แอนติบอดี ตามที่อธิบายไว้ที่อื่นๆ ในที่นี้ ในหนึ่งรูปลักษณะโมเลกุลของกรดนิวคลีอิกคือใช้เป็นหัววัดหรือไพรเมอร์ PCR สำหรับลำดับแอนติบอดีที่เฉพาะเจาะจง ยกตัวอย่างเช่นโมเลกุลของกรดนิวคลีอิกสอบสวนอาจจะใช้ในวิธีการวินิจฉัยหรือโมเลกุลของกรดนิวคลีอิกไพรเมอร์ PCR 30 อาจถูกใช้เพื่อขยายภูมิภาคของดีเอ็นเอที่สามารถใช้อนึ่งการแยกลำดับกรดนิวคลีอิกสำหรับการใช้งานในการผลิตภูมิภาคตัวแปรแอนติ -CD134 แอนติบอดี. เมื่อโมเลกุลของดีเอ็นเอการเข้ารหัสส่วน VH และ VL ของแอนติ -CD134 แอนติบอดีจะได้รับเหล่านี้โมเลกุลดีเอ็นเอสามารถจัดการต่อไปโดยรีคอมบิแนนต์ดีเอ็นเอเทคนิคเช่นการแปลงยีนภูมิภาคตัวแปรแอนติบอดีเต็มความยาวยีนโซ่ยีนส่วน Fab เพื่อยีน scFv, หรือพวกเขา 5 สามารถรวมอยู่ในไบสเปซิฟิกแอนติบอดี. ด้านต่อไปของการประดิษฐ์ให้เวกเตอร์ซึ่งประกอบรวมด้วยโมเลกุลกรดนิวคลีอิกบรรยายในที่นี้ดังกล่าวข้างต้น โมเลกุลของกรดนิวคลีอิกเข้ารหัสอาจเป็นส่วนหนึ่งของห่วงโซ่แสงหรือห่วงโซ่หนัก (เช่น CDR หรือภูมิภาคตัวแปร) ซึ่งเป็นยาวเต็มรูปแบบแสงหรือห่วงโซ่หนักโพลีเปปไทด์ที่ประกอบรวมด้วยส่วนหรือเต็มรูปแบบความยาว 10 ของห่วงโซ่แสงหรือหนักหรือลำดับกรดอะมิโนของแอนติบอดีอนุพันธ์หรือส่วนแอนติเจนผูกพัน. ตัวอย่างของเวกเตอร์การแสดงออกที่เหมาะสมคือหนึ่งที่เข้ารหัสหน้าที่สมบูรณ์ฮิวเมน CH หรือ CL ลำดับอิมมูโนที่มีข้อ จำกัด ที่เหมาะสม เว็บไซต์ที่ออกแบบมาเพื่อให้การใด ๆ VH หรือลำดับ VL สามารถแทรกและแสดงความ เวกเตอร์แสดงออก 15 สามารถเข้ารหัสสัญญาณเปปไทด์ที่อำนวยความสะดวกการหลั่งของอะมิโนลำดับกรดของห่วงโซ่แอนติบอดีจากเซลล์โฮสต์ ดีเอ็นเอเข้ารหัสอะมิโนลำดับกรดของห่วงโซ่แอนติบอดีอาจจะลงไปในโคลนเวกเตอร์เช่นที่เปปไทด์คือการเชื่อมโยงสัญญาณในกรอบปลายทางอะมิโนของลำดับกรดอะมิโนของห่วงโซ่แอนติบอดี เปปไทด์สัญญาณอาจจะเป็นสัญญาณอิมมูโนเปปไทด์ 20 หรือเปปไทด์ heterologous สัญญาณ (เช่นเปปไทด์สัญญาณจากที่ไม่ใช่อิมมูโนโปรตีน) นอกจากนี้ยังมีลำดับนิวคลีอิกกรดอะมิโนเข้ารหัส

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตัวอย่างของตราสารอนุพันธ์อื่นแอนติบอดีโดยการประดิษฐ์นี้ 5 รวมถึงโซ่เดี่ยว diabodies โดเมนแอนติบอดี แอนติบอดี nanobodies และ
unibodies . ในบางรูปลักษณะ , โมโนโคลนอลแอนติบอดีอาจจะไคเมริก
ฮิวเมไนซ์แอนติบอดี แอนติบอดีฮิวเมน deimmunizedtm แอนติบอดี แอนติบอดี
ไบสเปซิฟิกแอนติบอดีเดี่ยวโซ่ไม่มีเศษที่รวมถึง FAB F ( ab ) 2
2 หรืออื่น ๆซึ่งเก็บเศษแอนติเจนผูกพันหน้าที่ของผู้ปกครอง
10 แอนติบอดี แอนติบอดีโซ่เดี่ยว ( " scfv " ) และวิธีการของการก่อสร้างของพวกเขาจะอธิบายในสหรัฐอเมริกาสิทธิบัตรเลขที่ 4946778
.
" แอนติบอดีโซ่เดี่ยว " ( scfv ) ประกอบด้วยเดียวโพลีเปปไทด์โซ่
ซึ่งประกอบรวมด้วยเป็น VL โดเมนเชื่อมโยงไปยังโดเมนโดเมนและ VH VH โดยที่ VL
โดเมนจะจับคู่ในรูปแบบโมเลกุลกัด . แอนติบอดีโซ่เดี่ยวสามารถ
15 เตรียมตามวิธีที่รู้จักกันในศิลปะ ( ดูตัวอย่างเช่นนก et al . ( 1988 )
วิทยาศาสตร์และ 242:423-426 Huston et al . ( 1988 ) proc . NATL . ราช . สภาวะโลกร้อน สหรัฐอเมริกา 85:5879 -
5883 ) " diabody " ประกอบด้วยสองโซ่แต่ละซึ่งประกอบรวมด้วยหนักโซ่โซ่
ตัวแปรเขตเชื่อมต่อกับบริเวณแปรผันสายเบาบนเดียวกันโพลีเปปไทด์
โซ่เชื่อมต่อกันด้วยโปรแกรมเชื่อมโยงเปปไทด์สั้น โดยที่สองภูมิภาคในโซ่เดียวกัน
20 ไม่คู่กับแต่ละอื่น ๆแต่กับโดเมนอื่น ๆประกอบกับโซ่
แบบฟอร์มไบสเปซิฟิกโมเลกุลวิธีการเตรียม diabodies เป็นที่รู้จักใน
ศิลปะ ( ดู เช่น holliger P . et al . ( 1993 ) proc . NATL . ราช . สภาวะโลกร้อน 906444-6448 สหรัฐอเมริกา และ R . J .
poljak et al . ( 1994 ) โครงสร้าง 2:1121-1123 ) โดเมนแอนติบอดี ( ป้าย )
เล็กหน้าที่ผูกหน่วยของแอนติบอดีที่สอดคล้องกับตัวแปรภูมิภาค 25 ของทั้งหนักค็อคโซ่ไฟของแอนติบอดี โดเมนดี
แอนติบอดีแสดงออกในแบคทีเรีย ยีสต์ และระบบเซลล์ ) . รายละเอียดเพิ่มเติมของ
โดเมนแอนติบอดีและวิธีการของมันการผลิตเป็นที่รู้จักกันในศิลปะ ( เห็น ,
ตัวอย่าง สหรัฐอเมริกาสิทธิบัตรเลขที่ 6291158 ; 6582915 ; 6593081 ; w004 / 003019 และ
w003 / 002609 ) nanobodies จะมาจากโซ่หนักของแอนติบอดี30 nanobody มักจะประกอบรวมด้วยโดเมนตัวแปรเดียวและสองคงที่โดเมน
( C กับ CH3 ) และยังคงมีแอนติเจนแอนติบอดีผูกความจุเดิม
nanobodies สามารถเตรียมได้โดยวิธีการที่รู้จักกันในศิลปะ ( ดูเช่นสิทธิบัตรสหรัฐหมายเลข
6765087 สหรัฐอเมริกาสิทธิบัตรเลขที่ 6838254 wo 06 / 079372 ) unibodies ประกอบด้วยหนึ่ง


เบาและหนักของโซ่หนึ่งโซ่เล็กน้อยแอนติบอดีunibodies อาจทำโดย
เอาบานพับเล็กน้อย เขตของแอนติบอดี รายละเอียดเพิ่มเติมของ unibodies และวิธีการเตรียมพวกเขาอาจพบได้ใน w02007 / 059782 .
นอกจากการกึ่งหนึ่งผูก โมเลกุลของการประดิษฐ์อาจ
5 เพิ่มเติมประกอบรวมด้วยเป็นกึ่งหนึ่งเพื่อเพิ่มฤทธิ์ในครึ่งชีวิตของโมเลกุล เช่น
เช่น แต่ไม่ จำกัด การ polyethylene glycol ( PEG ) ฮิวเมนซีรั่มอัลบูมิน glycosylation
กลุ่มกรดไขมันและ dextran . มอยอิตี้ดังกล่าวต่อไปอาจ
conjugated ค็อครวมมิฉะนั้นกับผูกพันแน่นอนโดยใช้วิธีที่รู้จักกันดีในศิลปะ
10 ลักษณะเพิ่มเติมของการประดิษฐ์ให้โมเลกุลของกรดนิวคลีอิกการเข้ารหัส
มีลำดับกรดอะมิโนของ cd134 ผูกโมเลกุลยึดเกาะตามลักษณะแรก
ของการประดิษฐ์ . มีลำดับกรดอะมิโนที่เข้ารหัสโดยโมเลกุลของกรดนิวคลีอิก
อาจเป็นส่วนหนึ่งส่วนใดของแอนติบอดีเหมือนเดิม เช่น CDR , ลำดับ
ซึ่งประกอบรวมด้วยค็อค CDRs หนึ่ง , สอง , สาม ,