NADPH-cytochrome P450 oxidoreductas

NADPH-cytochrome P450 oxidoreductase (CYPOR) variants have been described in patients with perturbed steroidogenesis and sexual differentiation, related to Antley-Bixler syndrome (ABS). It is important to determine the effect of these variants on CYP3A4, the major drug-metabolizing cytochrome P450 (P450) in humans. In this study, 12 CYPOR_ABS variants were separately coexpressed with CYP3A4 in a robust in vitro system to evaluate the effects of these variants on CYP3A4 activity in a milieu that recapitulates the stoichiometry of the mammalian systems. Full-length CYPOR variants were coexpressed with CYP3A4, resulting in relative expression levels comparable to those found in hepatic tissue. Dibenzylfluorescein (DBF), a CYP3A-specific reporter substrate (Biopharm Drug Dispos 24:375-384, 2003), was used to compare the variants and wild-type (WT) CYPOR activities with that of human liver microsomes. CYP3A4, combined with WT CYPOR, demonstrated kinetic parameters (k(cat) and K(m)) equal to those for pooled human liver microsomes. CYPOR variants Y181D, Y459H, V492E, L565P, and R616X all demonstrated maximal loss of CYP3A4 catalytic efficiency, whereas R457H and G539R retained ∼10 and 30% activities, respectively. Conversely, variants P228L, M263V, A287P, and G413S each showed WT-like capacity (k(cat)/K(m)), with the A287P variant being formerly reported to exhibit substantially lower catalytic efficiency. In addition, Q153R exhibited 60% of WT CYPOR capacity to support the DBF O-debenzylation reaction, contradicting increased catalytic efficiency (k(cat)/K(m)) relative to that for the WT, reported previously. Our data indicate the importance of use of simulated, validated in vitro systems, employing full-length proteins with appropriate stoichiometric incorporation of protein partners, when pharmacogenetic predictions are to be made for P450-mediated biotransformation.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

NADPH cytochrome P450 oxidoreductase (CYPOR) ย่อยได้ถูกอธิบายในผู้ป่วยที่มี perturbed steroidogenesis และทางเพศสร้างความแตกต่าง ที่เกี่ยวข้องกับกลุ่มอาการ Antley-Bixler (ABS) ต้องดูผลของตัวแปรเหล่านี้บน CYP3A4 สำคัญยา metabolizing cytochrome P450 (P450) ในมนุษย์ได้ ในการศึกษานี้ ตัวแปร CYPOR_ABS 12 ได้แยก coexpressed CYP3A4 ในระบบแข็งแกร่งในการประเมินผลกระทบของตัวแปรเหล่านี้กิจกรรม CYP3A4 ในฤทธิ์ที่สรุป stoichiometry ระบบ mammalian ตัวแปร CYPOR จัดได้ coexpressed กับ CYP3A4 ในนิพจน์ญาติระดับเทียบเท่ากับที่พบในเนื้อเยื่อตับ Dibenzylfluorescein (DBF), พื้นผิวการโปรแกรมรายงานเฉพาะ CYP3A (Biopharm Dispos ยา 24:375-384, 2003), ใช้ในการเปรียบเทียบตัวแปรและชนิดป่า CYPOR (WT) กิจกรรมที่ microsomes มนุษย์ตับ CYP3A4 รวมกับ WT CYPOR แสดงพารามิเตอร์เดิม ๆ (k(cat) และ K(m)) เท่ากับสำหรับ microsomes ตับมนุษย์รวมกัน ตัวแปร CYPOR Y181D, Y459H, V492E, L565P และ R616X ทั้งหมดแสดงให้เห็นว่าขาดทุนสูงสุดของ CYP3A4 ประสิทธิภาพตัวเร่งปฏิกิริยา ในขณะที่ R457H และ G539R เก็บ 30% กิจกรรม และ ∼10 ตามลำดับ ในทางกลับกัน P228L, M263V, A287P และ G413S แต่ละตัวแปรแสดง WT เหมือนกำลัง (k(cat)/K(m)) กับ A287P ที่เป็นตัวแปรเดิมรายงานแสดงประสิทธิภาพต่ำมากตัวเร่งปฏิกิริยา นอกจากนี้ Q153R จัดแสดง 60% ของกำลังการผลิต WT CYPOR สนับสนุนปฏิกิริยา DBF O debenzylation ขัดแย้งเพิ่มประสิทธิภาพตัวเร่งปฏิกิริยา (k(cat)/K(m)) ญาติที่สำหรับ WT รายงานก่อนหน้านี้ ข้อมูลบ่งชี้ความสำคัญของการใช้ของเลียนแบบ ตรวจในระบบ ใช้ปราศจากโปรตีนกับประสานสม stoichiometric โปรตีนคู่ เมื่อคาดคะเน pharmacogenetic รอ biotransformation P450 mediated

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

P450 NADPH-cytochrome oxidoreductase (CYPOR) สายพันธุ์ที่ได้รับการอธิบายในผู้ป่วยที่มี steroidogenesis ตกอกตกใจและความแตกต่างทางเพศที่เกี่ยวข้องกับโรค Antley-Bixler (ABS) มันเป็นสิ่งสำคัญที่จะกำหนดผลของสายพันธุ์เหล่านี้บน CYP3A4, P450 cytochrome ยาเสพติดที่สำคัญเมแทบอ (P450) ในมนุษย์ ในการศึกษานี้ 12 สายพันธุ์ CYPOR_ABS ถูก coexpressed แยกกับ CYP3A4 ในที่มีประสิทธิภาพในระบบการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อในการประเมินผลกระทบของสายพันธุ์เหล่านี้บนกิจกรรม CYP3A4 ในสภาพแวดล้อมที่ recapitulates ปริมาณสารสัมพันธ์ของระบบการเลี้ยงลูกด้วยนม เต็มความยาวสายพันธุ์ CYPOR ถูก coexpressed กับ CYP3A4 ส่งผลให้ระดับการแสดงออกญาติเทียบเคียงกับที่พบในเนื้อเยื่อตับ Dibenzylfluorescein (DBF) พื้นผิวนักข่าว CYP3A เฉพาะ (Biopharm ยา dispos 24: 375-384 2003) ถูกนำมาใช้เพื่อเปรียบเทียบพันธุ์และสัตว์ป่าชนิด (น้ำหนัก) กิจกรรม CYPOR กับที่ของไมโครตับของมนุษย์ CYP3A4 รวมกับ WT CYPOR แสดงให้เห็นถึงการเคลื่อนไหวค่าพารามิเตอร์ (k (แมว) และ K (m)) เท่ากับเหล่านั้นสำหรับไมโครตับมนุษย์ pooled CYPOR พันธุ์ Y181D, Y459H, V492E, L565P และ R616X ทั้งหมดแสดงให้เห็นถึงการสูญเสียสูงสุดของ CYP3A4 ตัวเร่งปฏิกิริยาที่มีประสิทธิภาพในขณะที่ R457H และ G539R สะสม ~ 10 และกิจกรรม 30% ตามลำดับ ตรงกันข้ามสายพันธุ์ P228L, M263V, A287P และ G413S แต่ละแสดงให้เห็นความสามารถในการ WT-เช่น (k (แมว) / K (m)) กับตัวแปร A287P การรายงานก่อนที่จะแสดงตัวเร่งปฏิกิริยาที่มีประสิทธิภาพที่ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ นอกจากนี้ยังมีการจัดแสดง Q153R 60% ของกำลังการผลิต WT CYPOR เพื่อสนับสนุน DBF O-debenzylation ปฏิกิริยาขัดแย้งกับตัวเร่งปฏิกิริยาที่มีประสิทธิภาพเพิ่มขึ้น (k (แมว) / K (m)) เทียบกับที่ WT, รายงานก่อนหน้านี้ ข้อมูลของเราแสดงให้เห็นถึงความสำคัญของการใช้งานของจำลองการตรวจสอบในระบบการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อจ้างโปรตีนยาวเต็มรูปแบบที่มีการรวมตัวกันทางทฤษฎีที่เหมาะสมของพันธมิตรโปรตีนเมื่อ pharmacogenetic การคาดการณ์จะได้รับการสร้างขึ้นมาเพื่อเปลี่ยนรูปทางชีวภาพ P450 พึ่ง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ไซโตโครมพี nadph อ ซิโดรีดักเทส ( cypor ) สายพันธุ์ที่ได้รับการอธิบายใน steroidogenesis ผู้ป่วยกระสับกระส่ายและความแตกต่างทางเพศที่เกี่ยวข้องกับ antley bixler ซินโดรม ( ABS ) มันเป็นสิ่งสำคัญที่จะศึกษาผลของตัวแปรเหล่านี้ในการสร้างหลักเผาผลาญ , ยาไซโตโครมพี ( พี ) ในมนุษย์ ในการศึกษานี้12 cypor_abs สายพันธุ์ได้ถูกแยก coexpressed กับสร้างในที่แข็งแกร่งในระบบหลอดทดลองเพื่อศึกษาผลของตัวแปรเหล่านี้ในการสร้างกิจกรรมในสภาพแวดล้อมที่ recapitulates และปริมาณสัมพันธ์ของระบบการควบคุม . ตัวแปรความยาวเต็ม cypor เป็น coexpressed ด้วย ( ผลในระดับการแสดงออกญาติใกล้เคียงกับที่พบในตับเนื้อเยื่อ dibenzylfluorescein ( DBF )เป็น cyp3a เฉพาะนักข่าวสาร ( งานยาเสพติด dispos 24:375-384 , 2003 ) , ถูกใช้เพื่อเปรียบเทียบสายพันธุ์ของ ( WT ) และกิจกรรม cypor กับของไมโครโซมตับมนุษย์ ( ไม่รวมกับ WT cypor แสดงให้เห็นถึงค่าพารามิเตอร์จลน์ ( K ( แมว ) และ K ( m ) เท่ากับผู้รวมไมโครโซมตับมนุษย์ cypor สายพันธุ์ y181d y459h v492e l565p , , , ,r616x ทั้งหมดแสดงให้เห็นสูงสุดและขาดประสิทธิภาพการสร้างและสะสม ส่วน r457h g539r ∼ 10 กิจกรรมและ 30% ตามลำดับ ในทางกลับกัน p228l m263v a287p , ตัวแปร , และ g413s แต่ละพบ WT ชอบความจุ ( K ( แมว ) / K ( , m ) ) กับ a287p ตัวแปรการเดิมรายงานแสดงอย่างมากลดไอเสียประสิทธิภาพ นอกจากนี้q153r มี 60% ของน้ำหนัก cypor ความจุเพื่อสนับสนุน DBF o-debenzylation ปฏิกิริยา , ขัดแย้งกับการเพิ่มประสิทธิภาพ ( K ( แมว ) / K ( m ) ) สัมพันธ์กับสำหรับโดยน้ำหนัก รายงานก่อนหน้านี้ ข้อมูลบ่งชี้ถึงความสำคัญของการใช้ระบบการจําลอง , ตรวจสอบใน การใช้โปรตีนแบบเต็มตัวกับบริษัทคู่ค้าที่เหมาะสมอัตราส่วนโปรตีนเมื่อการคาดการณ์เภสัชพันธุศาสตร์จะทำให้พีก่อน
( .