Sampling was scheduled initially, a

Sampling was scheduled initially, at 10, 20 and 30
days after probiotic feeding and at 45 days, i. e., 15
days after withdrawing the probiotic diet. At each time
point, the sampling was extended for 3 days and, from
one of the triplicate tanks of each treatment, three fish
were taken randomly each day and, consecutively, all
three groups were sampled. Thus, a total of nine fish
were collected per treatment at the end of each
sampling term. Blood was drawn from the caudal
vein of individual fish after anaesthetization as
described earlier. Plasma samples were collected after
spinning down the heparinised blood at 1500g for 5
min at 4 8C. The whole blood collected with the nonheparinised
syringes was allowed to clot for an hour
in microtubes at room temperature followed by 5 h at
4 8C and later centrifuged at 1500g for 5 min at 4 8C
for the serum samples. Both the samples were
preserved at
80 8C prior to analysis. The plasma
samples were used for total immunoglobulin analysis
and the serum samples for determining lysozyme and
alternative complement activity.
To collect leucocytes from head kidney, the organ
was aseptically removed from the fish after partial
decapitation to expose the trunk kidney area. The
leucocytes were separated and enriched according to
the techniques of Chung and Secombes (1988). The
macrophage-rich cell suspension was adjusted to
2106 and 2107 cell ml
1 in L-15 medium
(Leibovitz; Sigma-Aldrich, Japan)–penicillin–streptomycin
solution (P/S; Sigma) for assaying phagocytosis
and superoxide production, respectively.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สุ่มตัวอย่างกำหนดเวลาเริ่มต้น ที่ 10, 20 และ 30วันหลัง จากให้อาหารโปรไบโอติกส์ และ 45 วัน i. e., 15วันหลังจากถอนโปรไบโอติกส์ในอาหาร แต่ละครั้งจุด สุ่มตัวอย่างที่ถูกขยาย สำหรับ 3 วัน และ จากหนึ่งถัง triplicate ของแต่ละทรีทเม้นต์ ปลา 3ได้ดำเนินการสุ่มแต่ละวันและ ติดต่อกัน ทั้งหมดกลุ่มที่ 3 มีความ ดังนั้น จำนวนปลาเก้าได้รวบรวมต่อการรักษาในตอนท้ายของแต่ละคำว่าสุ่ม เลือดออกจาก caudalหลอดเลือดดำของปลาแต่ละตัวหลังจาก anaesthetization เป็นอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ตัวอย่างพลาสมาถูกเก็บรวบรวมหลังจากปั่นลงเลือด heparinised ที่ g 1500 สำหรับ 5นาทีที่ 4 8C. เลือดทั้งหมดรวบรวมไว้ ด้วยที่ nonheparinisedเข็มฉีดยาได้รับอนุญาตให้ clot ชั่วโมงใน microtubes ที่ตาม ด้วย 5 h ที่อุณหภูมิห้อง4 8C และหลัง centrifuged ที่ g 1500 สำหรับ 5 นาทีที่ 4 8Cตัวอย่างซีรั่ม ทั้งสองตัวอย่างดีรักษาที่ 8C 80 ก่อนวิเคราะห์ ในพลาสมาใช้ตัวอย่างสำหรับการวิเคราะห์รวม immunoglobulinและตัวอย่างซีรั่มสำหรับกำหนด lysozyme และกิจกรรมเสริมอื่นการรวบรวมศึกษาลักษณะชนิดจากหัวไต อวัยวะถูกเอา aseptically จากปลาหลังบางส่วนdecapitation เปิดเผยบริเวณไตลำ ที่ศึกษาลักษณะชนิดถูกแยก และอุดมไปตามเทคนิคของ Chung และ Secombes (1988) ที่ระงับเซลล์ macrophage ริชถูกปรับปรุง2 106 และ 2 107 เซลล์ ml 1 ใน L 15(นนีเลโบวิตช์ Sigma-Aldrich ญี่ปุ่น) –ยาเพนนิซิลลิน – streptomycinโซลูชัน (P/S ซิกมา) สำหรับ assaying phagocytosisและซูเปอร์ออกไซด์ ผลิต ตามลำดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การเก็บตัวอย่างถูกกำหนดไว้ในขั้นต้นที่ 10, 20 และ 30
วันหลังจากการให้อาหารโปรไบโอติกและใน 45 วันคือ 15
วันหลังจากที่ถอนอาหารโปรไบโอติก ในแต่ละครั้งที่จุดเก็บตัวอย่างได้รับการขยายระยะเวลา 3 วันจากหนึ่งในรถถังเพิ่มขึ้นสามเท่าของการรักษาแต่ละสามปลาที่ถูกนำมาสุ่มในแต่ละวันและต่อเนื่องกันทั้งหมดสามกลุ่มตัวอย่าง ดังนั้นทั้งหมดเก้าปลาถูกเก็บรักษาต่อในตอนท้ายของแต่ละระยะการสุ่มตัวอย่าง เลือดถูกดึงออกมาจากหางหลอดเลือดดำของปลาแต่ละหลังการให้ยาชาเป็นอธิบายไว้ก่อนหน้า ตัวอย่างพลาสมาถูกเก็บหลังจากที่ปั่นลงในเลือดมีสาร heparinised ที่ 1500? กรัมเป็นเวลา 5 นาทีที่ 4 8C เลือดทั้งเก็บรวบรวมกับ nonheparinised เข็มฉีดยาได้รับอนุญาตให้ก้อนชั่วโมงใน Microtubes ที่อุณหภูมิห้องตามด้วย 5 ชั่วโมงที่ 4 8C และปั่นต่อมาที่ 1500? กรัมเป็นเวลา 5 นาทีที่ 4 8C สำหรับตัวอย่างซีรั่ม ทั้งสองตัวอย่างได้ที่เก็บรักษาไว้? 8C 80 ก่อนที่จะมีการวิเคราะห์ พลาสม่าตัวอย่างถูกนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์อิมมูโนรวมและตัวอย่างซีรั่มสำหรับการกำหนดไลโซไซม์และกิจกรรมเสริมทางเลือก. รวบรวมเม็ดเลือดขาวจากไตหัวอวัยวะถูกลบออกจากปลาปลอดเชื้อหลังจากที่บางส่วนศีรษะที่จะเปิดเผยลำต้นบริเวณไต เม็ดเลือดขาวถูกแยกออกและอุดมไปตามเทคนิคของจุงและ Secombes นี้ (1988) เซลล์แขวนลอย macrophage ที่อุดมไปด้วยได้รับการปรับให้2 106 2 107 มล. 1 เซลล์ในสื่อ L-15? (Leibovitz; Sigma-Aldrich ญี่ปุ่น) -penicillin-streptomycin การแก้ปัญหา (P / S; Sigma) สำหรับ assaying เซลล์ทำลายและการผลิต superoxide ตามลำดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตัวอย่างมีกำหนดเริ่มต้นที่ 10 , 20 และ 30 วัน หลังการให้อาหารโปรไบโอติก
และที่ 45 วัน คือ 15
วันหลังถอนอาหารโปรไบโอติก ในแต่ละจุดเวลา
ภูมิ ระยะเวลา 3 วัน จาก
หนึ่งของรถถังทำสำเนาสามฉบับของการรักษาแต่ละ สามปลา
ถ่ายแบบสุ่มในแต่ละวันและ , ติดต่อกัน ,
3 กลุ่ม จำนวน . ดังนั้น ทั้งหมด 9 ปลา
การเก็บรักษาต่อที่ส่วนท้ายของแต่ละ
คําคน เลือดจากหลอดเลือดดำ หางของปลาแต่ละตัว หลังจาก anaesthetization เป็น

อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ตัวอย่างพลาสมาที่รวบรวมหลังจาก
ปั่นลง heparinised เลือด 1500  g
5 นาทีที่ 4 8C เลือดทั้งหมด เก็บข้อมูลด้วย nonheparinised
เข็มฉีดยาให้แข็งตัวเป็นชั่วโมง
ใน microtubes อุณหภูมิห้องตามด้วย 5
4 H ที่ 8C และต่อมาที่ระดับ 1500  G สำหรับ 5 นาทีที่ 4 8C
สำหรับเซรั่ม ตัวอย่าง ทั้งจำนวน
เก็บไว้ที่
80 8C ก่อนการวิเคราะห์ พลาสมา

กลุ่มตัวอย่างที่ใช้สำหรับการวิเคราะห์และอิมมูโนโกลบูลินรวมเซรั่มตัวอย่างเพื่อกำหนดกิจกรรมไลโซไซม์และ

กว่าทางเลือก เพื่อรวบรวม leucocytes จากหัวไต อวัยวะ
คือ aseptically ออกจากปลาหลังจากที่บางส่วน
ตัดหัวประจานรถไตบริเวณ
leucocytes ถูกแยกออกจากกันและอุดมสมบูรณ์ ตามเทคนิคของ ชอง และ secombes
( 1988 )
แมโครเฟจเซลล์แขวนลอยปรับรวย

2  106 และ 107 ml 2  เซลล์
1
( กลาง l-15 เลโบวิตช์ ; ซิกม่า Aldrich ญี่ปุ่น ) –ยา streptomycin
–สารละลาย ( P / S ;ซิกม่า ) เพื่อ assaying phagocytosis
และการผลิตซุปเปอร์ตามลำดับ