2.7. Evaluation of COX-2 and iNOS m

2.7. Evaluation of COX-2 and iNOS mRNA levels
The cells were cultured, with or without the peel extract (1 mg/
ml) and/or LPS (1 lg/ml), for 6 h. Adherent cells were then collected
and the total RNA was isolated using Trizol reagent (Invitrogen,
Carlsbad, CA, USA). The level of mRNAs was determined by
semi-quantitative reverse transcription polymerase chain reaction
(RT-PCR). Briefly, the mRNA was transcribed to cDNA and amplified
with PCR using a commercially available kit (Promega,
Madison, WI, USA). The sequences of the PCR primers were as
follows: 50-GTCTGATGATGTATGCCACCATCTG-30 (forward) and 50-
GCATCTGGACGAGGTTTTTC-30 (backward) for mouse COX-2, 50-
CAGTTCTGCGCCTTTGCTCAT-30 (forward) and 50-GGTGGTGCGGC
TGGACTTT-30 (backward) for mouse iNOS, and 50-AGGCCCA
GAGCAAGAGAG-30 (forward) and 50-GGGTGTTGAAGGTCTCAAAC-
30 (backward) for mouse b-actin. Finally, aliquots (20 ll) of each
PCR sample were analyzed by electrophoresis in 2% agarose gel
in the presence of 5 ng/ml Gybr gold (Invitrogen, Carlsbad, CA,
USA) and visualized under ultraviolet light. The band intensities
of COX-2 and iNOS PCR products were quantified using a software-
supported photo-imager and were normalized with b-actin.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.7 การประเมินค็อกซ์-2 และ iNOS ระดับ mRNAเซลล์มีอ่าง มี หรือไม่ มีสารสกัดเปลือก (1 มิลลิกรัม /มล.) หรือ LPS (1 lg/มล), สำหรับ 6 h. Adherent เซลล์ได้แล้วรวบรวมและอาร์เอ็นเอรวมแยกใช้ Trizol รีเอเจนต์ (Invitrogenคาร์ลส CA สหรัฐอเมริกา) ระดับของ mRNAs ถูกกำหนดโดยปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส transcription กลับกึ่งเชิงปริมาณ(RT-PCR) สั้น ๆ mRNA ถูกทับศัพท์กับ cDNA และขยายมี PCR ที่ใช้ชุดใช้ได้ในเชิงพาณิชย์ (Promegaเมดิสัน WI สหรัฐอเมริกา) ลำดับของไพรเมอร์ PCR ได้เป็นดังต่อไปนี้: 50-GTCTGATGATGTATGCCACCATCTG-30 (ข้างหน้า) และ 50 -GCATCTGGACGAGGTTTTTC-30 (ย้อนหลัง) สำหรับเมาส์ค็อกซ์-2, 50-CAGTTCTGCGCCTTTGCTCAT-30 (ข้างหน้า) และ 50-GGTGGTGCGGCTGGACTTT-30 (ย้อนหลัง) iNOS เมาส์ และ 50-AGGCCCAGAGCAAGAGAG-30 (ข้างหน้า) และ 50-GGGTGTTGAAGGTCTCAAAC -30 (ย้อนหลัง) สำหรับแอกตินกับเมาส์ b สุดท้าย aliquots (20 ll) ของแต่ละตัวอย่างของ PCR ถูกวิเคราะห์ โดย electrophoresis ในเจ 2% agaroseในต่อหน้าของ 5 ng/ml Gybr ทอง (Invitrogen คาร์ลส CAสหรัฐอเมริกา) และ visualized ภายใต้รังสีอัลตราไวโอเลต ปลดปล่อยก๊าซวงค็อกซ์-2 และ iNOS PCR ผลิตภัณฑ์ถูก quantified โดยใช้ซอฟต์แวร์แบบสนับสนุนภาพถ่ายถ่ายภาพ และได้ตามปกติ ด้วยแอกตินบี

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.7 การประเมินผลของ COX-2 และระดับ iNOS mRNA
เซลล์เพาะเลี้ยงที่มีหรือไม่มีสารสกัดจากเปลือก (1 mg /
ml) และ / หรือ LPS (1 LG / ml) เป็นเวลา 6 ชั่วโมง เซลล์สานุศิษย์ที่ถูกเก็บรวบรวมแล้วและอาร์เอ็นเอรวมที่แยกได้โดยใช้น้ำยา Trizol (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) ระดับของ mRNAs ถูกกำหนดโดยถอดความกลับกึ่งเชิงปริมาณโพลิเมอร์ปฏิกิริยาลูกโซ่(RT-PCR) สั้น ๆ , mRNA ที่ถูกคัดลอกไปและขยายยีนด้วยเทคนิคPCR โดยใช้ชุดใช้ได้ในเชิงพาณิชย์ (Promega, Madison, WI, สหรัฐอเมริกา) ลำดับของไพรเมอร์ PCR พบว่าต่อไปนี้: 50 GTCTGATGATGTATGCCACCATCTG-30 (ข้างหน้า) และ 50 GCATCTGGACGAGGTTTTTC-30 (ย้อนหลัง) สำหรับเมาส์ COX-2, 50 CAGTTCTGCGCCTTTGCTCAT-30 (ข้างหน้า) และ 50-GGTGGTGCGGC TGGACTTT-30 (ย้อนหลัง ) สำหรับเมาส์ iNOS และ 50 AGGCCCA GAGCAAGAGAG-30 (ข้างหน้า) และ 50-GGGTGTTGAAGGTCTCAAAC- 30 (ย้อนหลัง) สำหรับเมาส์ขโปรตีน สุดท้าย aliquots (20 LL) ของแต่ละตัวอย่างPCR วิเคราะห์ electrophoresis ในเจล agarose 2% ในการปรากฏตัวของ 5 ng / ml Gybr ทอง (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) และมองเห็นภายใต้แสงอัลตราไวโอเลต ความเข้มวงของ COX-2 และผลิตภัณฑ์ iNOS PCR ถูกวัดโดยใช้ซอฟต์แวร์สนับสนุนอิมเมจภาพและปกติด้วยb-โปรตีน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.7 . การประเมิน cox-2 inos mRNA และระดับ
เซลล์เพาะเลี้ยงที่มีหรือไม่มี สารสกัดจากเปลือก ( 1 มิลลิกรัม /
มิลลิลิตร ) และ / หรือสเปรย์หล่อลื่น ( 1 ) / ml ) 6 . ติดเซลล์แล้วเก็บ
และอาร์เอ็นเอทั้งหมดได้ใช้ trizol Reagent ( Invitrogen
Carlsbad , CA , USA , ) ระดับของรหัสถูกกำหนดโดยกึ่งปริมาณ

ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรสแบบย้อนกลับ ( RT-PCR ) สั้น ๆของถูกและและวิธี PCR โดยใช้ไพร
กับชุดพร้อมใช้งานในเชิงพาณิชย์ ( promega
, Madison , WI , USA ) ลำดับของ PCR ไพรเมอร์เป็น
ดังนี้ : 50-gtctgatgatgtatgccaccatctg-30 ( ไปข้างหน้า ) และ 50 -
gcatctggacgaggtttttc-30 ( ย้อนหลัง ) สำหรับเมาส์ cox-2 50 -
cagttctgcgcctttgctcat-30 ( ไปข้างหน้า ) และ 50-ggtggtgcggc
tggacttt-30 ( ย้อนหลัง ) สำหรับ inos เมาส์ และ 50-aggccca
gagcaagagag-30 ( ไปข้างหน้า ) และ 50-gggtgttgaaggtctcaaac -
30 ( ย้อนหลัง ) สำหรับ b-actin เมาส์ ในที่สุด ก็เฉยๆ ( 20 จะ ) ของแต่ละ
PCR ตัวอย่างวิเคราะห์โดยวิธีใน 2% เจล
ต่อหน้า 5 ng / ml gybr ทอง ( Invitrogen Carlsbad , CA , USA ,
) และภาพภายใต้แสงอัลตราไวโอเลต วงดนตรีเข้ม
ของ cox-2 inos PCR และผลิตภัณฑ์มีปริมาณการใช้ซอฟต์แวร์ -
สนับสนุนภาพถ่ายรูปภาพและรูปด้วย b-actin .