After 1 h of co-culture with larvae

After 1 h of co-culture with larvae at 37uC, the monolayers were
washed twice with DMEM-10% FBS. The cells were covered with
PI (0.03 mg/ml in DMEM-50% FBS) and incubated at 37uC for
2 min, and then at 4uC for 30 min. After being washed twice with
DMEM-10% FBS, the cells were fixed in 4% paraformaldehyde
for 30 min, washed in PBS, and permeabilized and blocked in
blocking solution (PBS containing 0.1% Triton X-100 and 5%
normal goat serum) at RT for 20 min. The monolayers were
incubated with rabbit immune sera against T. spiralis excretory-
secretory (ES) antigens (1:100) at 37uC for 1 h, washed three times
in PBS, and followed by 40-min incubation with FITC-conjugated
specific secondary antibody (Sigma) at RT in the dark.
Subsequently, the coverslips were mounted on glass slides and
examined under a fluorescence microscope (Olmpus).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

หลังจาก 1 ชั่วโมงร่วมกับวัฒนธรรมตัวอ่อนที่ 37uC, monolayers ถูก
ล้างครั้งที่สองกับ DMEM-10% FBS เซลล์ถูกปกคลุมไปด้วย
PI (0.03 mg / ml ใน DMEM-50% FBS) และบ่มที่ 37uC สำหรับ
2 นาทีและจากนั้นที่ 4uC เวลา 30 นาที หลังจากได้รับการล้างครั้งที่สองกับ
DMEM-10% FBS เซลล์ได้รับการแก้ไขใน 4% paraformaldehyde
นาน 30 นาทีล้างในพีบีเอสและ permeabilized และบล็อกใน
การแก้ปัญหาการปิดกั้น (พีบีเอสที่มี 0.1% Triton X-100 และ 5%
ในซีรั่มแพะปกติ) ที่ RT 20 นาที monolayers ถูก
บ่มกับกระต่ายซีรั่มภูมิคุ้มกัน T. spiralis excretory-
หลั่ง (ES) แอนติเจน (1: 100) ที่ 37uC เป็นเวลา 1 ชั่วโมงล้างสามครั้ง
ในพีบีเอสและตามด้วย 40 นาทีบ่มกับ FITC-ผัน
แอนติบอดีที่เฉพาะเจาะจงรอง (Sigma) ที่ RT ในที่มืด.
ต่อจากนั้น coverslips ถูกติดตั้งอยู่บนสไลด์แก้วและ
ตรวจสอบภายใต้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง (Olmpus)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

หลังจาก 1 ชั่วโมงของวัฒนธรรม ร่วม กับ ตัวอ่อนที่ 37uc , monolayers ถูก
ล้างสองครั้งกับ dmem-10 % FBS เซลล์ที่ถูกปกคลุมด้วย
pi ( 0.03 mg / ml ใน dmem-50 % FBS ) บ่มที่ 37uc สำหรับ
2 นาที แล้ว 4uc เป็นเวลา 30 นาที หลังจากการล้างสองครั้งด้วย
dmem-10 % FBS , เซลล์ที่ถูกกำหนดใน 4% พาราฟอร์มาลดิไฮด์
30 นาทีล้างใน PBS และ permeabilized และถูกบล็อค ใน
บล็อก ( PBS ที่ประกอบด้วย 0.1% สารละลาย Triton X-100 และ 5 %
ซีรั่มปกติแพะ ) ที่ RT 20 นาที monolayers ถูกบ่มกับเซร่ากับภูมิคุ้มกัน
กระต่าย ต. spiralis ขับถ่าย -
secretory ( es ) และ ( 1 : 100 ) ที่ 37uc 1 H , ล้างสามครั้ง
ใน PBS และตามด้วย 40 ลิตรนาที กับ fitc conjugated
แอนติบอดีรองเฉพาะ ( Sigma ) RT ในที่มืด
ในภายหลังการ coverslips ติดบนกระจกสไลด์ และตรวจสอบภายใต้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง


( olmpus )