Cell viability analysisHep G2 cells

Cell viability analysis
Hep G2 cells were seeded in 96-well plates at a density of 2.0 × 105 cells/well. After incubation for 8 h, the medium was removed and replaced by 20 μL of different concentrations of ACE polysaccharides, ACE/ES, ACE/S and nanoparticles without loading, which were suspended in deionized water and ultrasonicated for 1 h to prevent agglomeration. Controls were cells treated with an equivalent volume of serum-free medium instead of suspensions. Cells were further incubated for 24 h or 48 h and viability was assessed by using an MTT (3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-di-phenyltetrazolium bromide) test [26]. In brief, fresh media with 100 μL of 5 mg/mL MTT stain (Sigma-Aldrich in vitro toxicology assay kit) was added into each well and incubated for 4 h. The media/stain was drawn out and purple color crystals were dissolved using acidic isopropyl alcohol. The absorbance in each well was measured at 570 nm using a 4294B Microplate Reader (Tecan Sunrise, American Instrument Exchange Inc. USA). All experiments were repeated 3 times independently to ensure reproducibility and data were acquired in triplicate (n = 3). Cell viability was calculated with the following formula:

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิเคราะห์ชีวิตของเซลล์เซลล์ G2 hep ถูก seeded ในดี 96 แผ่นที่ความหนาแน่น 2.0 × 105 เซลล์/ดี หลังจากฟักตัวใน 8 h สื่อถูกเอาออก และแทนที่ ด้วย μL 20 ของความเข้มข้นแตกต่างกันของ ACE polysaccharides เอ/เอส เอส/S และเก็บกักไม่โหลด ซึ่งถูกหยุดชั่วคราวในน้ำ deionized และ ultrasonicated สำหรับ h 1 เพื่อป้องกันการ agglomeration ควบคุมเซลล์รับตราฟรีเซรั่มกลางแทนบริการที่เทียบเท่าได้ เซลล์เพิ่มเติมได้ incubated 24 ชมหรือ 48 h และชีวิตถูกประเมินโดยการทดสอบ (3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-ดิ-phenyltetrazolium โบรไมด์) MTT [26] สังเขป สื่อสดกับ μL 100 ของคราบ MTT 5 mg/mL (ซิก-Aldrich ในชุดการทดสอบพิษวิทยาหลอด) ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละบ่อ และ incubated สำหรับ 4 h สื่อ/คราบออกหมด และผลึกสีม่วงมีส่วนยุบใช้แอลกอฮอล์ isopropyl เปรี้ยว Absorbance ในดีมีวัดที่ 570 nm โดยใช้เครื่องอ่าน Microplate 4294B (ซันไรส์ Tecan อเมริกันเครื่องมือแลกเปลี่ยน Inc. ประเทศสหรัฐอเมริกา) ทดลองทั้งหมดถูกทำซ้ำ 3 ครั้งอิสระให้ reproducibility และข้อมูลได้รับมาใน triplicate (n = 3) ชีวิตเซลล์มีคำนวณ ด้วยสูตรต่อไปนี้:

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

มีศักยภาพในการวิเคราะห์เซลล์
Hep เซลล์ G2 เมล็ดในแผ่น 96 หลุมที่มีความหนาแน่น 2.0 × 105 เซลล์ / ดี หลังจากการบ่มเป็นเวลา 8 ชั่วโมง, สื่อที่ถูกลบออกไปและแทนที่ด้วย 20 ไมโครลิตรความเข้มข้นแตกต่างกันของ polysaccharides เอซเอซ / ES, ACE / S และนาโนโดยไม่ต้องโหลดซึ่งถูกระงับในน้ำปราศจากไอออนและ ultrasonicated เป็นเวลา 1 ชั่วโมงเพื่อป้องกันการรวมตัวกัน การควบคุมที่ได้รับการรักษาด้วยเซลล์ปริมาณเทียบเท่าของกลางซีรั่มฟรีแทนสารแขวนลอย เซลล์ที่ถูกบ่มต่อไปเป็นเวลา 24 ชั่วโมงหรือ 48 ชั่วโมงและมีชีวิตได้รับการประเมินโดยใช้ MTT (3 (4, 5 dimethylthiazol-2-YL) -2, 5-di-phenyltetrazolium โบรไมด์) การทดสอบ [26] ในช่วงสั้น ๆ สื่อใหม่กับ 100 ไมโครลิตร 5 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร MTT คราบ (Sigma-Aldrich ในหลอดทดลองชุดทดสอบพิษวิทยา) ถูกบันทึกลงในแต่ละดีและบ่มเป็นเวลา 4 ชั่วโมง สื่อ / คราบถูกดึงออกมาและคริสตัลสีม่วงกำลังละลายโดยใช้เครื่องดื่มแอลกอฮอล์ isopropyl ที่เป็นกรด การดูดกลืนแสงในแต่ละวัดกันที่ 570 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านไมโคร 4294B (Tecan พระอาทิตย์อเมริกันแลกเปลี่ยนตราสารอิงค์สหรัฐอเมริกา) การทดลองทั้งหมดถูกทำซ้ำ 3 ครั้งเป็นอิสระเพื่อให้แน่ใจว่าการทำสำเนาและข้อมูลที่ได้รับมาในเพิ่มขึ้นสามเท่า (n = 3) ชีวิตของเซลล์ที่คำนวณตามสูตรดังต่อไปนี้:

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การวิเคราะห์
Hep G2 เซลล์เซลล์ถูก seeded ใน 96 ดีจานที่ความหนาแน่น 2.0 × 105 เซลล์ / ดี หลังจากบ่มเป็นเวลา 8 ชั่วโมง กลางจะถูกลบออกและแทนที่ด้วย 20 μ L ของระดับความเข้มข้นของโพลีแซคคาไรด์ เอซ , เอซ / ES , Ace / s และนาโนไม่ต้องโหลด ซึ่งแขวนลอยในน้ำคล้ายเนื้อเยื่อประสาน และ ultrasonicated เป็นเวลา 1 ชั่วโมง เพื่อป้องกันการ .ในการควบคุมเซลล์ที่ได้รับเทียบเท่ากับปริมาณ serum-free กลางแทนของสารแขวนลอย . เซลล์ได้ บ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่หรือ 48 H และความมีชีวิตที่ได้รับโดยการใช้ยา ( 3 - ( 4 , 5-dimethylthiazol-2-yl ) - 2 5-di-phenyltetrazolium โบรไมด์ ) ทดสอบ [ 26 ] ในช่วงสั้น ๆสื่อสด 100 μ L 5 mg / ml MTT คราบ ( ซิกม่า Aldrich การพิษวิทยา ( Kit ) ถูกเพิ่มลงในแต่ละ และบ่มเป็นเวลา 4 ชั่วโมง สื่อ / คราบถูกดึงออก และคริสตัลสีม่วงถูกละลายด้วยแอลกอฮอล์ isopropyl กรด นได้เป็นอย่างดีในแต่ละวัดที่ 570 nm ใช้พื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย ( อ่าน 4294b TECAN พระอาทิตย์ขึ้นอเมริกันเครื่องดนตรีตรา Inc . USA )ทั้งหมดทดลองซ้ำ 3 ครั้งอย่างอิสระเพื่อให้กระชับและข้อมูลที่ได้รับมาทั้งสามใบ ( n = 3 ) เซลล์ก็คำนวณด้วยสูตรต่อไปนี้ :