For amplification efficiency analys

For amplification efficiency analysis, qPCR was performed in a 25 m l reaction volume containing the following: 1X SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems), 0.4 m M forward primer, 0.4 m M reverse primer, and template from the dilution series with the previously indicated concentrations. Three technical replicates were included for each sample. qPCR was performed in an ABI Prism 7000 Sequence Detection System (Applied Biosystems) using the following parameters: 50C for 2 min, 95C for 10 min, and 40 amplification cycles of 95C for 15 s, and 60C for 1 min. Dissociation curve analysis was performed at the end of the amplification cycles to examine for the occurrence of primer dimerization.
Standard curve analysis resulting from plotting observed cycle threshold (CT ) values vs. Log (concentration) followed by linear regression analysis was then used in conjunction with the equation Efficiency ¼ 10 (?1/Slope) ? 1 [36] tocalculate amplification efficiency for each primer pair. Primers with amplification efficiency of >0.87 are used in this study [37]. A full list of primers used in this study, their corresponding amplification efficiencies, and the database accessions for each gene can be found in Table 1.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สำหรับการวิเคราะห์ประสิทธิภาพการขยาย qPCR ได้ดำเนินการในปริมาณปฏิกิริยา 25 มล. ที่มีต่อไปนี้: 1X SYBR สีเขียว PCR โทผสม (Applied Biosystems) 0.4 ม. เอ็มไพรเมอร์ไปข้างหน้า 0.4 ม. ไพรเมอร์ M ย้อนกลับและแม่แบบจากชุดการเจือจางกับก่อนหน้านี้ ระบุความเข้มข้น สามซ้ำทางเทคนิคได้รวมสำหรับแต่ละตัวอย่าง qPCR ได้ดำเนินการใน ABI ปริซึม 7000 ลำดับระบบตรวจจับ (Applied Biosystems) โดยใช้พารามิเตอร์ต่อไปนี้: 50C เป็นเวลา 2 นาที, 95 C เป็นเวลา 10 นาทีและ 40 รอบการขยายของ 95C เป็นเวลา 15 วินาทีและ 60C เป็นเวลา 1 นาที การวิเคราะห์โค้งแยกออกจากกันได้ดำเนินการในตอนท้ายของรอบการขยายการตรวจสอบสำหรับการเกิดขึ้นของไพรเมอร์ dimerization ได้.
การวิเคราะห์โค้งมาตรฐานที่เกิดจากการวางแผนเกณฑ์สังเกตวงจร (CT) ค่าเมื่อเทียบกับเข้าสู่ระบบ (เข้มข้น) ตามด้วยการวิเคราะห์การถดถอยเชิงเส้นจากนั้นก็ใช้ร่วม ที่มีประสิทธิภาพสม¼ 10 (1 / ลาด)? 1 [36] tocalculate ขยายประสิทธิภาพสำหรับแต่ละคู่ไพรเมอร์ ไพรเมอร์ที่มีประสิทธิภาพการขยายของ> 0.87 ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ [37] รายการเต็มรูปแบบของไพรเมอร์ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้มีประสิทธิภาพการขยายที่สอดคล้องกันของพวกเขาและสายฐานข้อมูลสำหรับยีนแต่ละสามารถพบได้ในตารางที่ 1

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การวิเคราะห์ประสิทธิภาพการขยาย qpcr แสดงใน 25 M L ปฏิกิริยาปริมาณที่มีดังต่อไปนี้ : 1 ) ผสมสีเขียว SYBR มหาบัณฑิต ( Applied Biosystems ) 0.4 M ส่งต่อรองพื้น , 0.4 M reverse primer และแม่แบบจากการชุดกับก่อนหน้านี้ระบุความเข้มข้น 3 ซ้ำเทคนิครวมสำหรับแต่ละตัวอย่างqpcr ในการปฏิบัติการช่วยเหลือปริซึม 7000 ลำดับระบบตรวจจับ ( Applied Biosystems ) โดยใช้พารามิเตอร์ต่อไปนี้ : 50c 2 มิน 95c 10 นาทีและ 40 ( รอบ 95c 15 s และ 60C 1 นาทีหัวใจโค้งการวิเคราะห์ในตอนท้ายของการขยายรอบการตรวจสอบ สำหรับการเกิดของไพรเมอร์ สหชาต .
มาตรฐานเส้นโค้งที่เกิดจากการวางแผนและการวิเคราะห์วงจรธรณีประตู ( CT ) ค่าและบันทึก ( สมาธิ ) ตามด้วยการวิเคราะห์การถดถอยเชิงเส้นเมื่อใช้ร่วมกับประสิทธิภาพสมการ¼ 10 ( ? 1 / ลาด ) 1 [ 36 ] คำนวณการเพิ่มประสิทธิภาพสำหรับแต่ละคู่คู่ ไพรเมอร์ที่มีประสิทธิภาพการสื่อสาร > 0.87 ใช้ในการศึกษา [ 37 ]รายการเต็มรูปแบบของวิธีที่ใช้ในการศึกษาประสิทธิภาพของการสื่อสารที่สอดคล้องกันของพวกเขาและฐานข้อมูลตัวอย่างแต่ละยีนสามารถพบได้ในตารางที่ 1