- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
During the experimental period (30
During the experimental period (30 days), food and water intake
of the animals were monitored daily (Table 1). DM, Se and
vitamin E quantities ingested by adult rats were calculated respectively
from water and food consumed.
The animals of the different groups were killed, at the end of
treatments, by cervical decapitation to avoid stress. The brain tissue
was immediately removed and dissected over ice-cold glass
slides and cerebral cortex region was collected and homogenized
(10% w/v) separately with an Ultra Turrax homogeniser in ice-cold,
1.15% KCl–0.01 M sodium, potassium phosphate buffer
(1 M:K2HPO4; 1 M:KH2PO4, pH 7.4). Homogenates were centrifuged
at 10,000g for 20 min at 4 C. The resulting supernatants
were used for immediate lipid peroxidation and protein oxidation
assays. Homogenate aliquots were stored at 80 C for further biochemical
assays. Other cerebral cortex tissue, extracted from the
control and treated rats was fixed in 10% buffered formalin and
was processed for paraffin sectioning for histological studies.
2.3. Biochemical estimations
2.3.1. Protein quantification
Cerebral cortex protein contents were measured according to
the method of Lowry et al. [29] using bovine serum albumin as
standard.
2.3.2. Malondialdehyde (MDA) measurement
The cerebral cortex malondialdehyde concentrations, index of
lipid peroxidation, were determined spectrophotometrically
according to Draper and Hadley [30]. Briefly, an aliquot of cerebral
cortex extract supernatant was mixed with 1 ml of 5% trichloroacetic
acid and centrifuged at 2500g for 10 min. An amount of 1 ml of
thiobarbituric acid reagent (0.67%) was added to 500 ll of supernatant
and heated at 90 C for 15 min. The mixture was then cooled
and measured for absorbance at 532 nm using a spectrophotometer
(Jenway UV-6305, Essex, England). The malondialdehyde values
were calculated using 1,1,3,3-tetraethoxypropane as standard and
expressed as nmoles of malondialdehyde/g of tissue.
2.3.3. Determination of cerebral cortex advanced oxidation protein
products levels
Advanced oxidation protein products (AOPP) levels were determined
according to the method of Kayali et al. [31]. Briefly, 0.4 ml
of cerebral cortex extract was treated with 0.8 ml phosphate buffer
(0.1 M; pH 7.4). After 2 min, 0.1 ml of 1.16 M potassium iodide (KI)
was added to the tube followed by 0.2 ml of acetic acid. The absorbance
of the reaction mixture was immediately recorded at
340 nm. The concentration of AOPP for each sample was calculated
using the extinction coefficient of 261 cm1 mM1 and the results
were expressed as lmol/mg protein.
2.3.4. Determination of cerebral cortex protein carbonyl content
Protein carbonyls (PCO) were measured using the method of
Reznick and Packer [32]. Briefly, 100 ll of cerebral cortex extract
supernatant were placed in glass tubes. Then 500 ll of 10 mM
2,4-dinitrophenylhydrazine (DNPH) in 2 N HCl were added. Tubes
were incubated for 1 h at room temperature. Samples were vortexed
every 15 min. Then 500 ll TCA (20%) were added and the
tubes were left on ice for 5 min followed by centrifugation for
10 min. The protein precipitates were collected. The pellet was
then washed twice with ethanol–ethyl acetate (v/v). The final precipitate
was dissolved in 600 ll of 6 M guanidine hydrochloride
solution and incubated for 15 min at 37 C. The absorbance of the
sample was measured at 370 nm. The carbonyl content was calculated
based on the molar extinction coefficient of DNPH
(e = 2.2 104 cm1 M1
) and expressed as lmol/mg protein.
2.3.5. Na+
K+
-ATPase assay
Activity of Na+
K+
-ATPase in the cerebral cortex was determined
using the method of Kawamoto et al. [33]. Total ATPase activity
was determined by Pi assay released from hydrolyzed ATP forming
a complex with molybdate. The reaction was initiated by adding
40 ll of homogenate (suspended in Tris–HCl buffer, pH 7.4) to
200 ll ATPase buffer containing (in mM): 3 ATP, 120 NaCl, 2 KCl,
3 MgCl2, and 30 histidine (pH 7.2), with and without ouabain
(3 mM). ATPase activity was measured after 60 min of incubation
at 37 C. Reaction was achieved by the addition of a quenching
solution (0.6 ml) containing 1 N H2SO4 and 0.5% ammonium
molybdate. The formation of a phosphomolybdate complex was
determined spectrophotometrically at 700 nm. A standard curve
was run using H2PO4. Na+
,K+
-ATPase activity was measured as
the difference between ouabain-treated and ouabain-untreated
samples. Enzyme activity was expressed as lmol Pi liberated/h/g
tissue.
2.3.6. Determination of cerebral cortex antioxidant enzyme activities
Catalase (CAT) activity was assayed by the method of Aebi [34].
Enzymatic reaction was initiated by adding an aliquot of 20 ll of
the homogenized tissue and the substrate (H2O2) to a concentration
of 0.5 M in a medium containing 100 mM phosphate buffer
(pH 7.4). Changes in absorbance were recorded at 240 nm. CAT
activity was calculated in terms of lmol H2O2 consumed/min/mg
of protein.
Superoxide dismutase (SOD) activity was estimated according to
Beauchamp and Fridovich [35]. The reaction mixture contained
50 mM of tissue homogenates in potassium phosphate buffer (pH
7.8), 0.1 mM EDTA, 13 mM L-methionine, 2 lM riboflavin and
75 mM nitro blue tetrazolium (NBT). The developed blue colour
in the reaction was measured at 560 nm. Units of SOD activity
were expressed as the amount of enzyme required to inhibit the
reduction of NBT by 50% and the activity was expressed as units/
mg of protein.
Glutathione peroxidase (GPx) activity was measured according to
Flohe and Gunzler [36]. GPx catalyzes the oxidation of reduced glutathione
by cumene hydroperoxide. In the presence of reduced glutathione
reductase and nicotinamide adenine dinucleotide
phosphate reduced form (NADPH), the oxidized reduced glutathione
is immediately converted to the reduced form with a concomitant
oxidation of NADPH–NADP+
. The decrease in absorbance at
340 nm was measured. The enzyme activity was expressed as
nmole of GSH oxidized/min/mg protein.
2.3.7. Cerebral cortex glutathione levels
Glutathione (GSH) in the cerebral cortex was determined by the
method of Ellman [37] modified by Jollow et al. [38]. The method is
based on the development of a yellow colour when DTNB (5,5-
dithiobtis-2 nitro benzoic acid) is added to compounds containing
sulfhydryl groups. Five hundred microlitres of tissue homogenate
in phosphate buffer were added to 3 ml of 4% sulfosalicylic acid.
The mixture was centrifuged at 1600g for 15 min. Five hundred
millilitres of supernatants were taken and added to Ellman’s reagent.
The absorbance was measured at 412 nm after 10 min. Total
GSH content was expressed as lg/g of tissue.
2.3.8. Hydrophilic antioxidants
Ascorbic acid (vitamin C) determination was performed as described
by Jacques-Silva et al. [39]. Protein in cerebral cortex
homogenate extract was precipitated in 10 volumes of a cold 4%
trichloroacetic acid solution. An aliquot of sample (300 lL) was adjusted
with H2O to a final volume of 1 mL and incubated at 38 C
for 3 h, then 1 mL of H2SO4 65% (v/v) was added to the medium.
The reaction product was determined using color reagent containI.
Ben Amar
of the animals were monitored daily (Table 1). DM, Se and
vitamin E quantities ingested by adult rats were calculated respectively
from water and food consumed.
The animals of the different groups were killed, at the end of
treatments, by cervical decapitation to avoid stress. The brain tissue
was immediately removed and dissected over ice-cold glass
slides and cerebral cortex region was collected and homogenized
(10% w/v) separately with an Ultra Turrax homogeniser in ice-cold,
1.15% KCl–0.01 M sodium, potassium phosphate buffer
(1 M:K2HPO4; 1 M:KH2PO4, pH 7.4). Homogenates were centrifuged
at 10,000g for 20 min at 4 C. The resulting supernatants
were used for immediate lipid peroxidation and protein oxidation
assays. Homogenate aliquots were stored at 80 C for further biochemical
assays. Other cerebral cortex tissue, extracted from the
control and treated rats was fixed in 10% buffered formalin and
was processed for paraffin sectioning for histological studies.
2.3. Biochemical estimations
2.3.1. Protein quantification
Cerebral cortex protein contents were measured according to
the method of Lowry et al. [29] using bovine serum albumin as
standard.
2.3.2. Malondialdehyde (MDA) measurement
The cerebral cortex malondialdehyde concentrations, index of
lipid peroxidation, were determined spectrophotometrically
according to Draper and Hadley [30]. Briefly, an aliquot of cerebral
cortex extract supernatant was mixed with 1 ml of 5% trichloroacetic
acid and centrifuged at 2500g for 10 min. An amount of 1 ml of
thiobarbituric acid reagent (0.67%) was added to 500 ll of supernatant
and heated at 90 C for 15 min. The mixture was then cooled
and measured for absorbance at 532 nm using a spectrophotometer
(Jenway UV-6305, Essex, England). The malondialdehyde values
were calculated using 1,1,3,3-tetraethoxypropane as standard and
expressed as nmoles of malondialdehyde/g of tissue.
2.3.3. Determination of cerebral cortex advanced oxidation protein
products levels
Advanced oxidation protein products (AOPP) levels were determined
according to the method of Kayali et al. [31]. Briefly, 0.4 ml
of cerebral cortex extract was treated with 0.8 ml phosphate buffer
(0.1 M; pH 7.4). After 2 min, 0.1 ml of 1.16 M potassium iodide (KI)
was added to the tube followed by 0.2 ml of acetic acid. The absorbance
of the reaction mixture was immediately recorded at
340 nm. The concentration of AOPP for each sample was calculated
using the extinction coefficient of 261 cm1 mM1 and the results
were expressed as lmol/mg protein.
2.3.4. Determination of cerebral cortex protein carbonyl content
Protein carbonyls (PCO) were measured using the method of
Reznick and Packer [32]. Briefly, 100 ll of cerebral cortex extract
supernatant were placed in glass tubes. Then 500 ll of 10 mM
2,4-dinitrophenylhydrazine (DNPH) in 2 N HCl were added. Tubes
were incubated for 1 h at room temperature. Samples were vortexed
every 15 min. Then 500 ll TCA (20%) were added and the
tubes were left on ice for 5 min followed by centrifugation for
10 min. The protein precipitates were collected. The pellet was
then washed twice with ethanol–ethyl acetate (v/v). The final precipitate
was dissolved in 600 ll of 6 M guanidine hydrochloride
solution and incubated for 15 min at 37 C. The absorbance of the
sample was measured at 370 nm. The carbonyl content was calculated
based on the molar extinction coefficient of DNPH
(e = 2.2 104 cm1 M1
) and expressed as lmol/mg protein.
2.3.5. Na+
K+
-ATPase assay
Activity of Na+
K+
-ATPase in the cerebral cortex was determined
using the method of Kawamoto et al. [33]. Total ATPase activity
was determined by Pi assay released from hydrolyzed ATP forming
a complex with molybdate. The reaction was initiated by adding
40 ll of homogenate (suspended in Tris–HCl buffer, pH 7.4) to
200 ll ATPase buffer containing (in mM): 3 ATP, 120 NaCl, 2 KCl,
3 MgCl2, and 30 histidine (pH 7.2), with and without ouabain
(3 mM). ATPase activity was measured after 60 min of incubation
at 37 C. Reaction was achieved by the addition of a quenching
solution (0.6 ml) containing 1 N H2SO4 and 0.5% ammonium
molybdate. The formation of a phosphomolybdate complex was
determined spectrophotometrically at 700 nm. A standard curve
was run using H2PO4. Na+
,K+
-ATPase activity was measured as
the difference between ouabain-treated and ouabain-untreated
samples. Enzyme activity was expressed as lmol Pi liberated/h/g
tissue.
2.3.6. Determination of cerebral cortex antioxidant enzyme activities
Catalase (CAT) activity was assayed by the method of Aebi [34].
Enzymatic reaction was initiated by adding an aliquot of 20 ll of
the homogenized tissue and the substrate (H2O2) to a concentration
of 0.5 M in a medium containing 100 mM phosphate buffer
(pH 7.4). Changes in absorbance were recorded at 240 nm. CAT
activity was calculated in terms of lmol H2O2 consumed/min/mg
of protein.
Superoxide dismutase (SOD) activity was estimated according to
Beauchamp and Fridovich [35]. The reaction mixture contained
50 mM of tissue homogenates in potassium phosphate buffer (pH
7.8), 0.1 mM EDTA, 13 mM L-methionine, 2 lM riboflavin and
75 mM nitro blue tetrazolium (NBT). The developed blue colour
in the reaction was measured at 560 nm. Units of SOD activity
were expressed as the amount of enzyme required to inhibit the
reduction of NBT by 50% and the activity was expressed as units/
mg of protein.
Glutathione peroxidase (GPx) activity was measured according to
Flohe and Gunzler [36]. GPx catalyzes the oxidation of reduced glutathione
by cumene hydroperoxide. In the presence of reduced glutathione
reductase and nicotinamide adenine dinucleotide
phosphate reduced form (NADPH), the oxidized reduced glutathione
is immediately converted to the reduced form with a concomitant
oxidation of NADPH–NADP+
. The decrease in absorbance at
340 nm was measured. The enzyme activity was expressed as
nmole of GSH oxidized/min/mg protein.
2.3.7. Cerebral cortex glutathione levels
Glutathione (GSH) in the cerebral cortex was determined by the
method of Ellman [37] modified by Jollow et al. [38]. The method is
based on the development of a yellow colour when DTNB (5,5-
dithiobtis-2 nitro benzoic acid) is added to compounds containing
sulfhydryl groups. Five hundred microlitres of tissue homogenate
in phosphate buffer were added to 3 ml of 4% sulfosalicylic acid.
The mixture was centrifuged at 1600g for 15 min. Five hundred
millilitres of supernatants were taken and added to Ellman’s reagent.
The absorbance was measured at 412 nm after 10 min. Total
GSH content was expressed as lg/g of tissue.
2.3.8. Hydrophilic antioxidants
Ascorbic acid (vitamin C) determination was performed as described
by Jacques-Silva et al. [39]. Protein in cerebral cortex
homogenate extract was precipitated in 10 volumes of a cold 4%
trichloroacetic acid solution. An aliquot of sample (300 lL) was adjusted
with H2O to a final volume of 1 mL and incubated at 38 C
for 3 h, then 1 mL of H2SO4 65% (v/v) was added to the medium.
The reaction product was determined using color reagent containI.
Ben Amar
0/5000
ในระหว่างระยะเวลาทดลอง (30 วัน), อาหารและน้ำบริโภคสัตว์ถูกตรวจสอบทุกวัน (ตารางที่ 1) DM, Se และมีคำนวณปริมาณวิตามินที่กิน โดยหนูผู้ใหญ่ตามลำดับจากน้ำและอาหารการบริโภคสัตว์ในกลุ่มอื่นถูกฆ่าตาย จบรักษา โดย decapitation ปากมดลูกเพื่อหลีกเลี่ยงความเครียด เนื้อเยื่อสมองเอาออกทันที และ dissected ผ่านแก้วฉ่ำภาพนิ่งและคอร์เทกซ์ cerebral ภูมิภาคถูกรวบรวม และ homogenized เป็นกลุ่ม(10% w/v) แยกต่างหากกับการ homogeniser Ultra Turrax ในฉ่ำ1.15% kCl – 0.01 M โซเดียม โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์(1 M:K2HPO4, M:KH2PO4 1, pH 7.4) Homogenates ถูก centrifugedที่ 10000 g สำหรับ 20 นาทีที่ 4 ค Supernatants ได้ใช้สำหรับการออกซิเดชัน peroxidation และโปรตีนไขมันทันทีassays Homogenate aliquots ถูกเก็บไว้ที่ 80 C สำหรับชีวเคมีเพิ่มเติมassays อื่น ๆ เนื้อเยื่อคอร์เทกซ์ cerebral สกัดจากการกำหนดควบคุมและบำบัดหนูใน 10% buffered formalin และมีการประมวลผลสำหรับพาราฟิน sectioning ศึกษาสรีรวิทยา2.3. ประมาณชีวเคมี2.3.1. โปรตีนนับเนื้อหาคอร์เทกซ์ cerebral โปรตีนได้วัดตามวิธีการของ Lowry et al. [29] โดยใช้วัว serum albumin เป็นมาตรฐาน2.3.2. Malondialdehyde (MDA) วัดในคอร์เทกซ์ cerebral malondialdehyde ความเข้มข้น ดัชนีของperoxidation ของไขมัน กำหนด spectrophotometricallyตาม Draper และ Hadley [30] สั้น ๆ เป็นส่วนลงตัวของสมองsupernatant แยกคอร์เทกซ์ถูกผสมกับ 1 มล.ของ 5% trichloroaceticกรด และ centrifuged ที่ 2500g สำหรับ 10 นาที จำนวน 1 ml ของรีเอเจนต์กรด thiobarbituric (0.67%) ถูกเพิ่ม 500 จะของ supernatantและอุ่นที่ 90 C สำหรับ 15 นาที มีการระบายความร้อนด้วยส่วนผสมจากนั้นและวัด absorbance ที่ 532 nm ใช้เป็นเครื่องทดสอบกรดด่าง(Jenway UV-6305 เอสเซ็กซ์ อังกฤษ) ค่า malondialdehydeคำนวณได้โดยใช้ 1,1,3,3 tetraethoxypropane เป็นมาตรฐาน และแสดงเป็น nmoles malondialdehyde/กรัม ของเนื้อเยื่อ2.3.3 การกำหนดของคอร์เทกซ์ cerebral ขั้นสูงโปรตีนเกิดออกซิเดชันผลิตภัณฑ์ระดับระดับผลิตภัณฑ์ (AOPP) ของโปรตีนเกิดออกซิเดชันขั้นสูงที่กำหนดตามวิธีของ Kayali et al. [31] สั้น ๆ 0.4 mlของคอร์เทกซ์ cerebral สารสกัดได้รับบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 0.8 ml(0.1 M; pH 7.4) หลังจาก 2 นาที 0.1 ml ของ 1.16 M โพแทสเซียมไอโอไดด์ (KI)มีเพิ่มการท่อตาม 0.2 มิลลิลิตรของกรดน้ำส้ม Absorbance ที่ของปฏิกิริยา ผสมทันทีบันทึกที่340 nm คำนวณความเข้มข้นของ AOPP สำหรับแต่ละตัวอย่างโดยใช้ค่าสัมประสิทธิ์การสูญพันธุ์ของ mM1 261 cm1 และผลลัพธ์ถูกแสดงเป็น lmol/มิลลิกรัม โปรตีน2.3.4 การกำหนดของคอร์เทกซ์ cerebral carbonyl โปรตีนโปรตีน carbonyls (PCO) ถูกวัดโดยใช้วิธีการReznick และห่อของ [32] สั้น ๆ 100 แยกจะคอร์เทกซ์ cerebralsupernatant ถูกเก็บไว้ในหลอดแก้ว แล้ว 500 จะ 10 มม.มีเพิ่ม 2, 4-dinitrophenylhydrazine (DNPH) ใน 2 N HCl หลอดมี incubated สำหรับ h 1 ที่อุณหภูมิห้อง ตัวอย่าง vortexedทุก 15 นาที 500 แล้วเพิ่มจะ TCA (20%) และหลอดถูกทิ้งน้ำแข็ง 5 นาทีตาม ด้วย centrifugation สำหรับ10 นาที Precipitates โปรตีนถูกเก็บรวบรวม เม็ดถูกแล้ว ล้างสองครั้ง ด้วยเอทานอลเอทิล acetate (v/v) Precipitate ขั้นสุดท้ายถูกละลายใน 600 จะไฮโดรคลอไรด์ guanidine 6 Mโซลูชัน และ incubated สำหรับ 15 นาทีที่ 37 เซลเซียส Absorbance ของตัวอย่างที่วัดที่ 370 nm คำนวณเนื้อหา carbonylขึ้นอยู่กับค่าสัมประสิทธิ์สบดับของ DNPH(e = 2.2 104 cm1 M1) และแสดงเป็น lmol/มิลลิกรัม โปรตีน2.3.5. Na +K +-ทดสอบ ATPaseกิจกรรมของ Na +K +-กำหนด ATPase ในคอร์เทกซ์ cerebralโดยใช้วิธีของ Kawamoto et al. [33] รวมกิจกรรม ATPaseกำหนด โดยวิเคราะห์ปี่ออกจาก ATP hydrolyzed ขึ้นรูปซับซ้อน ด้วย molybdate เริ่มปฏิกิริยา โดยเพิ่ม40 จะ homogenate (หยุดชั่วคราวในบัฟเฟอร์ตรี – HCl, pH 7.4) เพื่อ200 จะ ATPase บัฟเฟอร์ที่ประกอบด้วย (ใน mM): 3 ATP, 120 NaCl, 2 KCl3 MgCl2 และ 30 histidine (pH 7.2), มี และไม่ มี ouabain(3 มม) กิจกรรม ATPase ที่วัดหลังจาก 60 นาทีของคณะทันตแพทยศาสตร์ที่ 37 เซลเซียสปฏิกิริยาสำเร็จ โดยการเพิ่มการชุบโซลูชัน (0.6 มิลลิลิตร) ประกอบด้วยแอมโมเนีย N กำมะถันและ 0.5% 1molybdate การก่อตัวของ phosphomolybdate ที่ซับซ้อนได้กำหนด spectrophotometrically ที่ 700 nm เส้นโค้งมาตรฐานถูกเรียกใช้ H2PO4 Na +, K +-กิจกรรม ATPase ที่วัดเป็นความแตกต่าง ระหว่าง ouabain ถือว่าไม่ถูก รักษา ouabainตัวอย่างการ เอนไซม์ถูกแสดงเป็น lmol ปี่ liberated/h/gเนื้อเยื่อ2.3.6 การกำหนดกิจกรรมของเอนไซม์สารต้านอนุมูลอิสระคอร์เทกซ์ cerebralกิจกรรม catalase (แมว) ถูก assayed โดยวิธีการ Aebi [34]เริ่มปฏิกิริยาเอนไซม์ในระบบ โดยการเพิ่มส่วนลงตัวที่ 20 จะของhomogenized เป็นกลุ่มเนื้อเยื่อและพื้นผิว (H2O2) ให้เข้มข้นของสื่อที่ประกอบด้วยบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 100 มม. 0.5 M(pH 7.4) บันทึกการเปลี่ยนแปลง absorbance ที่ 240 nm แมวมีคำนวณกิจกรรมใน lmol H2O2 ใช้/นาที/มิลลิกรัมของโปรตีนซูเปอร์ออกไซด์ dismutase (SOD) กิจกรรมที่ประเมินตามBeauchamp และ Fridovich [35] ส่วนผสมของปฏิกิริยาที่มีอยู่50 มม.ของ homogenates เนื้อเยื่อในโพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH7.8), 0.1 mM EDTA, 13 mM L methionine, lM 2 วิตามิน และมม. 75 บลูไนโตร tetrazolium (เอ็นบีที) สีฟ้าพัฒนาในปฏิกิริยาที่ถูกวัดที่ 560 nm หน่วยของกิจกรรมสดถูกแสดงเป็นจำนวนของเอนไซม์ที่จำเป็นในการยับยั้งการลดลงของเอ็นบีที 50% และกิจกรรมที่ได้แสดงเป็นหน่วย /มก.โปรตีนกิจกรรม peroxidase (GPx) กลูตาไธโอนถูกวัดตามFlohe และ Gunzler [36] GPx catalyzes ออกซิเดชันของกลูตาไธโอนลดลงโดย cumene hydroperoxide หน้าลดกลูตาไธโอนreductase และ nicotinamide adenine dinucleotideฟอสเฟตลดลงแบบฟอร์ม (NADPH), กลูตาไธโอนลดลงการตกแต่งจะถูกแปลงเป็นฟอร์มที่ลดลงมีความมั่นใจทันทีoxidation of NADPH–NADP+. The decrease in absorbance at340 nm was measured. The enzyme activity was expressed asnmole of GSH oxidized/min/mg protein.2.3.7. Cerebral cortex glutathione levelsGlutathione (GSH) in the cerebral cortex was determined by themethod of Ellman [37] modified by Jollow et al. [38]. The method isbased on the development of a yellow colour when DTNB (5,5-dithiobtis-2 nitro benzoic acid) is added to compounds containingsulfhydryl groups. Five hundred microlitres of tissue homogenatein phosphate buffer were added to 3 ml of 4% sulfosalicylic acid.The mixture was centrifuged at 1600g for 15 min. Five hundredmillilitres of supernatants were taken and added to Ellman’s reagent.The absorbance was measured at 412 nm after 10 min. TotalGSH content was expressed as lg/g of tissue.2.3.8. Hydrophilic antioxidantsAscorbic acid (vitamin C) determination was performed as describedby Jacques-Silva et al. [39]. Protein in cerebral cortexhomogenate extract was precipitated in 10 volumes of a cold 4%trichloroacetic acid solution. An aliquot of sample (300 lL) was adjustedwith H2O to a final volume of 1 mL and incubated at 38 Cfor 3 h, then 1 mL of H2SO4 65% (v/v) was added to the medium.The reaction product was determined using color reagent containI.Ben Amar
การแปล กรุณารอสักครู่..
ในช่วงระยะเวลาทดลอง ( 30 วัน ) อาหารและการบริโภคน้ำของสัตว์
ตรวจสอบทุกวัน ( ตารางที่ 1 ) เบาหวาน , เซ
วิตามินอีปริมาณกินหนูผู้ใหญ่ได้ตามลำดับ
จากน้ำและอาหารที่บริโภค สัตว์ในกลุ่มถูกสังหารในตอนท้ายของ
รักษาโดยตัดปากมดลูกเพื่อหลีกเลี่ยงความเครียด เนื้อเยื่อสมอง
รีบลบออก และผ่าผ่านสไลด์น้ำแข็งแก้ว
เย็นและซีรีบรัลคอร์เท็กซ์เขตรวบรวมและบด
( % w / v 10 ) แยกกับ Ultra turrax homogeniser ในเย็น ,
1.15 % . - 0.01 M โซเดียม , โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์
1 M : k2hpo4 ; 1 M : kh2po4 pH 7.4 ) . homogenates เป็นระดับ 10000g
ที่ 20 นาทีที่ 4 ส่งผล supernatants
Cใช้สำหรับ lipid peroxidation ได้ทันทีและวิธีออกซิเดชัน
โปรตีน อนเฉยๆที่อุณหภูมิ 80 องศาเซลเซียส สำหรับวิธีการทางชีวเคมีต่อไป
เนื้อเยื่อสมองส่วนเปลือกอื่น ๆ สารสกัดจาก
ควบคุมและหนู หรือฟอร์มาลินบัฟเฟอร์ 10 %
ผลิตพาราฟินวุ่นสำหรับผลการศึกษา .
2.3 ชีวเคมีภาค
2.3.1 . โปรตีนปริมาณ
ซีรีบรัล คอร์เท็กซ์ปริมาณโปรตีนที่วัดตาม
วิธีโลว์รี et al . [ 29 ] ใช้อัลบูมินเป็นมาตรฐาน
.
2.3.2 . มาลอนไดอัลดีไฮด์ ( MDA ) การวัดความเข้มข้นของซีรีบรัลคอร์เท็กซ์
O
, ดัชนีของ lipid peroxidation โดยพิจารณาตามนี้
และ Draper แฮดลีย์ [ 30 ] สั้น ๆ , เป็นส่วนลงตัวของซีรีบรัล
สารสกัดจากเปลือกนำผสมกับ 1 มิลลิลิตรของกรดไตรคลอโรอะซิติก 5 %
ไฟฟ้าที่ 2500g 10 นาทีจำนวน 1 ml เท่ากับกรด ( 0.67 %
3 ) เพิ่ม 500 จะนำ
และอุ่นที่ 90 องศาเซลเซียส 15 นาที ส่วนผสมเย็นแล้ววัดค่าการดูดกลืนแสงที่
532 nm และ การใช้วัสดุ
( jenway uv-6305 , Essex , อังกฤษ ) ส่วนค่า
Oคำนวณการใช้ 1,1,3,3-tetraethoxypropane เป็นมาตรฐานและ
O / g ซึ่งในเนื้อเยื่อ .
2.3.3 . ความมุ่งมั่นของซีรีบรัลคอร์เท็กซ์ขั้นสูงผลิตภัณฑ์ระดับโปรตีนออกซิเดชัน
ผลิตภัณฑ์โปรตีนออกซิเดชันขั้นสูง ( aopp ) ระดับวิเคราะห์
ตามวิธีการของ kayali et al . [ 31 ] สั้น , 0.4 มล.
ของซีรีบรัลคอร์เท็กซ์สกัดถูกปฏิบัติด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์
0.8 มิลลิลิตร
ตรวจสอบทุกวัน ( ตารางที่ 1 ) เบาหวาน , เซ
วิตามินอีปริมาณกินหนูผู้ใหญ่ได้ตามลำดับ
จากน้ำและอาหารที่บริโภค สัตว์ในกลุ่มถูกสังหารในตอนท้ายของ
รักษาโดยตัดปากมดลูกเพื่อหลีกเลี่ยงความเครียด เนื้อเยื่อสมอง
รีบลบออก และผ่าผ่านสไลด์น้ำแข็งแก้ว
เย็นและซีรีบรัลคอร์เท็กซ์เขตรวบรวมและบด
( % w / v 10 ) แยกกับ Ultra turrax homogeniser ในเย็น ,
1.15 % . - 0.01 M โซเดียม , โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์
1 M : k2hpo4 ; 1 M : kh2po4 pH 7.4 ) . homogenates เป็นระดับ 10000g
ที่ 20 นาทีที่ 4 ส่งผล supernatants
Cใช้สำหรับ lipid peroxidation ได้ทันทีและวิธีออกซิเดชัน
โปรตีน อนเฉยๆที่อุณหภูมิ 80 องศาเซลเซียส สำหรับวิธีการทางชีวเคมีต่อไป
เนื้อเยื่อสมองส่วนเปลือกอื่น ๆ สารสกัดจาก
ควบคุมและหนู หรือฟอร์มาลินบัฟเฟอร์ 10 %
ผลิตพาราฟินวุ่นสำหรับผลการศึกษา .
2.3 ชีวเคมีภาค
2.3.1 . โปรตีนปริมาณ
ซีรีบรัล คอร์เท็กซ์ปริมาณโปรตีนที่วัดตาม
วิธีโลว์รี et al . [ 29 ] ใช้อัลบูมินเป็นมาตรฐาน
.
2.3.2 . มาลอนไดอัลดีไฮด์ ( MDA ) การวัดความเข้มข้นของซีรีบรัลคอร์เท็กซ์
O
, ดัชนีของ lipid peroxidation โดยพิจารณาตามนี้
และ Draper แฮดลีย์ [ 30 ] สั้น ๆ , เป็นส่วนลงตัวของซีรีบรัล
สารสกัดจากเปลือกนำผสมกับ 1 มิลลิลิตรของกรดไตรคลอโรอะซิติก 5 %
ไฟฟ้าที่ 2500g 10 นาทีจำนวน 1 ml เท่ากับกรด ( 0.67 %
3 ) เพิ่ม 500 จะนำ
และอุ่นที่ 90 องศาเซลเซียส 15 นาที ส่วนผสมเย็นแล้ววัดค่าการดูดกลืนแสงที่
532 nm และ การใช้วัสดุ
( jenway uv-6305 , Essex , อังกฤษ ) ส่วนค่า
Oคำนวณการใช้ 1,1,3,3-tetraethoxypropane เป็นมาตรฐานและ
O / g ซึ่งในเนื้อเยื่อ .
2.3.3 . ความมุ่งมั่นของซีรีบรัลคอร์เท็กซ์ขั้นสูงผลิตภัณฑ์ระดับโปรตีนออกซิเดชัน
ผลิตภัณฑ์โปรตีนออกซิเดชันขั้นสูง ( aopp ) ระดับวิเคราะห์
ตามวิธีการของ kayali et al . [ 31 ] สั้น , 0.4 มล.
ของซีรีบรัลคอร์เท็กซ์สกัดถูกปฏิบัติด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์
0.8 มิลลิลิตร
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- วันนี้ฝนไม่ตก
- During the experimental period (30 days)
- Newfoundland
- describing
- ผู้หญิงไทยไม่ได้เป็นโสเภณีกันทุกคน
- ดังนั้นเเบบ pellet ดีกว่า เพราะหนา
- I mean how you hurted your eyes???
- ส้มแป้น
- ที่รักคุณคนเดียว
- what the term "nondesignable" means.
- ฉันจะทำการบ้าน
- Thats different old. I can hamburger can
- ฉันไปไหว้พระ
- ส้มแป้น
- รถจักรยานยนต์
- I remember all your words I remember tha
- Who accept that the teacher
- พรุ่งนี้ฉันไปกระทรวงสาธารณสุข
- ปลาสด
- วันนี้ฝนไม่ตก
- ฉันไปเที่ยวทะเล
- นึ่ง
- การตั้งครรภ์เป็นสาเหตุที่ทำให้เกิดการเปล
- I remember all your words I remember tha
