Plasma membranes were purified from

Plasma membranes were purified from glucose-metabolizing cells by differential and sucrose gradient centrifugation and ATPase activity was assayed at pH 6.5 with 2 mM ATP [39]. Protein concentration was determined by the Bradford method [40] with the Bio-Rad Protein Assay reagent (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) and bovine IgG as standard. Proton efflux from yeast cells was determined after starvation at 4 C and glucose addition at 30 C [41]. Simultaneous determination of potassium and rubidium content was performed as described [42]. In brief, cells were inoculated in AP medium containing 10 mM KCl and grown until absorbance at OD660 nm = 0.4. Then, the cells were washed twice with 20 mM MgCl2 and suspended in AP medium without potassium. 10 ml aliquots were taken, washed with 20 mM MgCl2 and suspended in 0.2 ml buffer containing 2% glucose, 50 mM succinic acid and 20 mM MgCl2. After 5 min, 5 mM RbCl was added and aliquots were taken, washed twice with 20 mM MgCl2, suspended in 0.5 ml MilliQ water, and boiled to extract the intracellular ions. After removal of cell debris by centrifugation, 1/50 dilutions of the supernatant were used for HPLC analysis in Waters equipment with a IC-PAK CM/D column and a Waters 432 conductivity detector. Elution was made in an isocratic flux, using as a mobile phase 0.1 mM EDTA and 3 mM HNO3. Sample analysis and preparation of rubidium and potassium standards was performed as described by the manufacturer.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เยื่อหุ้มพลาสมาได้บริสุทธิ์จาก metabolizing กลูโคสเซลล์ โดย centrifugation ไล่ระดับสีที่แตกต่างกันและซูโครส และกิจกรรม ATPase ที่ assayed ที่ pH 6.5 กับ mM 2 ATP [39] ความเข้มข้นของโปรตีนที่ถูกกำหนด โดยวิธีแบรดฟอร์ด [40] กับรีเอเจนต์ทดสอบโปรตีนชีวภาพราษฎร์ (ห้องปฏิบัติการชีวภาพ Rad เฮอร์คิวลิส แคลิฟอร์เนีย) และ IgG วัวเป็นมาตรฐาน Efflux โปรตอนจากเซลล์ยีสต์ที่ถูกกำหนดหลังจากความอดอยากที่เพิ่ม 4 C และกลูโคสที่ 30 C [41] มีดำเนินการพร้อมกำหนดเนื้อหาโพแทสเซียมและ rubidium อธิบาย [42] สังเขป เซลล์ถูก inoculated ใน AP ประกอบด้วย 10 mM KCl และเติบโตจนถึง absorbance ที่ OD660 nm = 0.4 แล้ว เซลล์ถูกล้างสองครั้ง ด้วย 20 มม. MgCl2 และถูกระงับใน AP ไม่มีโพแทสเซียม 10 ml aliquots ถูกมา ล้าง ด้วย 20 มม. MgCl2 และถูกระงับในบัฟเฟอร์ 0.2 ml ประกอบด้วย 2% กลูโคส กรด 50 มม. และ 20 มม. MgCl2 หลังจาก 5 นาที 5 มม. เพิ่ม RbCl และ aliquots ถ่าย ล้างสองครั้ง ด้วย 20 มม. MgCl2 หยุดชั่วคราวใน 0.5 ml น้ำ MilliQ และต้มกลั่นกัน intracellular หลังจากเอาเศษเซลล์โดย centrifugation, dilutions 1/50 ของ supernatant ถูกใช้สำหรับการวิเคราะห์ HPLC ในอุปกรณ์น้ำคอลัมน์ IC ปาก CM/D และเครื่องตรวจจับในการนำน้ำทะเล 432 Elution ถูกทำในการไหล isocratic คิด ใช้ เป็นการเคลื่อนระยะ 0.1 mM EDTA และ 3 มม. HNO3 ตัวอย่างการวิเคราะห์และการจัดทำมาตรฐาน rubidium และโพแทสเซียมที่ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ โดยผู้ผลิต

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

พลาสม่าถูกเยื่อบริสุทธิ์จากเซลล์เมแทบอกลูโคสโดยความแตกต่างและการปั่นแยกลาดน้ำตาลซูโครสและกิจกรรม ATPase ได้รับการวิเคราะห์ที่ pH 6.5 มี 2 มิลลิเอทีพี [39] ความเข้มข้นของโปรตีนที่ถูกกำหนดโดยวิธีแบรดฟอ [40] ที่มีสารโปรตีน Assay Bio-Rad (ห้องปฏิบัติการ Bio-Rad ดาว, CA) และ IgG วัวเป็นมาตรฐาน โปรตอนไหลจากเซลล์ยีสต์ถูกกำหนดความอดอยากหลังจากที่ 4 C และการเพิ่มระดับน้ำตาลในวันที่ 30 C [41] ความมุ่งมั่นพร้อมกันของโพแทสเซียมและรูบิเดียมเนื้อหาที่ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ [42] ในช่วงสั้น ๆ เซลล์ถูกเชื้อในสื่อ AP มี 10 มิลลิ KCl และเติบโตจนการดูดกลืนแสงที่ OD660 นาโนเมตร = 0.4 จากนั้นเซลล์ถูกล้างครั้งที่สองมี 20 มิลลิ MgCl2 และลอยอยู่ในกลาง AP โดยไม่มีโพแทสเซียม 10 มล. aliquots ถูกนำมาล้างด้วย 20 มิลลิ MgCl2 และระงับใน 0.2 มล. บัฟเฟอร์ที่มีน้ำตาลกลูโคส 2%, 50 มิลลิกรดซัและ 20 มิลลิ MgCl2 หลังจาก 5 นาที, 5 มิลลิ rbcL ถูกบันทึกและ aliquots ถูกนำมาล้างครั้งที่สองมี 20 มิลลิ MgCl2, ลอยอยู่ในน้ำ 0.5 มล. MilliQ และต้มในการสกัดไอออนในเซลล์ หลังจากที่กำจัดเศษเซลล์โดยการหมุนเหวี่ยง 1/50 เจือจางของสารละลายที่ใช้สำหรับการวิเคราะห์ HPLC อุปกรณ์น้ำกับ IC-PAK CM / คอลัมน์ D และน้ำ 432 เครื่องตรวจจับการนำ elution ถูกสร้างขึ้นมาในฟลักซ์ isocratic ใช้เป็นเฟสเคลื่อนที่ 0.1 มิลลิ EDTA และ 3 มิลลิ HNO3 ตัวอย่างการวิเคราะห์และการจัดทำรูบิเดียมและมาตรฐานโพแทสเซียมที่ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้โดยผู้ผลิต

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

พลาสมาเมมเบรนมีความบริสุทธิ์จากกลูโคสและเผาผลาญเซลล์ค่ากิจกรรมปั่นไล่ระดับซูโครสและซีรั่มโปรตีนที่ pH 6.5 กับ 2 mm เอทีพี [ 39 ] ความเข้มข้นของโปรตีนถูกกำหนดโดย Bradford วิธี [ 40 ] กับไบโอโปรตีนโครงสร้าง ( ไบโอ 3 แรดแรดห้องปฏิบัติการ , Hercules , CA ) และ IgG และเป็นมาตรฐาน โปรตอนจากเซลล์ยีสต์ การพิจารณาหลังจากการอดอาหารที่ 4 องศาเซลเซียส และกลูโคส นอกจากนี้ที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส [ 41 ] ปริมาณโพแทสเซียมและรูบิเดียมพร้อมกัน เนื้อหามีการอธิบายไว้ [ 42 ] ในช่วงสั้น ๆ เซลล์ที่ปลูกเชื้อในอาหารที่มีโพแทสเซียม AP 10 มม. และเติบโตจนมีการดูดกลืนแสงที่ od660 nm = 0.4 แล้วเซลล์ก็ซักสองชุด 20 มม. และแขวนลอยใน AP สื่อโดยไม่มีโพแทสเซียม 10 เฉยๆมล ถ่าย ล้าง กับ ชุด 20 มม. และแขวนลอยใน 0.2 มิลลิลิตร บัฟเฟอร์ที่มีน้ำตาลกลูโคส 2 % , 50 มม. และ 20 มม. ชุดน้ำตาล . หลังจาก 5 นาที , 5 มม. และ rbcl เพิ่มเฉยๆ ถ่าย ล้าง ชุด 2 กับ 20 มม. 0.5 ml milliq แขวนลอยในน้ำและต้มแยกไอออนภายในเซลล์ . หลังจากการกำจัดเศษเซลล์โดยการเหวี่ยงแยก 1 / 50 ของที่นำวิธีการวิเคราะห์ HPLC อุปกรณ์น้ำกับคอลัมน์ ic-pak cm / d และการนำน้ำและเครื่องตรวจจับ ได้มาทำในฟลักซ์ Isocratic ใช้เป็นเฟสเคลื่อนที่ 0.1 mM EDTA และ กรดดินประสิว 3 มิลลิเมตร การวิเคราะห์ตัวอย่างและการเตรียมตัวของรูบิเดียมมาตรฐานและโพแทสเซียมได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้โดยผู้ผลิต