Briefly, 10 mL of reaction mix consisted of 4 mL of 375 nM
Y-27632 or 125 mg/mL of herbal extract, 2 mL of 3.5 mM substrate,
2 mL (0.5 ng) enzyme and 2 mL of 350 mM ATP. In control wells the
inhibitor was replaced by buffer. Wells without enzyme
were considered as negative control/blank. The reaction
mixture was incubated for 30 min at 37 1C, followed by addition
of 5 mL of 175 nM SA-XL665 and 5 mL of STK Antibody–Cryptate,
and
incubated at 25 1C for 60 min. HTRF signal was measured by
microplate reader, PHERAstar (BMG Labtech, Offenburg, Germany).
Briefly, 10 mL of reaction mix consisted of 4 mL of 375 nMY-27632 or 125 mg/mL of herbal extract, 2 mL of 3.5 mM substrate,2 mL (0.5 ng) enzyme and 2 mL of 350 mM ATP. In control wells theinhibitor was replaced by buffer. Wells without enzymewere considered as negative control/blank. The reactionmixture was incubated for 30 min at 37 1C, followed by additionof 5 mL of 175 nM SA-XL665 and 5 mL of STK Antibody–Cryptate,andincubated at 25 1C for 60 min. HTRF signal was measured bymicroplate reader, PHERAstar (BMG Labtech, Offenburg, Germany).
การแปล กรุณารอสักครู่..
สั้น ๆ , 10 มิลลิลิตรของการเกิดปฏิกิริยาผสมประกอบด้วย 4 มิลลิลิตร 375 นาโนเมตร
Y-27632 หรือ 125 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรของสารสกัดสมุนไพร 2 มิลลิลิตรของพื้นผิว 3.5 มิลลิ,
2 มิลลิลิตร (0.5 นาโนกรัม) และเอนไซม์ 2 มิลลิลิตร 350 มิลลิเอทีพี
ในหลุมควบคุมยับยั้งถูกแทนที่ด้วยบัฟเฟอร์ เวลส์โดยไม่ต้องเอนไซม์ได้รับการพิจารณาเป็นตัวควบคุมเชิงลบ / ว่างเปล่า
ปฏิกิริยาส่วนผสมที่ถูกบ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่ 37 1C ตามด้วยนอกจาก 5 มิลลิลิตร 175 นาโนเมตร SA-XL665 และ 5 มิลลิลิตร STK แอนติบอดี-Cryptate, และบ่มที่ 25 1C 60 นาที สัญญาณ HTRF โดยวัดจากผู้อ่านmicroplate, PHERAstar (BMG Labtech, Offenburg, เยอรมนี)
การแปล กรุณารอสักครู่..