In this study, transcriptome analys

In this study, transcriptome analysis of twelve laccase genes in Pleurotus ostreatus revealed that their expression was
differentially regulated at different developmental stages. Lacc5 and Lacc12 were specifically expressed in fruiting bodies and primordia, respectively, whereas Lacc6 was expressed at all developmental stages. Lacc1 and Lacc3 were specific to the mycelial stage in solid medium. In order to investigate their biochemical characteristics, these laccases were heterologously expressed in Pichia pastoris using the pPICHOLI-2 expression vector. Expression of the laccases was facilitated by intermittent addition of methanol as an inducer and sole carbon source, in order to reduce the toxic effects associated with high methanol concentration. The highest expression was observed when the recombinant yeast cells were grown for 5 days at 15oC with intermittent addition of 1% methanol at a 12-hr interval. Investigation of enzyme kinetics using 2,2-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid (ABTS) as a substrate revealed that the primordium-specific laccase Lacc12 was 5.4-fold less active than Lacc6 at low substrate concentration with respect to ABTS oxidation activity. The optimal pH and temperature of Lacc12 were 0.5 pH units and 5oC higher than those of Lacc6. Lacc12 showed maximal activity at pH 3.5 and 50oC, which may reflect the physiological conditions at the primordiation stage.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ในการศึกษานี้ วิเคราะห์ยีน laccase 12 ใน ostreatus เห็ดนาง transcriptome เปิดเผยว่า นิพจน์ของพวกเขาคือdifferentially ควบคุมในขั้นตอนการพัฒนาที่แตกต่างกัน Lacc5 และ Lacc12 ได้เฉพาะแสดงใน fruiting ศพและ primordia ตามลำดับ ในขณะที่ Lacc6 ถูกแสดงในขั้นตอนการพัฒนาทั้งหมด Lacc1 และ Lacc3 ได้เฉพาะระยะ mycelial ในของแข็ง เพื่อตรวจสอบลักษณะของชีวเคมี laccases เหล่านี้ถูก heterologously แสดง Pichia pastoris โดยใช้เวกเตอร์นิพจน์ pPICHOLI 2 ของ laccases ได้อำนวยความสะดวก โดยไม่ต่อเนื่องแห่งเมทานอลเป็น inducer และเล่คาร์บอน เพื่อลดผลกระทบที่เป็นพิษที่สัมพันธ์กับความเข้มข้นของเมทานอลสูง นิพจน์ที่สูงสุดถูกตรวจสอบเมื่อมีปลูกเซลล์ยีสต์ recombinant วัน 5 ที่ 15oC บวก 1% เมทานอลไม่ต่อเนื่องในช่วง 12 ชั่วโมง การตรวจสอบเอนไซม์จลนพลศาสตร์การใช้พื้นผิวแบบเปิดเผยว่า laccase primordium เฉพาะ Lacc12 ใช้งานอยู่ 5.4-fold น้อยกว่า Lacc6 ที่ความเข้มข้นขั้นต่ำสุดกับกิจกรรมออกซิเดชันรเรียน 2,2-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid (ABTS) ค่า pH ที่เหมาะสมกับอุณหภูมิของ Lacc12 ได้ 0.5 หน่วย pH และสูงกว่าของ Lacc6 5oC Lacc12 พบกิจกรรมสูงสุดที่ pH 3.5 และ 50oC ซึ่งอาจสะท้อนสภาพสรีรวิทยาในระยะ primordiation ได้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การศึกษาการวิเคราะห์ทราน ริปโตมสิบสอง - ยีน Pleurotus ostreatus เปิดเผยว่า การแสดงออกของพวกเขา
ต่างกัน ระเบียบในขั้นตอนการพัฒนาที่แตกต่างกัน lacc5 lacc12 โดยเฉพาะและแสดงผลศพ และ ไพรม ์เดีย ตามลำดับ ในขณะที่ lacc6 แสดงออกในทุกขั้นตอนการพัฒนา และ lacc1 lacc3 เป็นเฉพาะระยะเส้นใยแข็งปานกลางเพื่อศึกษาลักษณะทาง laccases ของพวกเขา , เหล่านี้เป็น heterologously แสดงออกใน pichia pastoris โดยใช้เวกเตอร์การแสดงออก ppicholi-2 . การแสดงออกของ laccases คือความสะดวกและต่อเนื่องโดยเมทานอลเป็นเอนไซม์ และแหล่งคาร์บอน เพื่อลดพิษที่เกี่ยวข้องกับความเข้มข้นของเมทานอลสูงการแสดงออกสูงสุดพบว่า เมื่อเซลล์ยีสต์ ใช้ปลูกมา 5 วันแล้วที่ยังไม่ 15oc 1 % เมทานอลในช่วงเวลา 12 ชั่วโมง การศึกษาจลนศาสตร์ของเอนไซม์ที่ใช้ 2,2-azino-bis ( 3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid ( Abbr ) เป็นสับสเตรท พบว่า การไหลเข้า - lacc12 เฉพาะ 5 .ใช้งานน้อยกว่า 4 เท่า lacc6 ที่ความเข้มข้นต่ำ ( ด้วยความเคารพ Abbr กิจกรรมออกซิเดชัน พีเอชที่เหมาะสมและอุณหภูมิของ lacc12 เท่ากับ 0.5 หน่วย และ 5oC pH สูงกว่า lacc6 . lacc12 แสดงกิจกรรมสูงสุดที่ pH 3.5 และ 50oc ซึ่งอาจจะสะท้อนให้เห็นถึงสภาพร่างกายที่ primordiation เวที