Most test kits contain a calibrator

Most test kits contain a calibrator of precisely known
concentration, which is measured in varying dilutions
to construct a calibration curve with which the concentration
of a biomarker in unknown samples may be
assessed. In this paper, we restrict ourselves to those
cases in which the biomarker is a protein. Sometimes
the inclusion of the authentic protein as a calibrator for
the kit may raise problems: the protein may be rare,
unstable, hard to purify, or poorly soluble in water.
Although other techniques may be applied, test kits
are often based on the sandwich–ELISA principle in
which a first antibody is coated to a microtiter plate
and serves to capture the biomarker from solution,
whereafter a second antibody (conjugated with a staining
enzyme) is bound to the biomarker (1). If both
epitopes to which these (generally monoclonal) antibodies
bind are known, the standard for calibration
may in principle be replaced by a carrier protein linked
to short synthetic peptides homologous to the respective
epitopes. We have investigated this possibility for
the human bone protein osteocalcin, using bovine serum
albumin as a carrier protein to which the amino
acid sequences 1–16 and 29–43 of human osteocalcin
were coupled. Below we will designate this construct as
alb-OC. The characteristics of alb-OC were measured
with the aid of a commercial osteocalcin sandwich–
ELISA, both antibodies of which were reported to be
selected for recognition of the two sequences mentioned
(2).
Reproducibility of alb-OC preparation. With
1-week intervals, three different batches of alb-OC
were prepared; here they will be designated as albOC1,
-2, and -3, respectively. Protein concentrations
of the stock solutions were 6.0, 6.4, and 5.4 g/L,
respectively. The preparations were frozen at 280°C
until testing. When analyzed by SDS–polyacrylamide
gel electrophoresis, a single band was found with
a molecular mass of approximately 75 kDa. Dose–
response curves were prepared with the commercial
osteocalcin kit (Fig. 1A) and it appeared that the
curves for the three preparations were closely similar.
For each of the three alb-OC preparations, the
apparent osteocalcin concentrations were read from
the calibrator curve at two different dilutions and
the data obtained were used to calculate the “apparent
amount of osteocalcin” exhibited per gram of
alb-OC. The data obtained were 0.057, 0.063, and
0.064 g/g of alb-OC, corresponding to 0.74, 0.81, and
0.83 mol/mol, respectively. Interassay variabilities
for the measurements of the apparent amount of
osteocalcin were 4.7, 3.8, and 5.0%. Alb-OC1 was
used for all experiments reported below.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ส่วนใหญ่มีชุดทดสอบสอบเทียบที่รู้จักกันอย่างแม่นยำ
เข้มข้นซึ่งเป็นวัดในที่แตกต่างกันเจือจาง
ที่จะสร้างเส้นโค้งการสอบเทียบที่ความเข้มข้น
ของ biomarker ในตัวอย่างที่ไม่รู้จักอาจจะ
ประเมิน ในบทความนี้เรา จำกัด ตัวเองให้กับผู้ที่
กรณีที่ biomarker เป็นโปรตีน บางครั้ง
รวมของโปรตีนที่แท้จริงเป็นสอบเทียบสำหรับ
ชุดอาจก่อให้เกิดปัญหา: โปรตีนอาจจะหายาก
. ไม่เสถียรอย่างหนักในการชำระล้างหรือละลายน้ำได้ดีในน้ำ
แม้ว่าเทคนิคอื่น ๆ อาจจะใช้ชุดทดสอบ
จะขึ้นอยู่บ่อยครั้งในแซนวิช หลักการใน -ELISA
ซึ่งแอนติบอดีแรกคือการเคลือบแผ่นไมโคร
และทำหน้าที่ในการจับภาพ biomarker จากการแก้ปัญหา,
whereafter แอนติบอดีที่สอง (ผันกับการย้อมสี
เอนไซม์) ถูกผูกไว้กับ biomarker (1) หากทั้งสอง
epitopes ที่เหล่านี้ (โดยทั่วไปโมโนโคลนอล) แอนติบอดี
ผูกเป็นที่รู้จักกันเป็นมาตรฐานสำหรับการสอบเทียบ
ในหลักการอาจถูกแทนที่ด้วยโปรตีนให้บริการการเชื่อมโยง
ไปยังเปปไทด์สังเคราะห์สั้นคล้ายคลึงกันไปแต่ละ
epitopes เราได้รับการตรวจสอบความเป็นไปได้นี้
โปรตีนกระดูกมนุษย์ osteocalcin ใช้ซีรั่มวัว
อัลบูมิเป็นโปรตีนที่ให้บริการที่เป็นของอะมิโน
กรดลำดับ 1-16 และ 29-43 ของ osteocalcin มนุษย์
ถูกคู่ ด้านล่างนี้เราจะกำหนดโครงสร้างนี้เป็น
Alb-OC ลักษณะของ Alb-OC ถูกวัด
ด้วยความช่วยเหลือของ osteocalcin พาณิชย์ sandwich-
ELISA, แอนติบอดีซึ่งทั้งสองได้รับรายงานจะถูก
เลือกสำหรับการรับรู้ของทั้งสองกล่าวถึงลำดับ
(2).
ความแม่นยำของการเตรียม Alb-OC กับ
ช่วงเวลา 1 สัปดาห์ที่สามสำหรับกระบวนการที่แตกต่างกันของ Alb-OC
ได้จัดทำ; ที่นี่พวกเขาจะได้รับการกำหนดให้เป็น albOC1,
-2 และ -3 ตามลำดับ ความเข้มข้นของโปรตีน
ในโซลูชั่นที่หุ้นเป็น 6.0, 6.4 และ 5.4 กรัม / ลิตร,
ตามลำดับ การเตรียมการถูกแช่แข็งที่ 280 ° C
จนการทดสอบ เมื่อวิเคราะห์โดยวิธี SDS-polyacrylamide
เจลอิเล็กวงเดียวก็พบกับ
มวลโมเลกุลประมาณ 75 กิโลดาลตัน Dose-
เส้นโค้งการตอบสนองที่ถูกจัดทำขึ้นด้วยการค้า
ชุด osteocalcin (รูป. 1A) และปรากฏว่า
เส้นโค้งสำหรับงวดสามเตรียมการมีความคล้ายคลึงกันอย่างใกล้ชิด.
สำหรับแต่ละแห่งที่สามเตรียม Alb-OC,
ความเข้มข้น osteocalcin ชัดเจนถูกอ่านจาก
โค้งสอบเทียบ ที่สองเจือจางแตกต่างกันและ
ข้อมูลที่ได้ถูกนำมาใช้ในการคำนวณ "เห็นได้ชัด
ปริมาณของ osteocalcin "จัดแสดงต่อกรัมของ
Alb-OC ข้อมูลที่ได้รับมี 0.057, 0.063 และ
0.064 กรัม / กรัมของ Alb-OC สอดคล้องกับ 0.74, 0.81 และ
0.83 โมล / โมลตามลำดับ variabilities Interassay
สำหรับการตรวจวัดของจำนวนเงินที่ชัดเจนของ
osteocalcin เป็น 4.7, 3.8, และ 5.0% Alb-OC1 ถูก
นำมาใช้สำหรับการทดลองทั้งหมดรายงานด้านล่าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ชุดทดสอบส่วนใหญ่ประกอบด้วยคาลิเบรเตอร์แน่นอนรู้จัก
สมาธิ ซึ่งเป็นวัดที่เจือจาง
เพื่อสร้างเป็นรูปโค้งซึ่งมีความเข้มข้นของไบโอมาร์คเกอร์ในตัวอย่าง

อาจจะประเมิน ในกระดาษนี้เรา จำกัด ตัวเองเพื่อพวก
กรณีที่ไบโอมาร์คเกอร์เป็นโปรตีน บางครั้ง
รวมของโปรตีนแท้เป็นคาลิเบรเตอร์สำหรับ
ชุดอาจยกปัญหา : โปรตีนอาจจะหายาก
เสถียร ยากที่จะชำระ หรือ ไม่ละลายในน้ำ
ถึงแม้ว่าเทคนิคอื่น ๆอาจจะประยุกต์ , ชุดทดสอบ
มักจะขึ้นอยู่กับแซนด์วิช–หลักการ ELISA ใน
ซึ่งแอนติบอดีแรกจะเคลือบเป็นแผ่นไมโคร
และทำหน้าที่จับไบโอมาร์คเกอร์จากโซลูชั่น
whereafter เป็นแอนติบอดีที่สอง ( conjugated ด้วย
.เอนไซม์ที่ถูกผูกไว้กับไบโอมาร์คเกอร์ ( 1 ) ถ้าทั้ง
จากที่เหล่านี้ ( โดยโมโนโคลนอลแอนติบอดี
ผูก ) เป็นที่รู้จักกันเป็นมาตรฐานสำหรับการสอบเทียบ
อาจในหลักการที่ถูกแทนที่ด้วยเรือบรรทุกเครื่องบินเชื่อมโยง
สั้นสารสังเคราะห์โปรตีนความคล้ายคลึงกับผู้ป่วยเกี่ยวข้อง

เราได้ศึกษาความเป็นไปได้สำหรับมนุษย์กระดูก

) เซรั่มโปรตีนธีโอเคลซิน โดยใช้อัลบูมินเป็นพาหะโปรตีนกรดอะมิโนที่ลำดับ 1 – 16

29 – 43 ของธีโอเคลซินของคู่ ด้านล่างเราจะกำหนดนี้สร้างเป็น
Alb องศาเซลเซียส ลักษณะของ Alb OC ได้
ด้วยความช่วยเหลือของธีโอเคลซินพาณิชย์แซนด์วิช–
) ทั้งแอนติบอดีซึ่งมี
เลือกรับรู้สองลำดับกล่าวถึง

( 2 )ตรวจสอบการเตรียมการ OC Alb . ด้วย
1-week ช่วงเวลาสามชุดที่แตกต่างกันของ Alb OC
เตรียม ที่นี่พวกเขาจะถูกกำหนดให้เป็น alboc1
- , 2 และ 3 ตามลำดับ โปรตีนเข้มข้น
ของหุ้นโซลูชั่น 6.0 , 6.4 และ 5.4 กรัม / ลิตร
ตามลำดับ เตรียมถูกแช่แข็งที่ 280 องศา C
จนกว่าการทดสอบ เมื่อวิเคราะห์โดย SDS - polyacrylamide gel electrophoresis
,เป็นวงเดียวที่พบด้วย
มวลโมเลกุลประมาณ 75 กิโลดาลตัน ยา–
ตอบสนองโค้งเตรียมกับพาณิชย์
ธีโอเคลซินชุด ( รูปที่ 1A ) และก็ปรากฏว่า
โค้งทั้งการเตรียมกันอย่างใกล้ชิด .
สำหรับแต่ละสาม Alb OC การเตรียม ,
) ธีโอเคลซินชัดเจนถูกอ่านจาก
คาลิเบรเตอร์โค้งที่ 2 วิธีการที่แตกต่างกันและ
ข้อมูลที่ใช้ในการคำนวณ " ยอดที่ชัดเจนของธีโอเคลซิน

" ) 1 กรัม ขาวองศาเซลเซียส ข้อมูลที่ได้จากการทดลอง 0.057 , 0.091 และ
0.064 g / g ของ Alb OC ที่ 0.74 , 0.81 ,
0.83 โมล / โมล ตามลำดับ interassay ผัน
สำหรับการวัดปริมาณการปรากฏของ
ธีโอเคลซินเท่ากับ 4.7 , 3.8 และ 5.0 เปอร์เซ็นต์ alb-oc1 คือ
ใช้สำหรับการทดลองรายงานด้านล่าง