In Vitro Kinase Reaction and RNA Ge

In Vitro Kinase Reaction and RNA Gel-Shift Assay. Equal
amounts (4 ,g) of MBP-calreticulin fusion protein were
incubated in the presence and absence of Vero 76 cell lysate
(7-13 Mg of protein) in kinase reaction buffer {10 mM
Tris HCl, pH 7.4/1 mM dithiothreitol/10 mM MgCl2/1 mM
sodium vanadate/2.5 ,uM okadaic acid/20 j,Ci of [y-32P]ATP
(specific activity =6000 Ci/mmol)} for 30 min at 30°C. The
reaction mixture was incubated with MBP antibody for 2 hr
at 4°C. The antibody-antigen complex was then precipitated
using formalin-fixed Staphylococcus aureus cells (GIBCO/
BRL). In gel-shift experiments, MBP and Cal-MBP were
phosphorylated using 50 ,uM unlabeled ATP

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ในหลอดทดลองปฏิกิริยาไคเนสและอาร์เอ็นเอเจลกะทดสอบ จำนวนเงินที่เท่ากัน
(4 กรัม) ฟิวชั่นของโปรตีน MBP-calreticulin
ถูกบ่มในการปรากฏตัวและการขาด vero 76 lysate เซลล์
(7-13 มิลลิกรัมของโปรตีน) ในบัฟเฟอร์ปฏิกิริยาไคเนส {10 มม.
tris hcl, ph 7.4 / 1 มม. dithiothreitol/10 MgCl2 / 1 มม.
โซเดียม vanadate/2.5 เอ่อ okadaic acid/20 เจ CI ของ [y-32P] เอทีพี
(กิจกรรมที่เฉพาะเจาะจง = CI 6000 / mmol)} เป็นเวลา 30 นาทีที่ 30 องศาเซลเซียส
ผสมปฏิกิริยาถูกบ่มกับแอนติบอดี MBP เวลา 2 ชั่วโมง
ที่ 4 องศาเซลเซียส ซับซ้อนแอนติบอดีแอนติเจนที่ถูกตกตะกอนแล้ว
ใช้ฟอร์มาล​​ินคงเชื้อ Staphylococcus aureus เซลล์ (Gibco /
BRL) ในการทดลองเจลกะ MBP และไขมัน-MBP เป็น
phosphorylated ใช้ 50 เอ่อไม่มีชื่อกำกับเอทีพี

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในปฏิกิริยา Kinase หลอดและอาร์เอ็นเอเจกะวิเคราะห์ เท่า
ยอด (4, g) โปรตีน MBP calreticulin ฟิวชั่นถูก
incubated ในสถานะการขาดงานของเซลล์ Vero 76 lysate
(7-13 มิลลิกรัมโปรตีน) ในบัฟเฟอร์ปฏิกิริยา kinase { 10 mM
ทริสเรทติ้ง HCl ค่า pH 7.4/1 มม. dithiothreitol/10 มม. MgCl2/1 มม.
โซเดียม vanadate/2.5 อุ่มเจ okadaic กรด/20, Ci ของ ATP [y - 32P]
(กิจกรรม = 6000 Ci/mmol) } ใน 30 นาทีที่ 30 องศาเซลเซียส ใน
ส่วนผสมปฏิกิริยาถูก incubated กับแอนติบอดี MBP 2 ชั่วโมง
ที่ 4 องศาเซลเซียส คอมเพล็กซ์ตรวจหาแอนติบอดีตกตะกอนแล้ว
ใช้ formalin คง Staphylococcus หมอเทศข้างลายเซลล์ (GIBCO /
BRL) ในการทดลองกะเจล MBP และ Cal MBP ได้
phosphorylated ใช้ 50 อุ่ม unlabeled ATP

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ใน Vitro kinase rna gel-shift สอบและการตอบสนอง.
เท่ากับจำนวนมาก( 4 , G )ของกล่องขาเข้า MBP - calreticulin โปรตีนเป็นการผสมผสาน
incubated ในที่ประชุมและไม่มี Vero Beach - Oceanside 76 เซลล์ lysate
( 7-13 มก.ของโปรตีน)ใน kinase ปฏิกริยาบัฟเฟอร์{ 10 มม.
บริษัททริสเรทติ้งจำกัด HCL /, pH 7.4/1 dithiothreitol มม./ 10 มม. mgcl 2/1 มม.
โซเดียม vanadate / 2.5 ,และ okadaic กรด/ 20 j ,ตราสัญญลักษณ์ของ[ y 32 P ] ATP
(เฉพาะกิจกรรม= 6000 CI /มิลลิโมล)}สำหรับ 30 นาทีที่ 30 ° C ที่
ตามมาตรฐานการผสมผสานกันระหว่างการตอบสนองเป็น incubated พร้อมด้วยแอนทิบอด - อิกล่องขาเข้า MBP สำหรับ 2 ชม.
ที่ 4 ° C คอมเพล็กซ์แอนทิบอด - อิ - , Antigen for ก็ตกตะกอน
การใช้เซลล์สุนัขจิ้งจอก staphylococcus ฟอร์มาลิน( gibco /
BRL )บราซิล,เรียล ในการทดลองเจล - Shift กล่องขาเข้า MBP และ CAL แบบกล่องขาเข้า MBP มี
phosphorylated โดยใช้ 50 ไม่แพ้กัน ATP