Bioluminescence-based methods hold

Bioluminescence-based methods hold particular promise for imaging of PPIs in small living subjects (12, 13). Although both BRET and FRET detection schemes rely on the Förster resonance energy transfer mechanism (14), BRET systems provide enhanced sensitivity in living subjects, because autofluorescence, photobleaching, and tissue attenuation associated with fluorophore excitation are absent. Split luciferase complementation systems are advanced designs for in vivo investigation of PPIs. The luciferase fragments are nonfunctional in the absence of protein association; when the proteins interact, the luciferase regains its reporter function and generates a bioluminescent turn-on signal. However, BRET probes could potentially offer several advantages over split luciferase for interrogating PPIs in living subjects. First, the higher light output of BRET translates into enhanced sensitivity for small animal imaging; generally, split luciferases after complementation exhibit only 20–50% of the activity of corresponding intact luciferase (15). Second, BRET enables real-time two-color ratiometric measurements. Third, false-negative signals associated with misfolding of the reconstituted protein and false-positive signals arising from nonspecific association of the split fragments are significantly reduced for BRET relative to split protein reporters.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธีใช้ bioluminescence ถือสัญญาเฉพาะสำหรับภาพของ PPIs ในห้องนั่งเล่นเล็ก ๆ เรื่อง (12, 13) แม้ว่าแผนตรวจเบรตและไม่สบายใจพึ่งระบบกลไกโอนพลังงานของการสั่นพ้อง Förster (14), ระบบเบรตให้ความไวเพิ่มขึ้นในเรื่องของชีวิต เนื่องจากขาดงาน autofluorescence, photobleaching และเนื้อเยื่ออ่อนเกี่ยวข้องกับไฟฟ้ารุ่น fluorophore ระบบ complementation luciferase แบ่งขั้นออกแบบสำหรับการตรวจสอบ PPIs ในสัตว์ทดลอง ชิ้นส่วน luciferase เป็น nonfunctional อาจของโปรตีนสมาคม เมื่อโปรตีนการโต้ตอบ luciferase regains ฟังก์ชันของโปรแกรมรายงาน และสร้างสัญญาณ bioluminescent turn-on อย่างไรก็ตาม คลิปปากตะเข้เบรตได้อาจมีข้อดีหลายผ่านแยก luciferase สำหรับ interrogating PPIs ในเรื่องชีวิต แรก ผลผลิตไฟสูงของเบรตแปลเป็นภาพสัตว์ขนาดเล็ก เพิ่มความสำคัญ ทั่วไป แบ่ง luciferases หลังจาก complementation แสดงเพียง 20 – 50% ของการเกี่ยวข้อง luciferase เหมือนเดิม (15) สอง เบรตให้วัดแบบเรียลไทม์สองสี ratiometric สัญญาณที่สาม ลบเท็จเกี่ยวกับ misfolding ของโปรตีน reconstituted และสัญญาณบวกเท็จจากสมาคมชิ้นส่วนแยกเจาะจงจะลดสำหรับเบรตสัมพันธ์แยกโปรตีนผู้สื่อข่าว

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธีการที่ใช้ชีวิตเรืองแสงถือสัญญาโดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับการถ่ายภาพของ PPIs ในวิชาที่อยู่อาศัยขนาดเล็ก (12, 13) แม้ว่าทั้งสอง BRET ฉลุและแผนการตรวจสอบการพึ่งพาพลังงานเสียงสะท้อนกลไกการถ่ายโอนFörster (14) ระบบ BRET ให้เพิ่มความไวในเรื่องที่อยู่อาศัยเพราะ Autofluorescence, photobleaching และลดทอนเนื้อเยื่อที่เกี่ยวข้องกับการกระตุ้น fluorophore ขาด แยก luciferase ระบบ complementation การออกแบบขั้นสูงสำหรับการในการตรวจสอบร่างกายของ PPIs เศษ luciferase เป็น nonfunctional ในกรณีที่ไม่มีการเชื่อมโยงโปรตีน; เมื่อโปรตีนโต้ตอบ luciferase แหวนผู้สื่อข่าวฟังก์ชั่นและสร้างเรืองแสงเปิดสัญญาณ อย่างไรก็ตามฟิวส์ BRET อาจจะมีข้อได้เปรียบหลาย luciferase แยกสำหรับ PPIs สอบสวนในเรื่องที่อยู่อาศัย ก่อนที่ปริมาณแสงที่สูงขึ้นของ BRET แปลเป็​​นความไวที่เพิ่มขึ้นสำหรับการถ่ายภาพสัตว์ขนาดเล็ก โดยทั่วไป luciferases แยกหลังจากที่จัดแสดง complementation เพียง 20-50% ของกิจกรรมที่สอดคล้อง luciferase เหมือนเดิม (15) ประการที่สองช่วยให้ BRET เรียลไทม์ ratiometric สองสีวัด ประการที่สามการส่งสัญญาณที่ผิดพลาดเชิงลบที่เกี่ยวข้องกับ misfolding ของโปรตีนที่สร้างขึ้นและสัญญาณเท็จบวกที่เกิดขึ้นจากการเชื่อมโยงเชิญชมของชิ้นส่วนแยกจะลดลงอย่างมีนัยสำคัญสำหรับญาติที่จะแยก BRET ผู้สื่อข่าวโปรตีน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ไบโอลูมิเนสเซนตามวิธีการถือสัญญา โดยเฉพาะการ ppis ในวิชาชีวิตขนาดเล็ก ( 12 , 13 ) แม้ว่าทั้ง Bret และกลัดกลุ้มโครงร่างการพึ่งพา F ö rster แนนซ์การถ่ายโอนพลังงานกลไก ( 14 ) , เบรต ระบบให้ความไวเพิ่มขึ้นในสิ่งมีชีวิต เพราะ autofluorescence photobleaching , และเนื้อเยื่อที่เกี่ยวข้องกับการกระตุ้น fluorophore เป็นขาดระบบเอนไซม์ลูซิเฟอเรสแยกขั้นสูงการออกแบบสำหรับฤทธิ์ในการ ppis . มีเอนไซม์ลูซิเฟอเรส nonfunctional เศษในการขาดงานของสมาคมโปรตีน เมื่อโปรตีนโต้ตอบ , ลูซิเฟอเรส ฟื้นการทำงานของนักข่าวและสร้างสัญญาณเปิดไบโอลูมิเนสเซนต์ . อย่างไรก็ตามเบร็ทและอาจเสนอข้อดีหลายกว่าการแยกเอนไซม์ลูซิเฟอเรสเพื่อสอบสวน ppis ในชีวิตคน แรก สูง ความสว่างของ Bret แปลเป็นเพิ่มขึ้นความไวภาพสัตว์ขนาดเล็ก โดยทั่วไป แบ่ง luciferases หลังจากเอนไซม์แสดงเพียง 20 – 50% ของกิจกรรมที่สอดคล้องกันเหมือนเดิมเอนไซม์ลูซิเฟอเรส ( 15 ) ประการที่สองเบร็ทให้เรียลไทม์ ratiometric สอง - วัด สาม เป็นสัญญาณเชิงลบที่เกี่ยวข้องกับการสร้างโปรตีน และ misfolding สัญญาณ false-positive ที่เกิดจากสมาคมแยกเศษไม่จำเพาะจะลดลงอย่างมากสำหรับเบร็ทญาติแบ่งนักข่าวโปรตีน