An established experimental procedu

An established experimental procedure for analyzing the TAC values of Citrus fruits using the on-line HPLC-FRSD system was as follows: (1) Sample preparation. The solid dried material (0.250 mg–0.625 mg) or juice (2.00 mL) of Citrus sample was transferred into a 50 mL falcon tube added 80% methanol to 25 mL, mixed well and the tube was put into a shaker overnight at 25 °C. The extracts were centrifuged at 5000 g for 10 min on the next day. The supernatant was then filtered through a 0.22 μm organic membrane before analysis. (2) Elution of phenolic compounds using HPLC system. 25 μL of each sample was injected into the on-line HPLC-FRSD system. The positive chromatographic peaks of compounds in the samples were separated by Waters e2695 HPLC system with a Waters X-Terra MS C18 guard column (3.9 mm × 20 mm, 5 μm). Water/acetic acid (99.9:0.1, v/v) and HPLC-grade methanol were used as A and B mobile phases, respectively. Elution conditions was 0–5 min of 37% A and 63% B (isocratic elution) at a flow rate of 0.91 mL min−1 using a detector, Waters 2998 PAD detector array at 245 and 283 nm wavelengths simultaneously. The temperature of the column oven was maintained at 30 °C. (3) The bleaching of free racial in post-column system. The phenolic compounds eluted from the HPLC system were reacted with the free radical solutions in post-column system. For the on-line DPPH radical scavenging assay, the flow rate of DPPH free radical solution reagent (0.20 mM) was set at 0.80 mL min−1, and the induced bleaching was detected as a negative peak at 517 nm by the Waters 2489 UV/Visible detector. For the on-line ABTS radical scavenging assay, the flow rate of ABTS free radical solution reagent (an absorbance of 0.70 ± 0.02 AU at 400 nm) was set to be 0.80 mL min−1, and the induced bleaching was monitored as a negative peak at 400 nm by the Waters 2489 UV/Visible detector. The temperature of the on-line post-column system was maintained at 30 °C. The whole running time for each sample was 5 min. (4) Quantification of TAC values of the samples. The TAC values of samples were all quantified by reference l-ascorbic acid calibration curve and expressed as l-ascorbic acid equivalent antioxidant capacity (AAEAC) [μg mg−1 Dry Weight (DW) or μg mL−1 Fresh Weight (FW)].

The flow rates of mobile phases and free radical solutions ranged from 0.80 to 1.00 mL min−1, which is optimal for reducing the elution time and increasing stability of the on-line HPLC-FRSD system. In other report (Jeon et al., 2009), they used 0.1 mM DPPH and at a flow rate of 0.4 mL min−1 for post-column system. Compared with our results, their concentration and flow rate of DPPH are both lower than ours. However, the higher HPLC flow rates may dilute phenolic compounds. Therefore, the higher concentration of DPPH solution (0.2 mM) is needed to maintain the sensitivity of the system. A guard column instead of an analytic column was used in the on-line HPLC-FRSD system, which made the compound be fluted out from HPLC system very quickly and showed one merged chromatographic peak (representing the TAC of the mixture). Therefore, the total antioxidant capacity can be analyzed. Compared with other on-line HPLC-DPPH method or on-line HPLC-ABTS method, the use of the short guard column is a big difference and improvement.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ขั้นตอนการทดลองกำหนดขึ้นสำหรับการวิเคราะห์ค่ามาตรวัดของผลไม้โดยใช้ระบบ HPLC FRSD ง่ายดายมีดังนี้: (1) การเตรียมตัวอย่าง ของแข็งที่แห้งวัสดุ (0.250 มก.-0.625 มิลลิกรัม) หรือน้ำ (2.00 mL) ของตัวอย่างส้มถูกถ่ายโอนไปเป็น 50 mL เหยี่ยวหลอดเพิ่ม 80% เมทานอลไป 25 mL ผสมดี และหลอดได้ใส่ลงในเชคเกอร์แบบค้างคืนที่ 25 องศาเซลเซียส สารสกัดได้ centrifuged ที่ g 5000 สำหรับ 10 นาทีในวันถัดไป แล้วถูกกรอง supernatant ที่ผ่านเยื่ออินทรีย์ μm 0.22 ก่อนวิเคราะห์ (2) elution ม่อฮ่อมใช้ระบบ HPLC ΜL 25 ของแต่ละอย่างถูกฉีดเข้าไปในระบบ HPLC FRSD ง่ายดาย พีคส์ chromatographic บวกของสารตัวอย่างถูกคั่น ด้วยระบบ HPLC e2695 น้ำกับคอลัมน์ C18 MS X Terra น้ำยาม (3.9 มม. × 20 มม. 5 μm) ใช้กรดน้ำ/อะซิติก (99.9:0.1, v/v) และเมทานอล HPLC เกรดเป็น A และ B เคลื่อนเฟส ตามลำดับ Elution เงื่อนไขได้ 0 – 5 นาที 37% A และ 63% B (isocratic คิด elution) ในอัตราไหล min−1 0.91 มลใช้เครื่องตรวจจับ เรย์จับแผ่นน้ำ 2998 ที่ 283 และ 245 nm ความยาวคลื่นพร้อมกัน อุณหภูมิของเตาอบคอลัมน์ถูกรักษาไว้ที่ 30 องศาเซลเซียส (3) การฟอกสีของฟรีเชื้อชาติในคอลัมน์หลังระบบการ ม่อฮ่อม eluted จากระบบ HPLC ได้ปฏิกิริยาที่เกิดขึ้น ด้วยโซลูชั่นอนุมูลอิสระในระบบหลังคอลัมน์ สำหรับง่ายดาย DPPH รุนแรง scavenging assay อัตราการไหลของรีเอเจนต์โซลูชันอนุมูลอิสระ DPPH (0.20 mM) ถูกตั้งค่าใน min−1 มล 0.80 และฟอกสีอาจพบเป็นลบสูงสุดที่ 517 nm โดยเครื่องตรวจจับ UV น้ำ 2489/มอง เห็น สำหรับง่ายดายรเรียนรุนแรง scavenging assay อัตราการไหลของรเรียนฟรีรีเอเจนต์โซลูชันรุนแรง (การ absorbance 0.70 ± 0.02 AU ที่ 400 nm) ถูกตั้งให้ min−1 มล 0.80 และฟอกสีอาจถูกตรวจสอบเป็นค่าลบสูงสุดที่ 400 nm โดยเครื่องตรวจจับ UV น้ำ 2489/มอง เห็น มีรักษาอุณหภูมิของคอลัมน์หลังง่ายดายที่ 30 องศาเซลเซียส ทั้งหมดใช้เวลาอย่างละ 5 นาที (4) นับมาตรวัดค่าของตัวอย่างได้ ค่ามาตรวัดของตัวอย่างทั้งหมด quantified โดยเส้นโค้งเทียบกรดแอสคอร์บิค l อ้างอิง และแสดงฐานะความสามารถต้านอนุมูลอิสระเทียบเท่ากรดแอสคอร์บิค l (AAEAC) [μg mg−1 น้ำหนักแห้ง (DW) หรือ μg mL−1 น้ำหนักสด (FW)]อัตราไหลของเฟสเคลื่อนที่และโซลูชั่นอนุมูลอิสระอยู่ในช่วงจาก 1.03 ถึง 1.00 mL min−1 ซึ่งจะลดเวลา elution และเพิ่มเสถียรภาพของระบบ HPLC FRSD ง่ายดาย ในรายงานอื่น (เจิน et al., 2009), จะใช้ 0.1 มม. DPPH และ ที่อัตราการไหลของ min−1 0.4 mL สำหรับคอลัมน์หลังระบบการ เปรียบเทียบกับผลของเรา ความเข้มข้นและอัตราการไหลของ DPPH ได้ทั้งต่ำกว่าเรา อย่างไรก็ตาม กระแสราคาสูงของ HPLC สามารถ dilute ม่อฮ่อม ดังนั้น ความเข้มข้นสูงของ DPPH (0.2 mM) จะต้องรักษาความไวของระบบ คอลัมน์ยามแทนคอลัมน์การรวมยอดถูกใช้ในระบบ HPLC FRSD ง่ายดาย ซึ่งทำให้สารประกอบมี fluted ออกจากระบบ HPLC ได้อย่างรวดเร็ว และแสดงให้เห็นหนึ่งผสาน chromatographic สูงสุด (แสดงมาตรวัดของผสม) ดังนั้น สารต้านอนุมูลอิสระรวมกำลังการผลิตสามารถนำมาวิเคราะห์ เปรียบเทียบกับวิธี HPLC DPPH ง่ายดายหรือง่ายดายรเรียน HPLC วิธีอื่น ๆ การใช้คอลัมน์ยามสั้นเป็นความแตกต่างใหญ่และปรับปรุง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ที่จัดตั้งขึ้นในการทดลองขั้นตอนสำหรับการวิเคราะห์ค่า TAC ของผลไม้เช่นมะนาวโดยใช้ระบบ HPLC-FRSD ที่สร้างขึ้นดังต่อไปนี้ (1) การจัดทำตัวอย่าง วัสดุที่เป็นของแข็งแห้ง (0.250 มิลลิกรัม-0.625 มก.) หรือน้ำผลไม้ (2.00 มิลลิลิตร) ของกลุ่มตัวอย่างส้มถูกย้ายลงในหลอดเหยี่ยว 50 มลเพิ่ม 80% เมทานอล 25 มิลลิลิตรผสมดีและหลอดถูกใส่ลงไปในเครื่องปั่นค้างคืนที่ 25 ° C. สารสกัดถูกหมุนเหวี่ยงที่ 5000 กรัมเป็นเวลา 10 นาทีในวันถัดไป ใสถูกกรองแล้วผ่านที่ 0.22 ไมโครเมตรเยื่ออินทรีย์ก่อนที่จะวิเคราะห์ (2) ชะสารประกอบฟีนอลที่ใช้ระบบ HPLC 25 ไมโครลิตรของแต่ละตัวอย่างถูกฉีดเข้าไปใน HPLC-FRSD ระบบ On-line ยอดโครมาบวกของสารในตัวอย่างถูกแยกออกโดยระบบ HPLC น้ำ e2695 กับคอลัมน์น้ำ X-Terra MS C18 ยาม (3.9 มิลลิเมตร× 20 มิลลิเมตร, 5 ไมโครเมตร) น้ำ / กรดอะซิติก (99.9: 0.1, v / v) และ HPLC ชั้นเมทานอลถูกนำมาใช้เป็นขั้นตอนและมือถือ B ตามลำดับ เงื่อนไขชะเป็น 0-5 นาที 37% และ 63% B (ชะ Isocratic) ที่อัตราการไหล 0.91 มิลลิลิตรต่อนาที-1 โดยใช้เครื่องตรวจจับน้ำ 2998 อาเรย์ตรวจจับพันธมิตรฯ ที่ 245 และ 283 นาโนเมตรความยาวคลื่นพร้อมกัน อุณหภูมิของเตาอบคอลัมน์ที่ได้รับการเก็บรักษาไว้ที่ 30 ° C (3) การฟอกสีของฟรีเชื้อชาติในระบบโพสต์คอลัมน์ สารประกอบฟีนอชะจากระบบ HPLC ได้รับการตอบสนองด้วยการแก้ปัญหาอนุมูลอิสระในระบบโพสต์คอลัมน์ สำหรับในบรรทัด DPPH ไล่รุนแรงทดสอบอัตราการไหลของ DPPH ฟรีน้ำยาแก้ปัญหาความรุนแรง (0.20 มิลลิ) ตั้งอยู่ที่ 0.80 มิลลิลิตรต่อนาที-1, และฟอกขาวเกิดถูกตรวจพบว่าเป็นยอดติดลบที่ 517 นาโนเมตรโดยน้ำ 2489 รังสียูวี / เครื่องตรวจจับที่มองเห็นได้ สำหรับในบรรทัด ABTS ไล่รุนแรงทดสอบอัตราการไหลของ ABTS ฟรีน้ำยาแก้ปัญหาความรุนแรง (ดูดกลืนแสง 0.70 ± 0.02 เหรียญออสเตรเลียที่ 400 นาโนเมตร) ถูกกำหนดให้เป็น 0.80 มิลลิลิตรต่อนาที-1, และฟอกขาวที่เกิดคือการตรวจสอบเป็นเชิงลบ จุดสูงสุดที่ 400 นาโนเมตรโดยน้ำ 2489 UV / เครื่องตรวจจับที่มองเห็นได้ อุณหภูมิของสายในระบบโพสต์คอลัมน์ที่ได้รับการเก็บรักษาไว้ที่ 30 ° C เวลาทำงานทั้งหมดสำหรับแต่ละตัวอย่างเป็นเวลา 5 นาที (4) ปริมาณของค่า TAC ของกลุ่มตัวอย่าง ค่า TAC ของกลุ่มตัวอย่างถูกวัดโดยการอ้างอิง L-ซีเส้นโค้งการสอบเทียบกรดและแสดงเป็น L-ascorbic acid สารต้านอนุมูลอิสระเทียบเท่า (AAEAC) [ไมโครกรัมต่อมิลลิกรัม-1 แห้งน้ำหนัก (DW) หรือไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร-1 สดน้ำหนัก (FW)] . อัตราการไหลของขั้นตอนมือถือและโซลูชั่นอนุมูลอิสระอยู่ในช่วง 0.80-1.00 มิลลิลิตรนาที-1 ซึ่งเป็นที่เหมาะสมสำหรับการลดเวลาในการชะและเพิ่มความมั่นคงของระบบ HPLC-FRSD ออนไลน์ ในรายงานอื่น ๆ (Jeon et al., 2009) พวกเขาใช้ 0.1 มิลลิ DPPH และที่อัตราการไหล 0.4 มิลลิลิตรต่อนาที-1 สำหรับระบบโพสต์คอลัมน์ เมื่อเทียบกับอัตราผลความเข้มข้นของพวกเขาของเราและการไหลของ DPPH มีทั้งต่ำกว่าของเรา แต่ที่สูงกว่าอัตราการไหล HPLC อาจเจือจางสารฟีนอล ดังนั้นความเข้มข้นที่สูงขึ้นของการแก้ปัญหา DPPH (0.2 มิลลิ) เป็นสิ่งจำเป็นเพื่อรักษาความไวของระบบ คอลัมน์ปกป้องแทนคอลัมน์วิเคราะห์ถูกนำมาใช้ในระบบ On-line HPLC-FRSD ซึ่งทำให้สารประกอบจะแถวออกจากระบบ HPLC ได้อย่างรวดเร็วและพบว่าหนึ่งรวมยอดโครมา (แทน TAC ผสม) ดังนั้นสารต้านอนุมูลอิสระทั้งหมดสามารถวิเคราะห์ได้ เมื่อเทียบกับคนอื่น ๆ วิธี HPLC-DPPH ออนไลน์หรือบนบรรทัดวิธี HPLC-ABTS ใช้คอลัมน์ปกป้องสั้นความแตกต่างใหญ่และการปรับปรุง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ขึ้น ทดลองกระบวนการวิเคราะห์และคุณค่าของผลไม้ส้มใช้ระบบ hplc-frsd ออนไลน์คือ ( 1 ) การเตรียมการตัวอย่าง ของแข็งวัสดุที่แห้ง ( 0.250 มิลลิกรัม ( 0.625 mg ) หรือน้ำ ( 200 มล. ) ของส้มตัวอย่างถูกถ่ายโอนลงในหลอด 50 มิลลิลิตร ฟอลคอนเพิ่ม 80% เมทานอล 25 มิลลิลิตร ผสมและหลอดใส่ไว้ในเครื่องปั่นค้างคืนที่ 25 ° Cสารสกัดที่เป็นระดับที่ 5 , 000 กรัม เป็นเวลา 10 นาที ในวันถัดไป และน่านถูกกรองผ่านเมมเบรนอินทรีย์ 0.22 μ M ก่อนการวิเคราะห์ ( 2 ) ชนิดของสารประกอบฟีนอลโดยใช้ระบบ HPLC . 25 μ L ของแต่ละตัวอย่างถูกฉีดเข้าไปในระบบ hplc-frsd ทางออนไลน์บวก และยอดของสารประกอบในตัวอย่างโดยแยกระบบ HPLC e2695 น้ำกับน้ำ x-terra MS c18 ยามคอลัมน์ ( 3.9 มม. × 20 มม. , 5 μ M ) น้ำ / กรดน้ำส้ม ( 99.9:0.1 , v / v ) และเมทานอลเกรด HPLC พบว่า A และ B เฟสเคลื่อนที่ ตามลำดับ เงื่อนไข ( 0 – 5 นาที 37 % และ 63 % B ( Isocratic ( ) ที่อัตราการไหล ของ 091 มิลลิลิตรต่อนาที− 1 ใช้เครื่อง , เครื่องตรวจจับน้ำ 2998 แผ่นอาร์เรย์ที่ 245 และ 283 nm ความยาวคลื่นที่พร้อมกัน อุณหภูมิของคอลัมน์เตาอบไว้ที่ 30 ° C ( 3 ) ฟอกสีของฟรีทางเชื้อชาติในระบบคอลัมน์ โพสต์ สารประกอบฟีนอลิก ตัวอย่างจากระบบ HPLC มีปฏิกิริยากับโซลูชั่นอนุมูลอิสระในระบบคอลัมน์ โพสต์ สำหรับออนไลน์ dpph เป็นตัวเร่งปฏิกิริยาโดยอัตราการไหลของสารละลายที่ใช้ dpph อนุมูลอิสระ ( 0.20 มม. ) เท่ากับ 0.80 − 1 มิลลิลิตรต่อนาที และการฟอกสีฟันที่ตรวจพบเป็นยอดติดลบ 517 nm โดยน้ำ 2489 UV / มองเห็นเครื่องตรวจจับ สำหรับออนไลน์ Abbr เป็นตัวเร่งปฏิกิริยาโดยอัตราการไหลของสารละลายรีเอเจนต์ Abbr อนุมูลอิสระ ( การดูดกลืนแสงของ 0.70 ± 0.02 AU ที่ 400 nm ) เป็น 80 มิลลิลิตรต่อนาที− 1และการฟอก การเป็นยอดติดลบ 400 nm โดยน้ำ 2489 UV / มองเห็นเครื่องตรวจจับ อุณหภูมิของคอลัมน์โพสต์ออนไลน์ที่ระบบไว้ที่ 30 องศา ทั้งวิ่งเวลาสำหรับแต่ละตัวอย่าง 5 นาที ( 4 ) ปริมาณของค่าแทคของตัวอย่างยุทธวิธีค่าของจำนวนทั้งหมด quantified โดยอ้างอิง L-Ascorbic Acid รูปโค้งและแสดงเป็น L-Ascorbic Acid ความจุเทียบเท่าสารต้านอนุมูลอิสระ ( aaeac ) [ μ G − 1 มิลลิกรัมต่อน้ำหนักแห้ง ( แห้ง ) หรือμกรัมต่อน้ำหนักสด− 1 ( FW ) ] .

อัตราการไหลของเฟสเคลื่อนที่อยู่ระหว่าง 0.80 และโซลูชั่นฟรีเส้นรัศมี 1 มิลลิลิตรต่อนาที− 1ซึ่งเป็นที่ดีที่สุดสำหรับการใช้เวลาและการเพิ่มเสถียรภาพของระบบ hplc-frsd ทางออนไลน์ ในรายงานอื่น ๆ ( จอน et al . , 2009 ) , พวกเขาใช้ dpph 0.1 มิลลิเมตร และที่อัตราการไหล 1 − 0.4 มิลลิลิตรต่อนาที ระบบคอลัมน์โพสต์ เมื่อเปรียบเทียบกับผลของความเข้มข้นและอัตราการไหลของ dpph มีทั้งต่ำกว่าเรา อย่างไรก็ตาม อัตราการไหลที่สูงและอาจเจือจางสารประกอบฟีนอล . ดังนั้นความเข้มข้นของสารละลาย dpph ( 0.2 มม. ) เป็นสิ่งจำเป็นเพื่อรักษาความไวของระบบ การ์ดคอลัมน์แทนคอลัมน์วิเคราะห์ที่ใช้ในระบบ hplc-frsd ออนไลน์ซึ่งทำให้บริเวณที่เป็นร่องจาก HPLC ระบบอย่างรวดเร็วและพบหนึ่งรวมสูงสุดทางแทนแทคของส่วนผสม ) ดังนั้นความจุของสารต้านอนุมูลอิสระทั้งหมดที่สามารถวิเคราะห์ เมื่อเทียบกับอื่น ๆออนไลน์ hplc-dpph วิธีการหรือวิธีการ hplc-abts ออนไลน์ การใช้งานสั้นยามคอลัมน์คือความแตกต่าง และการปรับปรุง