PCR amplification and sequencing. T

PCR amplification and sequencing. The partial DNA fragments of bacterial 16S rDNA genes were amplified by PCR using a forward primer F27 (CCGGATCCAGAGTTGATCCTGGTCAGAACGAACGCT) and a reverse primer R1522 (CGGGATCCTACGGCTACCTTGTTACGACTTCACCCC),which were designed to amplify 16S rDNA fragment from the isolated bacterium (Sangon Company, Shanghai,China). The PCR product was cooled and analyzed by electrophoresis in 1% agarose gel. The desired band was excised with a sterile scalpel, eluted in sterile water overnight at 4 C, and then sent to Sangon Company for sequencing. BLAST searches were performed in public data libraries (GenBank, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/) to determine the closest known relatives of the partial 16SrDNA gene sequence obtained. Sequences with 96% or higher identity were considered to represent the same species.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ขยาย PCR และลำดับ ชิ้นส่วนดีเอ็นเอบางส่วนของยีนแบคทีเรีย 16S rDNA ถูกขยาย โดย PCR โดยใช้รองพื้นไปข้างหน้า F27 (CCGGATCCAGAGTTGATCCTGGTCAGAACGAACGCT) และพื้นกลับ R1522 (CGGGATCCTACGGCTACCTTGTTACGACTTCACCCC), ซึ่งถูกออกแบบมาเพื่อขยายส่วน 16S rDNA จากแยกแบคทีเรีย (บริษัท Sangon เซี่ยงไฮ้ จีน) ผลิตภัณฑ์ PCR ได้ระบายความร้อนด้วย และวิเคราะห์ โดย electrophoresis ในเจ 1% agarose วงต้อง excised กับ scalpel กอซ eluted ใส่น้ำค้างคืนที่ 4 C และจากนั้น ส่งไป บริษัท Sangon สำหรับลำดับ ค้นหาระเบิดได้ดำเนินการในไลบรารีข้อมูลสาธารณะ (GenBank, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/) เพื่อกำหนดญาติรู้จักสุดลำดับยีน 16SrDNA บางส่วนได้ ลำดับ 96% หรือตัวสูงได้ถือเป็นตัวแทนของชนิดเดียวกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ขยาย PCR และการเรียงลำดับ ดีเอ็นเอบางส่วนของยีนของแบคทีเรีย 16S rDNA ถูกขยายโดยวิธี PCR โดยใช้ไพรเมอร์ไปข้างหน้า F27 (CCGGATCCAGAGTTGATCCTGGTCAGAACGAACGCT) และไพรเมอร์กลับ R1522 (CGGGATCCTACGGCTACCTTGTTACGACTTCACCCC) ซึ่งถูกออกแบบมาเพื่อขยายส่วน 16S rDNA จากแบคทีเรียที่แยก (Sangon บริษัท เซี่ยงไฮ้, จีน) . ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกระบายความร้อนและวิเคราะห์โดย electrophoresis ใน 1% agarose เจล วงดนตรีที่ต้องการถูกตัดด้วยมีดผ่าตัดหมันชะในชั่วข้ามคืนน้ำหมันที่ 4 องศาเซลเซียสและส่งไปให้กับ บริษัท Sangon สำหรับลำดับ ค้นหาระเบิดได้ดำเนินการในห้องสมุดข้อมูลสาธารณะ (GenBank, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/) เพื่อตรวจสอบที่ใกล้เคียงที่สุดที่รู้จักกันญาติของยีน 16SrDNA บางส่วนที่ได้รับ ลำดับ 96% หรือบัตรประจำตัวที่สูงขึ้นได้รับการพิจารณาให้เป็นตัวแทนของสายพันธุ์เดียวกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ขยายการศึกษาของ บางส่วนของชิ้นส่วนดีเอ็นเอของยีน 16S rDNA ด้วยวิธี PCR โดยใช้ไพรเมอร์ของ f27 ไปข้างหน้าและย้อนกลับ ccggatccagagttgatcctggtcagaacgaacgct ) รองพื้น r1522 ( cgggatcctacggctaccttgttacgacttcacccc ) ซึ่งถูกออกแบบมาเพื่อขยายส่วนแยกแบคทีเรียจาก 16S rDNA ( บริษัท แสงอ่อนเซี่ยงไฮ้ , จีน )ผลิตภัณฑ์ PCR คือเย็นและวิเคราะห์โดยวิธีอิเล็กโทรโฟรีซีสใน 1% เจล . วงที่ต้องการตัดด้วยมีดผ่าตัดหมัน , ตัวอย่างน้ำหมันค้างคืนที่ 4  C และส่งไปยัง บริษัท แสงอ่อน สำหรับของ ค้นหาระเบิดได้ในข้อมูลห้องสมุดสาธารณะ ( พบ http://www.ncbi.nlm.nih , .14 / ระเบิด / ) หาใกล้ญาติของบางส่วน 16srdna ลำดับยีนได้ ลำดับ 96 % หรือสูงกว่าตนถือว่าเป็นตัวแทนของชนิดเดียวกัน