Quantitative RT-PCRRNA was isolated

Quantitative RT-PCR
RNA was isolated from pooled adult (n = 3) and larval (n = 5)
honeybee samples using an RNeasy mini Kit (Qiagen, Germany)
following the manufacturer’s instructions. First-strand cDNA were
synthesized from 2 lg of total RNA using a SuperScript cDNA synthesis
III Kit (Invitrogen, CA) with dT primers according to the
manufacturer’s instructions. In order to evaluate the expression
of immune-related genes, the following primers were used. The sequence
of the Abaecin forward primer was (50-GGT AGT GAT ATT
TAT CTT CGC-30) and Abaecin reverse was (50-TTG AGG CCA TTT
AAT TTT CGG-30). The sequence of the Defensin1 forward primer
was (50-GTT GAG GAT GAA TTC GAG CC-30) and Defensin1 reverse
was (50-TTA ACC GAA ACG TTT GTC CC-30). The sequence for the
Hymenoptaecin forward primer was (50-ATA TCC CGA CTC GTT
TCC GA-30) and Hymenoptaecin reverse was (50-TCC CAA ACT
CGA ATC CTG CA-30). The sequence for the Rps5 forward primer
was (50-TTT CCC ATT ATT TCT ACC ATG CAT-30) and Rps5 reverse
was (50-CTT TAC AAG ATT ATA TTG CCG TTA-30). Each PCR reaction
contained 12.5 ll of 2  SYBR Premix Ex Taq II (Takara, Japan), 1 ll of cDNA template, and the gene-specific primer sets at a final concentration
of 0.1 lM. Ct values obtained for the Rps5 reactions
were used to standardize the Ct numbers for other immune-related
genes from the same samples. Melt curves obtained at the end of
the amplification confirmed that each primer pair produced a single
product with a single Tm. The t-tests were performed for the
analyses of relative expressions. A P value

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เชิงปริมาณ RT-PCRอาร์เอ็นเอแยกต่างหากจากผู้ใหญ่รวม (n = 3) และ larval (n = 5)ตัวอย่างน้ำผึ้งอิลอกใช้มินิ RNeasy ชุด (Qiagen เยอรมนี)ตามคำแนะนำของผู้ผลิต สแตรนด์แรก cDNA ถูกสังเคราะห์จาก lg 2 ของอาร์เอ็นเอทั้งหมดที่ใช้การสังเคราะห์ cDNA ตัวยกชุด III (Invitrogen, CA) กับไพรเมอร์ dT ตามคำแนะนำของผู้ผลิต การประเมินนิพจน์ของยีนที่เกี่ยวข้องกับภูมิคุ้มกัน มีใช้ไพรเมอร์ดังต่อไปนี้ ลำดับที่ของ Abaecin พื้นไปข้างหน้าได้ (50-GGT AGT แกทพ้อยท์ ATTTAT CTT CGC-30) และย้อนกลับ Abaecin (50-TTG AGG CCA ทีAAT ที CGG-30) ลำดับที่พื้นไปข้างหน้า Defensin1ถูก (50 GTT ปิดปากแกทพ้อยท์เฒ่าทีทีซีจำกัดปิดปาก CC-30) และ Defensin1 กลับถูก (50 TTA บัญชีเฒ่าจีบที GTC CC-30) ลำดับในการHymenoptaecin รองพื้นไปข้างหน้าได้ (50-ATA TCC CGA CTC GTTTCC GA-30) และย้อนกลับ Hymenoptaecin (50-TCC ซีเอเอโฮบัญญัติCGA ATC CTG CA-30) ลำดับสำหรับพื้นไปข้างหน้า Rps5ถูก (50 ทีซีซีซี ATT ATT TCT บัญชี ATG CAT-30) และ Rps5 กลับถูก (50-CTT มาตรวัดเอเอจี ATT ATA TTG CCG TTA-30) แต่ละปฏิกิริยา PCRอยู่ 12.5 จะ Premix SYBR 2 อดีต Taq II (Takara ญี่ปุ่น), 1 จะของ cDNA ต้น และรองพื้นเฉพาะยีนชุดที่เข้มข้นสุดท้าย0.1 ของ lM ค่า ct สำหรับปฏิกิริยา Rps5ใช้มาตรฐานหมายเลข Ct สำหรับอื่น ๆ ภูมิคุ้มกันที่เกี่ยวข้องยีนจากตัวอย่างเดียวกัน ละลายได้ที่จุดสิ้นสุดของเส้นโค้งขยายที่ยืนยันว่า แต่ละคู่รองพื้นผลิตเดียวผลิตภัณฑ์กับ Tm เดียว ดำเนินการทดสอบ tวิเคราะห์ของนิพจน์แบบย่อ ค่า P < 0.05 ถือเป็นสำคัญทางสถิติ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ปริมาณ RT-PCR
RNA ที่แยกได้จากผู้ใหญ่ pooled (n = 3) และตัวอ่อน (n = 5)
ตัวอย่างผึ้งโดยใช้ชุด RNeasy มินิ (Qiagen, เยอรมนี)
ตามคำแนะนำของผู้ผลิต cDNA แรกสาระถูก
สังเคราะห์จาก 2 จีอาร์เอ็นเอของทั้งหมดโดยใช้ยก cDNA สังเคราะห์
III Kit (Invitrogen, CA) กับไพร dT ตาม
คำแนะนำของผู้ผลิต เพื่อที่จะประเมินผลการแสดงออก
ของยีนที่เกี่ยวข้องกับระบบภูมิคุ้มกัน, ไพรเมอร์ต่อไปนี้ถูกนำมาใช้ ลำดับ
ของการศึกษาไปข้างหน้า Abaecin เป็น (50 GGT AGT GAT ATT
ททท CTT CGC-30) และ Abaecin กลับเป็น (50 TTG AGG CCA TTT
TTT AAT CGG-30) ลำดับของการศึกษาไปข้างหน้า Defensin1
เป็น (50 GTT GAG GAT GAA TTC GAG CC-30) และ Defensin1 กลับ
เป็น (50 TTA แม็ก GAA ACG TTT GTC CC-30) ลำดับ
ประถมศึกษาไปข้างหน้า Hymenoptaecin เป็น (50-ATA TCC CGA CTC GTT
TCC GA-30) และ Hymenoptaecin กลับเป็น (50 บริษัท ทีซีซีซีเอ ACT
CGA ATC CTG CA-30) ลำดับประถมศึกษาไปข้างหน้า Rps5
เป็น (50-TTT CCC ATT ATT TCT ACC ATG CAT-30) และ Rps5 กลับ
เป็น (50-CTT TAC AAG ATT ATA TTG CCG TTA-30) แต่ละปฏิกิริยา PCR
ที่มี 12.5 LL 2? SYBR พรีมิกซ์ Ex Taq II (Takara, ญี่ปุ่น), 1 LL ของแม่ยีนและยีนเฉพาะชุดไพรเมอร์ที่มีความเข้มข้นสุดท้าย
ที่ 0.1 LM ค่ากะรัตได้รับสำหรับปฏิกิริยา Rps5
ถูกนำมาใช้เพื่อให้เป็นมาตรฐานหมายเลขกะรัตสำหรับภูมิคุ้มกันอื่น ๆ ที่เกี่ยวข้อง
ยีนจากตัวอย่างเดียวกัน ละลายเส้นโค้งที่ได้รับในตอนท้ายของ
การขยายการยืนยันว่าแต่ละคู่ไพรเมอร์ที่ผลิตเดียว
ผลิตภัณฑ์ที่มีเพียงหนึ่งเดียว Tm การทดสอบ t-ได้ดำเนินการสำหรับ
การวิเคราะห์การแสดงออกของญาติ ค่า AP <0.05 ได้รับการพิจารณา
อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธีเชิงปริมาณ RNA
ถูกแยกจากพูผู้ใหญ่ ( n = 3 ) และ L ( n = 5 )
ผึ้งตัวอย่างโดยใช้ชุดมินิ rneasy ( QIAGEN , เยอรมนี )
ตามคำแนะนำของผู้ผลิต แรกที่สังเคราะห์จากยีนมีสาระ
2 LG ของอาร์เอ็นเอทั้งหมดใช้ตัวยกยีนสังเคราะห์
3 ชุด ( Invitrogen , CA ) ด้วยไพรเมอร์
DT ตามคำแนะนำของผู้ผลิตเพื่อศึกษาการแสดงออกของยีนที่เกี่ยวข้องกับระบบภูมิคุ้มกัน
, ไพรเมอร์ต่อไปนี้มาใช้ ลำดับ
ของ abaecin forward primer ( 50-ggt agt GAT ATT
ททท. ทั่วโลก cgc-30 ) และ abaecin ย้อนกลับ ( 50-ttg agg TTT
TTT cgg-30 CCA ครั้ง ) การเรียงลำดับของ defensin1 ส่งต่อรองพื้น
( 50-gtt มุขรับมุข GAA TTC cc-30 ) และ defensin1 ย้อนกลับ
( 50-tta บัญชี GAA ACG TTT GTC cc-30 )ลําดับสําหรับ
hymenoptaecin forward primer ( 50-ata TCC CGA CTC gtt
ทีซีซี ga-30 ) และ hymenoptaecin ย้อนกลับ ( 50-tcc caa พระราชบัญญัติ
CGA ATC CTG ca-30 ) ลำดับสำหรับ rps5 ส่งต่อรองพื้น
( 50-ttt CCC att att TCT บัญชี ATG cat-30 ) และ rps5 ย้อนกลับ
( 50-ctt TAC AAG ATT ATA ทีทีจี ccg tta-30 ) แต่ละเทคนิคปฏิกิริยา
อยู่ 12.5 จะ 2  SYBR รวมอดีตได้ดี II ( Takara , ญี่ปุ่น )1 จะของแม่แบบดีเอ็นเอและยีนที่เฉพาะเจาะจงเช่นชุดที่
ความเข้มข้นสุดท้าย 0.1 ไมโครเมตร CT ได้สำหรับปฏิกิริยา rps5
ใช้มาตรฐานอื่น ๆที่เกี่ยวข้องกับระบบภูมิคุ้มกัน
CT หมายเลขยีนจากตัวอย่างเดียวกัน ละลายได้ในตอนท้ายของเส้นโค้ง
( ยืนยันว่า แต่ละคู่ไพรเมอร์ที่ผลิตผลิตภัณฑ์เดียว
กับบริษัทเดียว จำนวนที่แสดงสำหรับ