DNA was extracted from fungal mycel

DNA was extracted from fungal mycelia, grown on PD medium at
32
C, using an improved CTAB method (Zhang et al., 2006). Mating
types
A1 and A2 were identified by the DNA fragments amplified


using primer pairs A1-F/A1-R and A2-F/A2-R respectively, the
design
of which was based on the HD1 and HD2 gene sequences
(HQ343318
and JX15875) of the A1 and A2 alleles in the A mating
type
locus of V. volvacea, strain V23. Mating types A3 and A4 were
identified
by the DNA fragments amplified using primer pairs A3F/A3-R


and A4-F/A4-R respectively, designed according to the HD1
and
HD2 gene sequences (JN578700 and JN578701) of the A3 and A4
alleles
in the A mating type locus of strain PY (Table 1). PCR reaction
mixtures
contained: ddH
◦
O (18.25 L); 2.5 L 10 × buffer solution;


2.0 L dNTP (each 2.5 mmol L
2
−1
); primer, 1 L (10 mol L
);
0.25
L Taq DNA polymerase (5 U L
−1
), 1 L DNA template. Amplification


conditions were: 94
◦
C for 5 mins; 35 cycles of 94
C for
30
s, 51-53
◦
C (see Table 1) for 30 s and 72
C for 1 min; followed by
a
final extension at 72
◦
◦
C for 10 min. PCR products were separated
by
electrophoresis on 1.5% sepharose.
◦
−1

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ดีเอ็นเอที่สกัดจากเชื้อรา mycelia ปลูกในกลาง PD ที่32C โดยใช้วิธี CTAB ดีขึ้น (Zhang et al., 2006) ผสมพันธุ์ชนิด A1 และ A2 มีบางส่วนของ identified โดยดีเอ็นเอ amplifiedใช้รองพื้นจับคู่ A1-F/A1-R และ A2-F/A2-R ตามลำดับ การการออกแบบ ซึ่งเป็นไปตามลำดับยีน HD1 และ HD2(HQ343318 และ JX15875) ของ alleles A1 และ A2 ในการผสมพันธุ์ Aชนิด โลกัสโพลของ V. volvacea สายพันธุ์ V23 ชนิดติดสัด A3 และ A4 ได้identified โดยดีเอ็นเอบางส่วนของ amplified ที่ใช้รองพื้นคู่ A3F/A3-RA4-F/A4-R ตามลำดับ ตกแต่งตามแบบ HD1และ HD2 ลำดับการยีน (JN578700 และ JN578701) A3 และ A4alleles ในแบบ A ศึกชนิดโลกัสโพลของต้องใช้ PY (ตารางที่ 1) ปฏิกิริยา PCRน้ำยาผสม อยู่: ddH◦O (18.25 L); แก้ปัญหาบัฟเฟอร์ 10 × 2.5 L2.0 L dNTP (ละ 2.5 mmol L2−1); รองพื้น 1 L (10 โมล L);0.25 L Taq DNA พอลิเมอเรส (5 U L−1), 1 L ดีเอ็นเอแม่แบบ Amplificationมีเงื่อนไข: 94◦C สำหรับ 5 นาที รอบ 35 ของ 94C สำหรับ30 s, 51-53◦C (ดูตารางที่ 1) สำหรับ 30 s และ 72ใน 1 นาที C ตามด้วยการ นามสกุล final ที่ 72◦◦C 10 นาทีผลิตภัณฑ์ PCR ถูกคั่นโดย electrophoresis ใน sepharose 1.5%◦−1

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ดีเอ็นเอที่สกัดจากเส้นใยเชื้อราปลูกที่สื่อ PD ที่
32
C โดยใช้การปรับปรุงวิธี CTAB (Zhang et al., 2006) ผสมพันธุ์
ประเภท
A1 และ A2 เป็นสายการระบุ ed โดยดีเอ็นเอเอ็ด Ampli Fi โดยใช้คู่ไพร A1-F / A1-R และ A2-F / A2-R ตามลำดับการออกแบบที่มีพื้นฐานอยู่บน HD1 และ HD2 ลำดับยีน(HQ343318 และ JX15875) ของอัลลีล A1 และ A2 ในการผสมพันธุ์ประเภทสถานทีของ V. volvacea ความเครียด V23 ผสมพันธุ์ประเภท A3 และ A4 เป็นสายการระบุ ed โดยดีเอ็นเอ Ampli เอ็ด Fi โดยใช้คู่ไพร A3F / A3-R และ A4-F / A4-R ตามลำดับการออกแบบตาม HD1 และHD2 ลำดับยีน (JN578700 และ JN578701) ของ A3 และ A4 อัลลีลในสถานทีพิมพ์ผสมพันธุ์ของสายพันธุ์ PY (ตารางที่ 1) PCR ปฏิกิริยาผสมอยู่: DDH ◦ O (18.25 L?); 2.5 L 10 สารละลายบัฟเฟอร์×? ? 2.0 L dNTP (แต่ละ 2.5 mmol L 2 -1 ); ไพรเมอร์, 1 ลิตร (10 mol L? ); 0.25 ? L Taq ดีเอ็นเอโพลิเมอร์ (? 5 U L -1 ?) 1 แม่แบบดีเอ็นเอ L ไอออนบวก Fi Ampli เงื่อนไขที่: 94 ◦ C เป็นเวลา 5 นาที; 35 รอบจาก 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา30 วินาที, 51-53 ◦ C (ดูตารางที่ 1) เป็นเวลา 30 และ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาที; ตามมาด้วยการขยาย NAL ในสายที่ 72 ◦ ◦ C เป็นเวลา 10 นาที ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ถูกแยกออกจากกระแสไฟฟ้า 1.5% Sepharose. ◦ -1

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ดีเอ็นเอที่สกัดได้จากเชื้อราที่เหมาะสมต่อการปลูก PD ปานกลาง

ที่ 32 C โดยใช้วิธีการปรับปรุง ctab ( Zhang et al . , 2006 ) ผสมพันธุ์

แบบ A1 และ A2 เป็น identi จึงเอ็ดโดยชิ้นส่วนดีเอ็นเอ ampli จึงเอ็ด


ใช้ไพรเมอร์คู่และ a1-f / a1-r a2-f / a2-r ตามลำดับ

ซึ่งได้รับการออกแบบบนพื้นฐานของ HD1 HD2 ยีนและลำดับ ( hq343318

และ jx15875 ) ของอัลลีล A1 และ A2 ในเป็น ผสมพันธุ์

ความเชื่อประเภท V .volvacea v23 , ความเครียด การผสมพันธุ์และประเภท A3 A4 อยู่

identi จึงเอ็ดโดยเอ็ดชิ้นส่วนดีเอ็นเอ ampli จึงใช้ไพรเมอร์คู่ a3f / a3-r


และ a4-f / a4-r ตามลำดับ ออกแบบไปตาม HD1

HD2 ยีนและลำดับ ( jn578700 และ jn578701 ) A3 A4 อัลลีลและ

ในคู่ของตน ประเภท สายพันธุ์ py ( ตารางที่ 1 ) เพื่อตรวจหาสาร

ที่อยู่ : ddh ◦
o
( 18.25  L ) ; 2.5  L 10 ×สารละลายบัฟเฟอร์ ;


20  ผม dntp ละ 2.5 mmol l
2
− 1
) ; ไพรเมอร์ 1  L ( 10  โมล L ;
3

)  ผมแท็ก DNA polymerase ( 5 U  L
− 1
) 1  L ดีเอ็นเอแม่แบบ ampli จึงบวก




◦เงื่อนไข : 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที ; 35 รอบ 94
C
30
s

51-53 ◦ C ( ดูตารางที่ 1 ) สำหรับ 30 และ 72
C เป็นเวลา 1 นาที ตามด้วย

จึงเป็นส่วนขยายที่ 72 ◦

ร ◦
C 10 นาทีซึ่งผลิตภัณฑ์จากกัน

โดยวิธีที่ 1.5% เกี่ยวข้อง .

◦− 1