Purification of antimicrobial pepti

Purification of antimicrobial peptide from the mesoglea of a scyphoid jellyfish Aurelia aurita. Scyphoid jellyfish A. aurita were collected at a coastal zone (the island Sredniy, White Sea, Russia). Mesogleya pieces were excised and placed for extraction into 5% acetic acid. The obtained extract was consecutively passed under pressure three times through a stirred ultrafiltration cell (Amicon, Danvers, MA) equipped with XM-300, PM-10, and YM-1 filters. The ultrafiltrate was dried in vacuo (Speed Vac Concentrator CS-18, Savant Instruments, Hickville, NY) and applied to preparative continuous acid–urea–PAGE [23]. Aliquots of each fraction were tested for antimicrobial activity by radial agar-diffusion assay. Active fractions were purified by reverse-phase HPLC on a Macrosphere 300 C-18 (250 × 4.6 mm) column with a linear gradient of acetonitrile concentration from 15 to 30% (0.3% min−1) in 0.1% TFA. The peptides of interest were examined by gel electrophoresis.

Gel electrophoresis. Tricine–SDS–PAGE [24] and acid–urea–PAGE [25] were performed in minigels using a SE 250 vertical gel unit (Hoefer, San Francisco, CA). Gels were stained with a solution that contained 1 g of Coomassie brilliant blue R-250 (Sigma), 270 ml methanol, 630 ml water, and 150 ml formaldehyde, and then were destained in 5% acetic acid.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทำให้บริสุทธิ์ของเปปไทด์ต้านจุลชีพจาก mesoglea ของแมงกะพรุน scyphoid Aurelia aurita แมงกะพรุน Scyphoid A. aurita ถูกรวบรวมไว้ที่เขตชายฝั่ง (Sredniy เกาะ ทะเลขาว รัสเซีย) Mesogleya ชิ้นสรรพสามิต และวางไว้สำหรับสกัดลงในกรดอะซิติก 5% สารสกัดที่ได้รับติดต่อกันผ่านความดันสามครั้งผ่านเซลล์ตีกรอง (Amicon เดนเวอร์ MA) พร้อมกับ XM-300, PM-10 และตัวกรอง YM-1 Ultrafiltrate ถูกอบแห้งใน vacuo (CS หัวเร็ว Vac-18 ตราสารเมธี Hickville, NY) และใช้กับกราต่อเนื่องกรด – ยูเรีย – หน้า [23] Aliquots ของแต่ละส่วนถูกทดสอบสำหรับกิจกรรมต้านจุลชีพ โดยทดสอบรัศมีวุ้นแพร่ เศษส่วนที่ใช้งานอยู่ได้บริสุทธิ์ โดย HPLC ขั้นตอนย้อนกลับในคอลัมน์ C-18 Macrosphere 300 (250 × 4.6 mm) ที่มีการไล่ระดับความเข้มข้น acetonitrile จาก 15 ถึง 30% (min−1 0.3%) 0.1% เชิงเส้น TFA เปปไทด์น่าสนใจถูก examined โดยอิเจอิเจ Tricine – SDS – หน้า [24] และกรด – ยูเรีย – หน้า [25] ถูกดำเนินการใน minigels โดยใช้หน่วยแนวเจ SE 250 (Hoefer ซานฟรานซิสโก CA) เจถูกย้อม ด้วยโซลูชันที่อยู่ 1 กรัม Coomassie R-250 สีฟ้าสดใส (Sigma), เมทานอล 270 ml, 630 มล. น้ำ 150 มล.ฟอร์มาลดีไฮด์ และจากนั้น ถูก destained ในกรดอะซิติก 5%

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การทำให้บริสุทธิ์ของเปปไทด์ต้านจุลชีพจาก mesoglea ของแมงกะพรุน scyphoid เลียตะ Scyphoid แมงกะพรุนเอตะถูกเก็บในเขตชายฝั่งทะเล (คน Sredniy เกาะทะเลสีขาว, รัสเซีย) Mesogleya ชิ้นถูกตัดและวางไว้สำหรับการสกัดเป็นกรดอะซิติก 5% สารสกัดที่ได้รับก็ผ่านไปได้อย่างต่อเนื่องภายใต้ความกดดันสามครั้งผ่านการกรองเซลล์กวน (Amicon เดนเวอร์, MA) พร้อมกับ XM-300, PM-10 และ YM-1 ฟิลเตอร์ ultrafiltrate แห้งในสุญญากาศ (ความเร็ว Vac Concentrator CS-18, เมธีเครื่องดนตรี, Hickville นิวยอร์ก) และนำไปใช้อย่างต่อเนื่องเตรียมกรดยูเรียหน้า [23] aliquots ของแต่ละส่วนได้รับการตรวจฤทธิ์ต้านจุลชีพโดยรัศมีวุ้นแพร่ทดสอบ เศษส่วนที่ใช้งานที่ถูกทำให้บริสุทธิ์โดยย้อนกลับเฟส HPLC ในคอลัมน์ Macrosphere 300 C-18 (250 × 4.6 มิลลิเมตร) ที่มีความลาดชันเชิงเส้นของความเข้มข้น acetonitrile 15-30% (0.3% นาที-1) ใน 0.1% TFA เปปไทด์ที่น่าสนใจได้รับการตรวจสอบโดย gel electrophoresis. gel electrophoresis Tricine-SDS-PAGE [24] และกรดยูเรียหน้า [25] ได้ดำเนินการใน minigels ใช้หน่วยเจล SE 250 แนวตั้ง (Hoefer, San Francisco, CA) เจลถูกย้อมด้วยวิธีการแก้ปัญหาที่มี 1 กรัม Coomassie สีฟ้าสดใส R-250 (ซิกม่า) 270 มล. เมทานอล 630 มล. น้ำ 150 มลลดีไฮด์และจากนั้นถูก destained ในกรดอะซิติก 5%

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การทำให้บริสุทธิ์ของเปปไทด์ต้านจุลชีพจากมีโซเกลียของ scyphoid แมงกะพรุน Aurelia aurita . scyphoid แมงกะพรุน . aurita ถูกเก็บในเขตชายฝั่ง ( เกาะ sredniy สีขาว , ทะเล , รัสเซีย ) mesogleya ชิ้นถูกตัดและวางไว้ในการสกัดเป็น 5 % กรดอะซิติก นำสารสกัดก็ติดต่อกันผ่านภายใต้ความดันสามครั้งผ่านมือถือ ( amicon กวนผสม , เดนเวอร์ , MA ) พร้อม xm-300 PM-10 และตัวกรอง , ym-1 . การ ultrafiltrate แห้ง ( ความเร็วใน vacuo Vac หัว cs-18 เมธี , เครื่องมือ , hickville , NY ) และใช้ค่าต่อเนื่องและยูเรียกรด–หน้า [ 23 ] เฉยๆของแต่ละส่วนโดยมีกิจกรรมการยับยั้งโดยรัศมีวุ้นกระจายการทดสอบ ส่วนที่ใช้งานได้แล้วกลับเฟส HPLC ใน macrosphere 300 - ( 250 × 4.6 มม. ) คอลัมน์ มีความลาดชันเชิงเส้นของไนความเข้มข้นจาก 15 ถึง 30 % ( 0.3% มิน− 1 ) ในระดับ 0.1 เปอร์เซ็นต์ . ที่น่าสนใจคือ ตรวจสอบด้วยเปปไทด์ เจลเจล ไตรซีน ( SDS ) หน้า [ 24 ] และกรดยูเรีย–หน้า [ 25 ] และมีการปฏิบัติในการใช้เจลเซ minigels 250 แนวตั้งหน่วย ( โฮเฟอร์ , ซานฟรานซิสโก ( CA ) เจลใช้ย้อมด้วยสารละลายที่ประกอบด้วย 1 กรัมของเหล่านี้น่าจะเป็น r-250 สีฟ้าสดใส ( Sigma ) 270 ml น้ำและเมทานอล , 630 , 150 ml ฟอร์มาลดีไฮด์ และจากนั้นถูก destained 5 % กรดอะซิติก