Nuclear Transfer and ActivationAll

Nuclear Transfer and Activation
All micromanipulations are carried out in Hepes buffered
media. In our laboratory we use a SOF Hepes-based formulation
(Gardner et al., 1994) supplemented with 6 mg/ml of
BSA and/or 10% FCS for zona-free work. The zona pellucida
of in vitro matured oocytes is very thick and heterogeneous,
and due to hardening it is difficult to penetrate with a
bevelled standard pipette such as those used for enucleating
in vitro matured oocytes of other species. As a result, the
zona-enclosed conventional method for enucleation is more
difficult and less efficient. Moreover, the transfer of the
donor cell into the perivitelline space results in poor contact
between the oocyte and somatic cell membranes, thus
reducing the chance of successful electrofusion (Lagutina
et al., 2005; Li et al., 2002) even at high voltage. Further,
the presence of the zona pellucida acts as an electrical
shield that requires an increase in the voltage of fusion to
2–2.5 kV/cm, and this high voltage reduces subsequent
cleavage of the reconstructed embryos. Therefore, two
methods have been used to overcome this problem: the use

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

โอนนิวเคลียร์และเปิดใช้งานMicromanipulations ทั้งหมดจะดำเนินการใน Hepes bufferedสื่อ ในห้องปฏิบัติการของเรา ที่เราใช้กำหนดที่ใช้ SOF Hepes(การ์ดเนอร์ et al., 1994) เสริม ด้วย 6 mg/ml ของบีเอสเอและ/หรือ 10% FCS สำหรับงานฟรีอสุจิ Pellucida อสุจิของการเพาะเลี้ยง matured แช่สารละลายจะหนา และแตกต่าง กันและเนื่องจากแข็ง เป็นยากเข้ากับการเปตต์ bevelled มาตรฐานเช่นใช้สำหรับ enucleatingการเพาะเลี้ยง matured แช่สารละลายชนิดอื่น ๆ ดังนั้น การอสุจิอยู่วิธีธรรมดาสำหรับ enucleation คือเพิ่มเติมยาก และมีประสิทธิภาพน้อย นอกจากนี้ การโอนย้ายการผู้บริจาคเซลล์เป็นผลพื้นที่ perivitelline ติดต่อยากระหว่าง oocyte และ somatic เซลล์เยื่อหุ้ม ดังนั้นลดโอกาสของความสำเร็จ electrofusion (Lagutinaร้อยเอ็ด al., 2005 Li et al., 2002) ได้ที่แรงดันสูง เพิ่มเติมของ pellucida อสุจิทำหน้าที่เป็นการไฟฟ้าโล่ที่ต้องการเพิ่มแรงดันของการหลอมเหลวเพื่อ2 – 2.5 kV/cm และแรงดันสูงนี้ลดตามมาปริของโคลนสร้างขึ้นใหม่ ดังนั้น ทั้งสองการใช้วิธีการเอาชนะปัญหานี้: การใช้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การโอนและการเปิดใช้งานทั้งหมดจะดำเนินการใน micromanipulations

สื่อฮีเปสในนิวเคลียร์ ในห้องปฏิบัติการของเราเราใช้ตัวอย่างการใช้ฮีเปส
( Gardner et al . , 1994 ) เสริมด้วย 6 มก. / มล.
BSA และ / หรือ 10% FCS เพื่อค้นหางานฟรี การค้นหา pellucida
ของการสุกตัวเป็นอย่างหนาและแข็งต่างกัน ,
และเนื่องจากมันเป็นเรื่องยากที่จะเจาะด้วย
คอลัมน์มาตรฐานเปต เช่นที่ใช้สำหรับ enucleating
การสุกตัวของสายพันธุ์อื่น ๆ ผล การค้นหาวิธีการเข้าสมาธิอยู่

เป็นมากขึ้นยากและมีประสิทธิภาพน้อยลง นอกจากนี้ การโอนของผู้บริจาคเซลล์ใน perivitelline

ผลในพื้นที่ติดต่อระหว่างเยื่อหุ้มเซลล์และยากจนผ่านทางกายจึง
ลดโอกาสของการประสบความสำเร็จ electrofusion ( lagutina
et al . , 2005 ; Li et al . , 2002 ) ที่แรงดันสูง ต่อไป
สถานะของโซนา pellucida ทำหน้าที่เป็นโล่ที่ใช้ไฟฟ้า
เพิ่มแรงดันของฟิวชั่น

2 – 2.5 kV / cm และแรงดันสูงนี้ช่วยลดความแตกแยกตามมา
ของการฟื้นฟูระยะก่อนการฝังตัว ดังนั้น สอง
วิธีมีการใช้เพื่อเอาชนะปัญหานี้ใช้