Samples were prepared as described

Samples were prepared as described by Kohn et al. (2007c), with modifications. A small piece of frozen tissue was weighed and 100 mM potassium phosphate buffer, pH 7.30, added to a ratio of 1:19. The tissue was homogenized on ice using a Teflon tip, after which it was sonicated twice for 10 s at 6 W using a micro sonication probe (Virtis Virsonic Ultrasonic Cell Disrupter 100) and centrifuged at 1700 g for 5 min (4 °C). Enzyme assays were performed using the supernatant, whereas a small part of the pellet was diluted with sample buffer (5% β-mercaptoethanol, 2.5% SDS, 10% glycerol, 62.5 mM Tris, pH 6.8 and 0.1% bromophenol blue). These latter samples were heated to 95 °C for 3 min and used for determining the MHC isoform content and Western blot analyses. A rat muscle sample obtained from a previous published study was included to serve as control for the MHC IIb isoform on Western blots (Smith et al., 2008).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตัวอย่างที่เตรียมตามที่อธิบายไว้โดย Kohn et al. (2007c), กับแก้ไข ชิ้นส่วนเล็ก ๆ ของเนื้อเยื่อแช่แข็งมีน้ำหนัก และ 100 มม.โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.30 เพิ่มอัตราส่วน 1:19 เนื้อเยื่อถูก homogenized เป็นกลุ่มบนน้ำแข็งที่ใช้เคล็ดลับเทฟลอน หลังจากที่มันถูก sonicated สองครั้งสำหรับ 10 s ที่ 6 W ใช้ sonication ไมโครโพรบ (Virtis Virsonic อัลตราโซนิกเซลล์ Disrupter 100) และ centrifuged ที่ 1700 g สำหรับ 5 นาที (4 ° C) เอนไซม์ assays ดำเนินใช้ supernatant ในขณะที่ส่วนเล็ก ๆ ของเม็ดถูกผสมกับบัฟเฟอร์ตัวอย่าง (5% β-mercaptoethanol, SDS 2.5%, 10% กลีเซอร ตรี pH 6.8 และ 0.1% bromophenol blue 62.5 mM) ตัวอย่างหลังนี้มีอุณหภูมิ 95 ° C ใน 3 นาที และใช้ในการกำหนดเนื้อหา isoform เอ็มเอชซีและตะวันตกทำลายวิเคราะห์ ตัวอย่างกล้ามเนื้อหนูที่ได้รับจากการศึกษาเผยแพร่ก่อนหน้านี้ถูกรวมอยู่ในการทำหน้าที่เป็นตัวควบคุมสำหรับ isoform เอ็มเอชซี IIb ในตะวันตก blots (Smith et al., 2008)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตัวอย่างได้จัดทำตามที่อธิบายไว้โดยโคห์นและอัล (2007c) มีการปรับเปลี่ยน ชิ้นส่วนเล็ก ๆ ของเนื้อเยื่อที่แช่แข็งได้รับการชั่งน้ำหนักและ 100 มิลลิโพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ค่า pH 7.30 เพิ่มอัตราส่วน 01:19 เนื้อเยื่อที่ถูกปั่นบนน้ำแข็งโดยใช้เทฟลอนปลายหลังจากที่มันถูก sonicated สองครั้งสำหรับ 10 วินาทีที่ 6 W โดยใช้หัววัด sonication ไมโคร (Virtis Virsonic อัลตราโซนิกเซลล์ disrupter 100) และหมุนเหวี่ยงที่ 1,700 กรัมเป็นเวลา 5 นาที (4 ° C) การตรวจเอนไซม์ถูกดำเนินการโดยใช้สารละลายในขณะที่ส่วนเล็ก ๆ ของเม็ดถูกเจือจางด้วยบัฟเฟอร์ตัวอย่าง (5% β-mercaptoethanol 2.5% SDS, กลีเซอรีน 10%, 62.5 มิลลิทริสพีเอช 6.8 และ 0.1% bromophenol สีฟ้า) ตัวอย่างเหล่านี้หลังถูกความร้อนถึง 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 นาทีและใช้ในการกำหนดเนื้อหาไอโซฟอร์ม MHC และการวิเคราะห์ดวงตะวัน ตัวอย่างของกล้ามเนื้อของหนูที่ได้รับจากการศึกษาที่เผยแพร่ก่อนหน้านี้รวมถึงการให้บริการเป็นตัวควบคุมสำหรับไอโซฟอร์ม MHC IIb ใน blots ตะวันตก (สมิ ธ et al., 2008)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตัวอย่างที่เตรียมไว้โดยคอร์น et al . ( 2007c ) ที่มีการปรับเปลี่ยน เป็นชิ้นเล็กๆ แช่เนื้อเยื่อและ 100 มิลลิเมตร หนักไหม โพแทสเซียมฟอสเฟต บัฟเฟอร์ pH 7.30 เพิ่มอัตราส่วน 1 : 19 . เนื้อเยื่อที่เป็นโฮโมบนน้ำแข็งที่ใช้เทฟลอนปลายหลังจากที่มันถูก sonicated สองครั้งใน 10 รึเปล่า s 6 รึเปล่า W ใช้โพรบ sonication ไมโคร ( เวอร์ติส virsonic ultrasonic เซลล์ยิง 100 ) และระดับที่ 1700 ไหม g 5 มั้ย มิน ( 4  ° C ) ตรวจเอนไซม์คือการใช้สูง ในขณะที่ส่วนเล็ก ๆของเม็ดเจือจางตัวอย่างมีบัฟเฟอร์ ( 5% บีตา - mercaptoethanol 2.5 % SDS , 10% กลีเซอรอล 62.5 มม.  นอกจากนี้ pH 6.8 และ 0.1% โบรโมฟีนอลบลู )ตัวอย่างหลังนี้ร้อนถึง 95  ° C 3 มั้ย มิน และใช้ตรวจหาไอโซฟอร์มเนื้อหา MHC และ Western blot การวิเคราะห์ . หนูกล้ามเนื้อตัวอย่างที่ได้จากก่อนหน้านี้ที่ศึกษาอยู่เพื่อเป็นการควบคุมสำหรับไอโซฟอร์มด้วยบน blots ตะวันตก MHC ( Smith et al . , 2008 )