2.4.1. PCR Amplification of HBA1 ge

2.4.1. PCR Amplification of HBA1 gene fragment
PCRwas carried out in a total volume of 50 μL containing 1 U of Kapa
2G Fast DNA polymerase (Kapabiosystems, Cambridge, US), 1 × PCR
buffer, 1.5 mM MgCl2, 200 μM of each dNTP, 0.25 μM of each 5′-TGGA
GGGTGGAGACGTCCTG-3′ (forward) and 5′-CTGGCACGTTTGCTGAGG
GAA-3′ (reverse) primer, 7.5% DMSO and 100 ng of genomic DNA. The
PCR conditions were as follows: initial denaturation at 95 °C for 2 min,
followed by 35 cycles of 95 °C for 30 s, 60 °C for 30 s, 72 °C for 30 s
and final extension at 72 °C for 2 min. PCR and primer extension reactions
were carried out in the TaKaRa Dice Gradient thermal cycler
(Otsu, Shiga, Japan).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4.1 การส่วนยีนขยาย HBA1 PCRPCRwas ดำเนินการปริมาณรวม 50 μL ประกอบด้วย 1 U ของ Kapa2G เร็วดีเอ็นเอพอลิเมอเรส (Kapabiosystems เคมบริดจ์ สหรัฐอเมริกา), 1 × PCRบัฟเฟอร์ 1.5 มม. MgCl2, μM 200 ของแต่ละ dNTP, μM 0.25 ของแต่ละ 5′-TGGAGGGTGGAGACGTCCTG-3′ (ข้างหน้า) และ 5′-CTGGCACGTTTGCTGAGGเฒ่า-3′ (ย้อนหลัง) สีรองพื้น 7.5% DMSO และ 100 ng ของ genomic DNA ที่เงื่อนไข PCR มีดังนี้: denaturation เริ่มต้นที่ 95 ° C ในนาทีที่ 2ตามรอบ 35 ของ 95 ° C สำหรับ 30 s, 60 ° C สำหรับ 30 s, 72 ° C สำหรับ 30 sและสุดท้ายขยายที่ 72 ° C สำหรับ 2 นาที PCR และรองพื้นต่อปฏิกิริยาได้ดำเนินการ cycler ร้อนลูกเต๋า TaKaRa ไล่ระดับ(โอสึ ชิงะ ญี่ปุ่น)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4.1 PCR Amplification ของส่วนยีน HBA1
PCRwas ดำเนินการในปริมาณรวมของ 50 ไมโครลิตรมี 1 ยู Kapa
2G ดีเอ็นเอโพลิเมอร์เร็ว (Kapabiosystems เคมบริดจ์สหรัฐ) 1 × PCR
บัฟเฟอร์ 1.5 มิลลิ MgCl2 200 ไมครอนของแต่ละ dNTP, 0.25 ไมครอน ของแต่ละ 5'-TGGA
GGGTGGAGACGTCCTG-3 (ไปข้างหน้า) และ 5'-CTGGCACGTTTGCTGAGG
GAA-3 (ย้อนกลับ) ไพรเมอร์, DMSO 7.5% และ 100 นาโนกรัมของดีเอ็นเอ
เงื่อนไข PCR มีดังนี้ denaturation เริ่มต้นที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2
นาทีตามด้วย35 รอบของ 95 ° C เป็นเวลา 30 วินาที, 60 ° C เป็นเวลา 30 วินาที, 72 ° C เป็นเวลา 30
วินาทีและการขยายสุดท้ายที่72 องศาเซลเซียส 2 นาที PCR
และปฏิกิริยาขยายไพรเมอร์ได้ดำเนินการในTakara ลูกเต๋าไล่โทนสี Cycler ความร้อน
(โอตสึชิ, ญี่ปุ่น)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เครื่องมือกำจัดเพื่อย้าย . PCR แบบ hba1 ยีน ~
pcrwas ออกมาในปริมาณรวม 50 μ L มี 1 U ของจังหวัด
2G ใช้ DNA ได้อย่างรวดเร็ว ( kapabiosystems เคมบริดจ์ สหรัฐอเมริกา ) , บัฟเฟอร์ )
1 × 1.5 มม. ชุด 200 μ M ของแต่ละ dntp 0.25 μ M ละ 5 ’ - tgga
gggtggagacgtcctg-3 MBC ( ไปข้างหน้า ) และ 5 ’ - ’ ctggcacgtttgctgagg
gaa-3 ( ย้อนกลับ ) ไพรเมอร์ , 7.5 และ DMSO 100 ng ของ genomic DNA
โดยเงื่อนไขดังนี้ ( เริ่มต้นที่ 95 องศา C เป็นเวลา 2 นาที
ตามด้วย 35 รอบ 95 องศา C เป็นเวลา 30 , 60 ° C เป็นเวลา 30 วินาที , 72 ° C 30 S
สุดท้ายและนามสกุลที่ 72 ° C 2 นาทีและปฏิกิริยา PCR ไพรเมอร์นามสกุล
ทดลองใน ทาคาร่า ลูกเต๋า ไล่ระดับความร้อนรอบ
( โอทสุ ชิงะ , ญี่ปุ่น )