vi) Prepare a solution of MAb M10 a

vi) Prepare a solution of MAb M10 at the previously determined dilution.
vii) Treat the cell monolayers with the MAb solution for 30 minutes at 37°C in a humid chamber.
viii) Rinse the cells three times for 5 minutes with PBS.
ix) Incubate with a specific anti-mouse fluorescein isothiocyanate (FITC)-conjugated antibody
(prepared according to the supplier’s instructions) for 30 minutes at 37°C in darkness in a humid
chamber.
x) Rinse three times for 5 minutes with PBS.
xi) Examine the treated cell monolayers on plastic plates immediately, or mount the cover-slips
using glycerol saline at pH 8.5 prior to microscopic observation.
xii) Examine under incident UV light using a microscope with ×10 eye pieces and ×20–40 objective
lenses. Positive and negative controls must be found to give the expected results prior to any
other observation. Positive results are indicated by diffuse fluorescence throughout the
cytoplasm.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

vi) เตรียมน้ำยาของ M10 มาบที่เจือจางกำหนดก่อนหน้านี้vii) รักษา monolayers เซลล์กับโซลูชันมาบ 30 นาทีที่ 37 ° C ในห้องชื้นviii) ล้างเซลล์สามครั้งสำหรับ 5 นาทีกับ PBSix) ฟัก ด้วยการเฉพาะเมาส์ต่อต้าน fluorescein isothiocyanate (FITC) -แอนติบอดีรวม(จัดทำตามคำแนะนำของผู้ผลิต) 30 นาทีที่ 37 ° C ในที่มืดในชื้นหอการค้าx) ล้าง 3 ครั้งสำหรับ 5 นาที PBSxi) ตรวจสอบ monolayers บำบัดเซลล์บนแผ่นพลาสติกทันที หรือติดหน้าปกใบใช้กลีเซอรอลน้ำเกลือที่ pH 8.5 ก่อนกล้องจุลทรรศน์xii) การตรวจสอบภายใต้เหตุการณ์แสงยูวีโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ด้วยชิ้นตา 10 ×× 20 – 40 วัตถุประสงค์เลนส์ ต้องพบควบคุมบวก และลบเพื่อให้ผลลัพธ์คาดไว้ก่อนใด ๆจุดชมวิวอื่น ๆ ผลบวกจะแสดง ด้วยการเรืองแสงที่กระจายทั่วตัวไซโทพลาซึม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

VI) เตรียมการแก้ปัญหาของแอนติบอดี M10 ที่เจือจางกำหนดไว้ก่อนหน้านี้.
vii) รักษา monolayers เซลล์ที่มีวิธีการแก้ปัญหาแอนติบอดีสำหรับ 30 นาทีที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสในห้องชื้น.
viii) ล้างเซลล์สามครั้งเป็นเวลา 5 นาทีกับพีบีเอส.
ทรงเครื่อง ) บกับการต่อต้านเมาส์ fluorescein isothiocyanate เฉพาะ (FITC) แอนติบอดี -conjugated
(จัดทำขึ้นตามคำแนะนำของซัพพลายเออร์) เป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสในความมืดในชื้น
หอการค้า.
x) ล้างสามครั้งเป็นเวลา 5 นาทีกับพีบีเอส.
จิน ) ตรวจสอบ monolayers เซลล์ได้รับการรักษาในจานพลาสติกทันทีหรือติดฝาครอบใบ
โดยใช้น้ำเกลือกลีเซอรอลที่ pH 8.5 ก่อนที่จะกล้องจุลทรรศน์.
สิบสอง) ตรวจสอบภายใต้แสงยูวีเหตุการณ์ที่เกิดขึ้นโดยใช้กล้องจุลทรรศน์กับ× 10 ชิ้นตาและ× 20-40 วัตถุประสงค์
เลนส์ . ควบคุมบวกและลบจะต้องพบเพื่อให้ผลที่คาดหวังใด ๆ ก่อนที่จะมี
การสังเกตอื่น ๆ ผลบวกจะถูกระบุโดยการเรืองแสงกระจายทั่วทั้ง
พลาสซึม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

6 ) การเตรียมสารละลายโมโน M10 ที่ก่อนหน้านี้กำหนดเจือจาง7 ) รักษาเซลล์ monolayers กับโมโนโซลูชั่นสำหรับ 30 นาทีที่ 37 ° C ในห้องชื้น8 . ล้างเซลล์ 3 ครั้ง 5 นาทีกับ PBS9 ) บ่มเพาะกับเฉพาะไอโซไธโอไซยาเนตตี้เมาส์ี่ ( fitc ) และแอนติบอดี( ที่เตรียมไว้ ตามคําแนะนําของผู้ผลิต ) สำหรับ 30 นาทีที่ 37 ° C ในที่มืดในที่ชื้นห้องx ) ล้าง 3 ครั้ง 5 นาทีกับ PBSซี ) เพื่อรักษาเซลล์ monolayers บนแผ่นพลาสติก หรือติดฝาหลุดทันทีการใช้กลีเซอรอล ( พีเอช 8.5 ก่อนสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์12 ) การตรวจสอบภายใต้แสงยูวีเหตุการณ์โดยใช้กล้องจุลทรรศน์กับ× 10 ตาชิ้นและ× 20 – 40 วัตถุประสงค์เลนส์ การควบคุมทางบวกและทางลบ ต้องพบว่าให้ผลที่คาดว่าจะได้รับก่อนการใด ๆสังเกตอื่น ๆ ผลในเชิงบวกจะแสดงโดยการกระจายทั่วcytoplasm