2.1.2. Preparation of experimental diets
The ingredients of experimental diets are shown inTable 1. The
unmodified diet (control) was produced by mixing the main feed
mixture with additives and vitamin–mineral premixes, and then water
(30%) was added to make appropriate moisture. The glutinous mixture
was passed through a hand pelletizer, then dried at 60 °C for 3 h, and
stored at 4 °C until used. The modified diets were prepared by four different processes. 1) Gamma-irradiated diet and 2) microwave-irradiated
diet were prepared by irradiating the main feed mixture using gamma
source from
60
Co or microwave oven, respectively, at the best dose and
time obtained by highest in vitro digestibility values from the preliminary study inSection 2.1.1. The irradiated main feed mixtures were
then mixed with the minor ingredients (see Table 1). 3) Probioticsupplemented diet was freshly prepared by spraying the unmodified
diet with probiotic,Lactobacillus plantarum KKU CRIT5 (Premer CO.,
LTD, Thailand) before used. The population level ofL. plantarumin the
diet was 2.7 × 10
8
CFU per g diet. 4) Carbohydrase-supplemented diet
was prepared by spraying the unmodified diet with a mixture of carbohydrases (100μlkgdiet
−1
), then dried at ambient temperature, and
stored at 4 °C until used. The mixture of the enzymes was fromBacillus
lentus (Behn Meyer Chemical Co., Ltd., Thailand) containing the main
mannan-digesting enzymes,β-mannanase, and the minor enzymes of
amylase,β-glucanase, xylanase, cellulase andα-galactosidase. The
required amount of the carbohydrases was dissolved in distilled
water before being used. All modified diets were pelleted and kept
in the same way as the control diet.
2.1.3. Biochemical composition study
The diets were dried at 105 °C for 24 h before analyzing protein,
lipid, fiber, and ash, as described by theAOAC (2005). The values
were expressed as % on dry matter basis. Carbohydrate values or
nitrogen free extract (NFE) were calculated by the difference.
2.1.4. Evaluation of gelatinization degree and water solubility
The diets were freeze-dried for 2 days before analysis. The dried
mass of the diets was determined for degree of starch gelatinization
according toGuraya and Toledo (1993). Water solubility of all nutrients
was measured according to the method ofChung et al. (2010).
2.2. Fish husbandry and sample collection
Juvenilefish were obtained from a private farm in Nakhon Pathom
Province, the most important area for producing exported Siamese
fightingfish in Thailand. Thefish were acclimatized indoors, in tanks
(60 cm diameter ×30 cm height) with water temperature of 28.5±
0.3 °C, and fed with the control (unmodified) diet for 7 days before
starting the experiments. The fish of 72.73±2.14 mg initial weight
and 19.70±0.04 mm initial length were randomly distributed into 15
aquaria (18×19×34 cm), 30fish per aquarium with a porous white
cubic box (6×16×22 cm) for reducing aggressive stress betweenfish
members. The experiment was conducted for 2 weeks with 12-h
light/12-h dark and performed in triplicate with five dietary groups
(one control and four modified diets) comprised of 90fish each group.
Thefish were fed ad libitum, twice daily at 08:00 and 18:00 h. At
the end of the experiment, the fish were sacrificed by chilling in
ice according to“Ethical Principles and Guidelines for the Use of Animals for Scientific Purposes”, National Research Council, Thailand.
Thefish were not fed on the sampling day. Body weight and total
length were measured before white muscle and digestive tracts
were carefully collected. The tissues were then kept at−80 °C
until analyses.
Weight and length of the juvenilefish were measured individually. Growth performance parameters were calculated as the following formulae.
Conditionfactor g cm
–3
¼100 W=L
3
;
where W=live body weight (g) and L=total body length (cm).Specific
growth rate (SGR) was calculated according toHoude and Schekter
(1981).
SGR %day
–1
¼100e
g
−1
whereg=(lnWt−lnW0)/(t−t0), Wt=mean weight at montht,
W0=mean weight at montht0.
Netweightgain NWG ðÞ¼finalbodyweight–initialbodyweight
Averagedailygrowth ADG;gday
−1
¼netweightgain=rearingperiod
Digestosomaticindex DSI;% ðÞ¼100
gastrointestinalweight=bodyweight ½ 2.3. Water quality management
The experiments were conducted at Kasetsart University in an indoor
recirculating aquaculture system with aflow-rate of 280 ml min
−1
.
The recirculating aquaculture system was modified fromKovitvadhi
et al. (2008). This system consisted of particulate filter cabinet
(L×W×H=35×22×51 cm), macrophytesfilter cabinet (35× 85 ×
51 cm), biological filter cabinet (35× 72 × 51 cm), water resting
cabinet (35 × 35 × 51 cm), andfive culture units (34 × 19 × 26 cm).
All cabinets had the water level of 45 cm while the culture units
had the water level of 18 cm. The water parameters were analyzed
twice weekly. Water temperature, pH, conductivity and dissolved
oxygen were analyzed using water analyzer (Multi probe system,
556 MPS, YSI Incorporated, USA). Other parameters including
total alkalinity (phenolphthalein methyl orange indicator), free
carbon dioxide (titration), total hardness (EDTA titration), total
ammonia nitrogen (phenate method), nitrite (colorimetry), nitrate
(cadmium reduction) and orthophosphate (ascorbic acid method)
were analyzed according to the method ofAPHA, AWWA, WPCF (1998).
The water quality during the experimental period had the
temperature of 28.49 ±0.28 °C, pH 7.52 ±0.05, dissolved oxygen
3.95±0.06 mg L
−1
, conductivity 0.40±0.01 mS cm
−1
, total alkalinity
94.74±1.13 ppm CaCO3, total hardness 114.75±0.81 ppm CaCO3,
free carbon dioxide 1.38 ±0.05 ppm, nitrate 0.045±0.003 ppm, nitrite
0.0033 ±0.0001 ppm, total ammonia nitrogen 0.027 ±0.004 ppm, and
phosphorous 0.028 ±0.002 ppm.
2.4. Digestive enzyme studies
2.4.1. Enzyme extraction
The enzyme extractions were performed according toRungruangsakTorrissen (2007). Digestive tracts of juvenile fish were extracted in
50 mM Tris–HCl buffer pH 8 containing 200 mM NaCl (1:3 w/v) using
micro-homogenizer (THP-220, OMNI International, USA). The homogenate was centrifuged at 10,000 ×gfor 20 min at 4 °C. The supernatant
was then collected and kept at−80 °C in small portions for later determinations. Protein concentration in the crude enzyme extract was
determined according toLowry et al. (1951).
3 K. Thongprajukaew et al. / Aquaculture 322-323 (2011) 1–9
2.4.2. Digestive enzyme assays
The optimal conditions (pH and temperature) chosen for studying
the main digestive enzymes in Siamesefightingfish were according
toThongprajukaew et al. (2010a, 2010b).
Amylase activity (at pH 8 and 50 °C) was determined based
on Areekijseree et al. (2004) modified from Bernfeld (1951)
using starch solution as substrate. The enzyme digestion reaction
was modified to 15 min. Amylase specific activity was expressed
asμmol maltose produced h−1
mg protein−1
.
Total protease activity (at pH 8 and 50 °C) was assayed using
azocasein as substrate based onAreekijseree et al. (2004)modified
from Garcia-Carreno (1992).Thespecific activity of total protease
was expressed as mU mg protein
−1
. One unit (U) of total protease
activity was defined as the amount of enzyme giving an increase of
1.0 absorbance unit at 440 nm at the specified reaction condition.
Amidase activities of trypsin (at pH 8 and 50 °C) and chymotrypsin (at pH 8 and 50 °C) were assayed by initial reactions
based onRungruangsak-Torrissen (2007)using BAPNA (benzoylL-arginine-p-nitroanilide) and SAPNA (N-succinyl-ala-ala-pro-phep-nitroanilide) as specific substrates, respectively. The specificactivities of trypsin and chymotrypsin were expressed as μmolpnitroaniline produced h
−1
mg protein−1
.
Esterase activity of lipase (at pH 8 and 40 °C) was analyzed based
onWinkler and Stuckmann (1979)usingp-nitrophenyl palmitate as
substrate. The specific activity of lipase was expressed as μmolpnitrophenol produced h
−1
mg protein−1
.
2.5. In vitro digestibility studies
Crude enzyme extracts were dialyzed overnight against 50 mM
Tris–HCl buffer pH 8.2 before used for determining in vitro digestibility.
Freeze-dried diets were used as substrate. Protein and carbohydrate digestibilities of the experimental diets usingfish crude enzyme extracts
were determined using the method modified fromRungruangsakTorrissen et al. (2002) and Areekijseree et al. (2006). The reaction
mixture containing 5 mg dried feed, 10 ml 50 mM phosphate buffer
pH 8.2, 50μl 0.5% chloramphenicol, and 125μldialyzedcrudeenzyme
extract, was incubated at 25 °C for 24 h.
Protein digestibility was determined by measuring the increase in
liberated reactive amino groups of cleaved peptides. The reaction
mixture, containing 200μl digested solution, 2 ml 50 mM phosphate
buffer pH 8.2, and 1 ml 0.1% trinitrobenzene sulphonic acid (TNBS),
was heated in the dark at 60 °C for 1 h, and stopped by adding 1 ml
1 M HCl before measuring absorbance at 420 nm and comparison
withDL-alanine standard curve.
Carbohydrate digestibility was determined by measuring the
increase in reducing sugar. The reaction mixture containing 1 ml
digested solution and 500μl DNS, was heated in boiling water for
5 min and cooled to room temperature before measuring absorbance
at 540 nm and comparison with maltose standard curve.
The blanks (without dialyzed crude enzyme extracts) were used
to deduct liberated amino acids and reducing sugars. For comparison,
the calculated values were standardized by trypsin activity for protein
digestibility and by amylase activity for carbohydrate digestibility
(Thongprajukaew, 2011). The in vitro digestibility of protein was
expressed asμmolDL-alanine equivalent g dried feed
−1
trypsin activity
−1
. The in vitro digestibility of carbohydrate was expressed as
μmol maltose g dried feed−1
amylase activity
−1
.
2.6. White muscle and body compositions
Scale and skin of thefish were carefully removed, and the epaxial
white muscle was diss
2.1.2 การเตรียมอาหารทดลองส่วนผสมของอาหารการทดลองแสดงให้เห็น inTable 1. การรับประทานอาหารที่ไม่แปร (ควบคุม) ที่ถูกผลิตโดยการผสมอาหารหลักผสมกับสารเติมแต่งและpremixes วิตามินเกลือแร่และน้ำแล้ว(30%) ถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อให้ความชุ่มชื้นที่เหมาะสม ส่วนผสมข้าวเหนียวก็ผ่านไปผ่าน pelletizer มือแห้งที่ 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 ชั่วโมงและเก็บไว้ที่4 องศาเซลเซียสจนกว่าจะใช้ อาหารที่ปรับเปลี่ยนได้จัดทำขึ้นโดยสี่กระบวนการที่แตกต่าง 1) อาหาร Gamma-ฉายรังสีและ 2) ไมโครเวฟฉายรังสีอาหารที่ถูกจัดทำขึ้นโดยฉายรังสีผสมอาหารหลักโดยใช้รังสีแกมมาที่มาจาก60 ร่วมหรือเตาอบไมโครเวฟ, ตามลำดับในปริมาณที่ดีที่สุดและเวลาที่ได้รับจากที่สูงที่สุดในหลอดทดลองค่าการย่อยได้จากการศึกษาเบื้องต้นinSection 2.1.1 ฉายรังสีผสมอาหารหลักได้รับการผสมกับส่วนผสมเล็ก ๆ น้อย ๆ (ดูตารางที่ 1) 3) การรับประทานอาหารที่ถูกจัดทำขึ้น Probioticsupplemented สดใหม่โดยการฉีดพ่นไม่แปรอาหารที่มีโปรไบโอติกLactobacillus plantarum CRIT5 มหาวิทยาลัยขอนแก่น (Premer CO., LTD ประเทศไทย) ก่อนที่จะนำมาใช้ ระดับประชากร OFL plantarumin อาหารเป็น 2.7 × 10 8 CFU ต่อกรัมอาหาร 4) อาหารเสริม Carbohydrase-ถูกจัดทำขึ้นโดยการฉีดพ่นอาหารที่ยังไม่แปรที่มีส่วนผสมของcarbohydrases (100μlkgdiet -1) แห้งที่อุณหภูมิห้องและเก็บไว้ที่4 องศาเซลเซียสจนกว่าจะใช้ ส่วนผสมของเอนไซม์ที่เป็น fromBacillus lentus (คอเมเยอร์เคมิคอล จำกัด ประเทศไทย) ที่มีหลักเอนไซม์ย่อยMannan-, β-mannanase และยังไม่บรรลุนิติภาวะของเอนไซม์อะไมเลส, β-glucanase, ไซลาเนส, เซลลูandα-galactosidase จำนวนเงินที่ต้องของ carbohydrases ถูกละลายในกลั่นน้ำก่อนที่จะถูกนำมาใช้ อาหารที่มีการปรับเปลี่ยนทั้งหมดถูกเม็ดและเก็บไว้ในลักษณะเดียวกับการควบคุมอาหาร. 2.1.3 การศึกษาองค์ประกอบทางชีวเคมีอาหารที่แห้งที่อุณหภูมิ 105 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงก่อนที่จะวิเคราะห์โปรตีนไขมันเส้นใยและเถ้าตามที่อธิบายtheAOAC (2005) ค่าที่ถูกแสดงเป็น% บนพื้นฐานแห้ง ค่าคาร์โบไฮเดรตหรือไนโตรเจนฟรี (กศน) จะถูกคำนวณจากความแตกต่าง. 2.1.4 การประเมินผลการศึกษาระดับปริญญาเจลละลายน้ำและอาหารที่ได้รับการแห้งเป็นเวลา 2 วันก่อนที่จะวิเคราะห์ แห้งมวลของอาหารที่ถูกกำหนดสำหรับระดับของการเกิดเจลสตาร์ชตามtoGuraya และ Toledo (1993) สามารถในการละลายน้ำของสารอาหารทั้งหมดวัดตามวิธี ofChung et al, (2010). 2.2 การเลี้ยงปลาและการเก็บตัวอย่างJuvenilefish ที่ได้รับจากฟาร์มเอกชนในจังหวัดนครปฐมจังหวัดในพื้นที่ที่สำคัญที่สุดสำหรับการผลิตส่งออกสยามFightingFish ในประเทศไทย Thefish ถูกปรับสภาพในบ้านในถัง(60 ซม. เส้นผ่าศูนย์กลาง 30 ซม×สูง) กับอุณหภูมิของน้ำ 28.5 ± 0.3 ° C และอาหารที่มีการควบคุม (แปร) อาหารเป็นเวลา 7 วันก่อนที่จะเริ่มต้นการทดลอง ปลาของ 72.73 ± 2.14 มิลลิกรัมต่อน้ำหนักเริ่มต้นและ19.70 ± 0.04 มิลลิเมตรระยะเวลาในการเริ่มต้นมีการกระจายแบบสุ่มเป็น 15 ตู้ (18 × 19 × 34 ซม.) 30fish ต่อพิพิธภัณฑ์สัตว์น้ำที่มีรูพรุนสีขาวกล่องลูกบาศก์(6 × 16 × 22 ซม.) ในการลด ก้าวร้าวความเครียด betweenfish สมาชิก ทำการทดลองเป็นเวลา 2 สัปดาห์กับ 12 ชั่วโมงแสง/ มืด 12 ชั่วโมงและดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่าที่มีห้ากลุ่มอาหาร(หนึ่งในการควบคุมและสี่อาหารที่มีการปรับเปลี่ยน) ประกอบด้วย 90fish แต่ละกลุ่ม. Thefish ได้รับการเลี้ยงดูโฆษณา libitum สองครั้งทุกวันที่ 08: 00 ชั่วโมงและ 18:00 ในตอนท้ายของการทดลองปลาเสียสละโดยหนาวในน้ำแข็งตาม"หลักจริยธรรมและแนวทางการใช้สัตว์วิทยาศาสตร์วัตถุประสงค์" สภาวิจัยแห่งชาติประเทศไทย. Thefish ไม่ได้ถูกเลี้ยงในวันที่สุ่มตัวอย่าง น้ำหนักตัวและรวมระยะเวลาในวัดก่อนที่กล้ามเนื้อสีขาวและทางเดินอาหารที่ถูกเก็บรวบรวมอย่างระมัดระวัง เนื้อเยื่อที่ถูกเก็บไว้แล้วที่ 80 ° C จนการวิเคราะห์. น้ำหนักและความยาวของ juvenilefish ถูกวัดเป็นรายบุคคล ค่าประสิทธิภาพการเจริญเติบโตจะถูกคำนวณเป็นสูตรต่อไปนี้. Conditionfactor กรัมซม-3 ?? ¼100? W = L 3 ??; ที่ W = น้ำหนักตัวสด (ช) และ L = ความยาวลำตัวรวม (เซนติเมตร) .Specific อัตราการเจริญเติบโต (SGR) ที่คำนวณได้ตาม toHoude และ Schekter. (1981) SGR% วัน-1 ?? ¼100e กรัม-1 ?? whereg = (lnWt-lnW0) / (t-t0) น้ำหนัก = หมายถึงน้ำหนักที่ montht, W0 = หมายถึงน้ำหนักที่ montht0. Netweightgain NWG ðÞ¼finalbodyweight-initialbodyweight Averagedailygrowth ADG; GDay -1 ?? ¼netweightgain = rearingperiod Digestosomaticindex DSI;% ðÞ¼100? gastrointestinalweight = น้ำหนักตัว½? 2.3 การจัดการคุณภาพน้ำการทดลองดำเนินการที่มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ในร่มระบบน้ำหมุนเวียนที่มีaflow อัตรา 280 มิลลิลิตรนาที-1. ระบบน้ำหมุนเวียนมีการปรับเปลี่ยน fromKovitvadhi et al, (2008) ระบบนี้จะประกอบไปด้วยตู้กรองอนุภาค(L × W × H = 35 × 22 × 51 ซม.) ตู้ macrophytesfilter (35 × 85 × 51 ซม.) ตู้กรองชีวภาพ (35 × 72 × 51 ซม.) น้ำที่วางอยู่ในตู้(35 × 35 × 51 ซม.) หน่วยวัฒนธรรม andfive (34 × 19 × 26 ซม.) ตู้ทั้งหมดมีระดับน้ำ 45 ซม. ในขณะที่หน่วยงานวัฒนธรรมมีระดับน้ำ18 ซม พารามิเตอร์วิเคราะห์น้ำสัปดาห์ละสองครั้ง อุณหภูมิของน้ำมีค่า pH การนำและการละลายออกซิเจนถูกวิเคราะห์โดยใช้การวิเคราะห์ทางน้ำ(มีระบบการสอบสวนหลาย, 556 MPS, YSI Incorporated, สหรัฐอเมริกา) พารามิเตอร์อื่น ๆ รวมทั้งความเป็นด่างรวม(phenolphthalein ตัวบ่งชี้ส้มเมธิล) ฟรีก๊าซคาร์บอนไดออกไซด์(ไตเตรท) ความแข็งรวม (ไตเตรท EDTA) รวมแอมโมเนียไนโตรเจน(วิธี phenate), ไนไตรท์ (colorimetry) ไนเตรต(ลดแคดเมียม) และออร์โธฟอสเฟต (วิธีวิตามินซี ) ถูกนำมาวิเคราะห์ตามวิธี ofAPHA, AWWA, WPCF (1998). คุณภาพน้ำในช่วงระยะเวลาการทดลองมีอุณหภูมิ 28.49 ± 0.28 องศาเซลเซียสพีเอช 7.52 ± 0.05, ออกซิเจนละลาย 3.95 ± 0.06 มิลลิกรัมต่อลิตร-1 การนำ 0.40 ± 0.01 มิลลิเซนติเมตร-1 ด่างรวม94.74 ± 1.13 ppm CaCO3 ความแข็งรวม 114.75 ± 0.81 ppm CaCO3, ก๊าซคาร์บอนไดออกไซด์ฟรี 1.38 ± 0.05 ppm ไนเตรต 0.045 ± 0.003 ppm, ไนไตรท์0.0033 ± 0.0001 ppm ไนโตรเจนแอมโมเนียรวม 0.027 ± 0.004 ppm และฟอสฟอรัส0.028 ± 0.002 ppm. 2.4 เอนไซม์ย่อยอาหารการศึกษา2.4.1 สกัดเอนไซม์สกัดเอนไซม์ที่ได้ดำเนินการตาม toRungruangsakTorrissen (2007) ทางเดินอาหารของปลาที่เด็กและเยาวชนถูกสกัดใน50 มิลลิ Tris-HCl บัฟเฟอร์ pH 8 มี 200 มิลลิโซเดียมคลอไรด์ (1: 3 w / v) โดยใช้ไมโครโฮโมจีไน(THP-220, OMNI ระหว่างประเทศสหรัฐอเมริกา) homogenate ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 × gfor 20 นาทีที่ 4 ° C สารละลายที่ถูกเก็บรวบรวมแล้วและเก็บไว้ที่ 80 องศาเซลเซียสในส่วนเล็ก ๆ ในการพิจารณาในภายหลัง ความเข้มข้นของโปรตีนในสารสกัดเอนไซม์ถูกกำหนดตาม toLowry et al, (1951). 3 เค Thongprajukaew et al, / เพาะเลี้ยงสัตว์น้ำ 322-323 (2011) 1-9 2.4.2 เอนไซม์ย่อยอาหารการวิเคราะห์เงื่อนไขที่ดีที่สุด (pH และอุณหภูมิ) ได้รับการแต่งตั้งในการศึกษาเอนไซม์ย่อยอาหารหลักในSiamesefightingfish ถูกตามtoThongprajukaew et al, (2010a, 2010b). กิจกรรมอะไมเลส (ที่ pH 8 และ 50 ° C) ถูกกำหนดขึ้นในAreekijseree et al, (2004) ดัดแปลงมาจาก Bernfeld (1951) ใช้วิธีแป้งเป็นสารตั้งต้น ปฏิกิริยาการย่อยอาหารเอนไซม์ถูกปรับเปลี่ยนไป 15 นาที กิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงอะไมเลสได้แสดงออกasμmolผลิตมอลโตส H-1 มิลลิกรัมโปรตีน 1. กิจกรรมโปรติเอสรวม (ที่ pH 8 และ 50 ° C) ได้รับการวิเคราะห์โดยใช้azocasein เป็นสารตั้งต้นตาม onAreekijseree et al, (2004) การปรับเปลี่ยนจากการ์เซียCarreno (1992) กิจกรรม .Thespecific ของโปรติเอสรวมได้รับการแสดงเป็นmU mg โปรตีน-1 หนึ่งหน่วย (U) ของโปรติเอสรวมกิจกรรมที่ถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ให้เพิ่มขึ้น1.0 หน่วยการดูดกลืนแสงที่ 440 นาโนเมตรที่สภาวะปฏิกิริยาที่ระบุ. กิจกรรม Amidase ของ trypsin (ที่ pH 8 และ 50 ° C) และ chymotrypsin (ที่ pH 8 และ 50 ° C) ได้รับการวิเคราะห์จากปฏิกิริยาเริ่มต้นตามonRungruangsak-Torrissen (2007) โดยใช้ BAPNA (benzoylL อาร์จินี-P-nitroanilide) และ Sapna (N-เป็น Succinyl Ala-Ala-โปรสศรบ-nitroanilide) เป็นพื้นผิวที่เฉพาะเจาะจง ตามลำดับ specificactivities ของ trypsin และ chymotrypsin ถูกแสดงเป็นμmolpnitroanilineผลิตเอช-1 มก. โปรตีน 1. กิจกรรม Esterase ของเอนไซม์ไลเปส (ที่ pH 8 และ 40 ° C) ได้รับการวิเคราะห์ตามonWinkler และ Stuckmann (1979) palmitate usingp-Nitrophenyl เป็นสารตั้งต้น กิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงของเอนไซม์ไลเปสได้รับการแสดงเป็นμmolpnitrophenolผลิตเอช-1 มก. โปรตีน 1. 2.5 ในการศึกษาการย่อยหลอดทดลองสารสกัดเอนไซม์ดิบถูก dialyzed ค้างคืนกับ 50 มิลลิบัฟเฟอร์Tris-HCl pH 8.2 ก่อนที่จะนำมาใช้ในการพิจารณาในการย่อยหลอดทดลอง. อาหารแห้งถูกนำมาใช้เป็นสารตั้งต้น โปรตีนและคาร์โบไฮเดรตที่ย่อยของอาหารทดลอง usingfish สารสกัดจากเอนไซม์ได้รับการพิจารณาโดยใช้วิธีการปรับเปลี่ยนfromRungruangsakTorrissen et al, (2002) และ Areekijseree et al, (2006) ปฏิกิริยาส่วนผสมที่มี 5 มิลลิกรัมแห้งอาหาร 10 มล. 50 มมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 8.2 50μl chloramphenicol 0.5% และ125μldialyzedcrudeenzymeสารสกัดจากได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง. การย่อยโปรตีนได้รับการกำหนดโดยการวัดการเพิ่มขึ้นของการปลดปล่อยกลุ่มอะมิโนปฏิกิริยาเปปไทด์ cleaved ปฏิกิริยาส่วนผสมที่มีวิธีการแก้ปัญหา200μlย่อย 2 มิลลิลิตร 50 มิลลิฟอสเฟตบัฟเฟอร์pH 8.2 และ 1 มล. 0.1% trinitrobenzene กรด sulphonic (TNBS) ถูกความร้อนในที่มืดที่ 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมงและหยุดโดยการเพิ่ม 1 มล. 1 M HCl ก่อนที่จะวัดการดูดกลืนแสงที่ 420 นาโนเมตรและการเปรียบเทียบกราฟมาตรฐานwithDL-อะลานีน. การย่อยคาร์โบไฮเดรตถูกกำหนดโดยการวัดการเพิ่มขึ้นในการลดน้ำตาล ผสมปฏิกิริยาที่มี 1 มิลลิลิตรวิธีการแก้ปัญหาย่อยและDNS 500μl, ถูกความร้อนในน้ำเดือด5 นาทีและระบายความร้อนที่อุณหภูมิห้องก่อนที่จะวัดการดูดกลืนแสงที่540 นาโนเมตรและการเปรียบเทียบกับเส้นโค้งมาตรฐานมอลโตส. ช่องว่าง (ไม่มีสารสกัดเอนไซม์ dialyzed) ถูกนำมาใช้ในการหักกรดอะมิโนที่มีอิสรเสรีและลดน้ำตาล สำหรับการเปรียบเทียบค่าที่คำนวณได้มาตรฐานโดยกิจกรรม trypsin โปรตีนย่อยและกิจกรรมอะไมเลสสำหรับการย่อยคาร์โบไฮเดรต(Thongprajukaew 2011) ในหลอดทดลองการย่อยของโปรตีนที่ถูกแสดงเทียบเท่าasμmolDL-อะลานีนกรัมแห้งอาหาร-1 กิจกรรม trypsin -1 ในหลอดทดลองการย่อยคาร์โบไฮเดรตได้รับการแสดงเป็นไมโครโมลมอลโตสกรัมแห้งอาหาร-1 กิจกรรมอะไมเลส-1. 2.6 กล้ามเนื้อสีขาวและองค์ประกอบร่างกายขนาดและผิวของ thefish ถูกลบออกอย่างระมัดระวังและ epaxial กล้ามเนื้อสีขาวท้าทาย
การแปล กรุณารอสักครู่..
