The culture solution of CHM1 was prepared by shaking LB liquid
culture at 30 C, 170 rpm for 36 h. It was further centrifuged at
6000 g for 5 min at 4 C and the supernatant collected and
passed through a 0.22-mm filter, yielding CHM1 culture filtrate. The
sterile culture filtrate was obtained by autoclaving the resultant
culture filtrate at 121 C for 30 min.
The effects in vitro of CHM1 on mycelial growth inhibition of
plant pathogens were studied according to the method reported
by Leroux et al. (2002). Two ml of CHM1 culture solution, culture
filtrate or sterile culture filtrate were spread on 18 ml of PDA
medium. Three 5.0 mm diameter mycelial plugs, cut randomly
from the margin of a 5 day-old colony, and a plug, containing only
2 ml LB agar as negative control, were placed on a medium on
which one of six fungi was spread. Each experiment was conducted
in triplicate and the experimental design was a CRD.
Eighteen of these Petri dishes were sealed with parafilm and
incubated at 27 C in darkness. The radial growth of mycelia (cm)
was measured in two perpendicular directions on each cultured
plate after 48 h of incubation, and the diameter (0.5 cm) of the
inoculation plug was subtracted. The resultant data were averaged.
The antifungal index was determined in comparison with
growth on non-amended medium, and calculated by the
following formula (Mu, 2000):
Antifungal index ð%Þ ¼ ½1 ðDa 0:5Þ=ðDb 0:5Þ 100
where Da is the diameter of the growth zone in the test plate, and
Db is the diameter of growth zone in the control plate.
At the same time, the effects of CHM1 on the growth and
configuration of fungal hyphae were observed under a microscope.
2.3. Control efficacy of CHM1 against rice sheath blight, southern
blight of maize and Rhizoctonia solani of horsebean under
greenhouse conditions
Maize seedlings (Liao No. 613) were cultivated under controllable
greenhouse conditions at a temperature of 20–25 C and
relative humidity of 80–90%. At the three leave stage, maize seedlings
were divided into three groups, each of which included thirty
seedlings. The conidiospores of Bipolaris maydis were collected and
diluted as 1 104 conidia ml1. A CHM1 culture solution
(1.6 107 cfu ml1) was obtained after incubation at 30 C,170 rpm
for 36 h, was diluted two fold (mixed with distilled water at 1:1 to
decrease the density to 8 106 cfu ml1) and then evenly sprayed
on the surface of maize leaves. After 6 h, the maize leaves were
inoculated by evenly spraying with the conidiospores of B. maydis.
The seedlings were first cultivated in the dark overnight at 24 C
and 98% relative humidity and then cultivated in a growth chamber
with 16-h-light and 8-h-darkness cycle at 24 C and 85% relative
humidity (Mu, 2000). Each treatment, in triplicate, was arranged in
a completely randomized block with 3 30 plants. Spraying with
diluted LB medium and conidiospores of B. maydis served as
a negative control, and spraying with distilled water served as
control. After pathogen challenge, the disease was observed every
2 days. Disease index and protection effect by CHM1 were visually
rated by assessing the percentage of leaf surface covered by disease
spots.
In another experiment, three fully expanded top leaves were
detached from a 7-week-old horsebean seedling (Juchan No. 2)
growing in the greenhouse. CHM1 culture, prepared as above, was
evenly sprayed on the surface of horsebean leaves. Then, horsebean
leaves were challenged by inoculating a 5 mm diameter disc
of R. solani mycelia. The leaves were placed on a filter paper,
wetted with sterile distilled water in a plastic Petri dish (150 mm
diameter). The Petri dish was placed in a growth chamber with
a 14-h-light and 10-h-darkness cycle at 26 C and 95% relative
humidity. Spraying with diluted LB medium and inoculating
mycelia of R. solani served as positive control, and spraying with
distilled water served as control. Each treatment, in triplicate, was
arranged in a completely randomized block with 3 30 horsebean
plants. After pathogen challenge, the disease was observed
every 2 days.
วิธีการแก้ปัญหาวัฒนธรรมของ CHM1 ได้ถูกจัดทำโดยการเขย่าเหลว LB
วัฒนธรรมวันที่ 30? C, 170 รอบต่อนาทีสำหรับ 36 ชั่วโมง มันถูกปั่นเพิ่มเติมได้ที่
6000 กรัมเป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสและใสเก็บรวบรวมและ
ส่งผ่านตัวกรอง 0.22 มมยอมกรองวัฒนธรรม CHM1
กรองวัฒนธรรมผ่านการฆ่าเชื้อได้จากการนึ่งฆ่าเชื้อผลลัพธ์
กรองวัฒนธรรมที่ 121 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที.
ผลกระทบในหลอดทดลองของ CHM1 ในการยับยั้งการเจริญเติบโตของเส้นใยของ
เชื้อสาเหตุโรคพืชได้รับการศึกษาตามวิธีการที่มีการรายงาน
โดย Leroux และคณะ (2002) สองมิลลิลิตรของสารละลาย CHM1 วัฒนธรรม
กรองหรือกรองวัฒนธรรมผ่านการฆ่าเชื้อกระจายอยู่ใน 18 มิลลิลิตร PDA
กลาง สาม 5.0 มมปลั๊กเส้นใยเส้นผ่าศูนย์กลางตัดสุ่ม
จากขอบของอาณานิคม 5 วันเก่าและปลั๊กที่มีเพียง
2 มิลลิลิตร LB agar การควบคุมเชิงลบถูกวางไว้บนกลางบน
ซึ่งหนึ่งในหกของเชื้อรากระจาย แต่ละการทดลองดำเนินการ
ในเพิ่มขึ้นสามเท่าและการออกแบบการทดลองเป็น CRD.
สิบแปดของเหล่านี้จานเลี้ยงเชื้อถูกปิดผนึกด้วย parafilm และ
บ่มที่อุณหภูมิ 27 องศาเซลเซียสในความมืด การเจริญเติบโตในแนวรัศมีจากเส้นใย (ซม.)
วัดในสองทิศทางตั้งฉากในแต่ละเลี้ยง
จานหลังจาก 48 ชั่วโมงของการบ่มและเส้นผ่าศูนย์กลาง (0.5 ซม.) ของ
ปลั๊กฉีดวัคซีนมาหักออก ข้อมูลผลถูกเฉลี่ย.
ดัชนีเชื้อราถูกกำหนดในการเปรียบเทียบกับ
การเจริญเติบโตในสื่อที่ไม่ได้แก้ไขเพิ่มเติมและคำนวณโดย
สูตรต่อไปนี้ (MU, 2000):
ดัชนีเชื้อรา% d Þ¼½1? DDA? 0: 5 = DDB? 0: 5? ? 100
ที่ดาเป็นเส้นผ่าศูนย์กลางของโซนการเจริญเติบโตในแผ่นทดสอบและ
Db คือเส้นผ่าศูนย์กลางของโซนการเจริญเติบโตในแผ่นควบคุม.
ในขณะเดียวกันผลกระทบของ CHM1 ในการเจริญเติบโตและ
การกำหนดค่าของเส้นใยเชื้อราถูกตั้งข้อสังเกตภายใต้กล้องจุลทรรศน์ .
2.3 ประสิทธิภาพการควบคุมการ CHM1 กับโรคกาบใบแห้งข้าวภาคใต้
ทำลายข้าวโพดและ Rhizoctonia solani ของ horsebean ภายใต้
เงื่อนไขเรือนกระจก
ต้นกล้าข้าวโพดเลี้ยงสัตว์ (ฉบับที่ 613 เหลียว) ได้รับการปลูกฝังภายใต้การควบคุม
สภาวะเรือนกระจกที่อุณหภูมิ 20-25 องศาเซลเซียสและ
ความชื้นสัมพัทธ์ 80 90% ในขั้นตอนการลาสามต้นกล้าข้าวโพด
ถูกแบ่งออกเป็นสามกลุ่มซึ่งแต่ละรวมสามสิบ
ต้นกล้า conidiospores ของ maydis Bipolaris ถูกเก็บรวบรวมและ
เจือจาง 1 104 มลสปอร์ 1 สารละลาย CHM1
(? 1.6 107 cfu มล 1) ที่ได้รับหลังจากการบ่มที่ 30 C, 170 รอบต่อนาที?
36 ชั่วโมงถูกเจือจางสองเท่า (ผสมกับน้ำกลั่นที่ 1: 1 ถึง
ลดความหนาแน่นถึง 8 106 cfu? มล? 1) และจากนั้นฉีดพ่นอย่างสม่ำเสมอ
บนพื้นผิวของใบข้าวโพด หลังจาก 6 ชั่วโมง, ใบข้าวโพดได้รับ
เชื้อโดยการฉีดพ่นอย่างเท่าเทียมกันกับ conidiospores ของบี maydis.
ต้นกล้าได้รับการปลูกฝังครั้งแรกในคืนมืดที่ 24 องศาเซลเซียส
และ 98% ความชื้นสัมพัทธ์และได้รับการปลูกฝังจากนั้นในห้องการเจริญเติบโต
กับ 16-H- แสงและรอบ 8-H-ความมืดที่ 24 องศาเซลเซียสและ 85% เมื่อเทียบ
ความชื้น (MU, 2000) การรักษาแต่ละคนในเพิ่มขึ้นสามเท่าได้รับการจัดให้อยู่ใน
บล็อกสุ่มสมบูรณ์ด้วย 3? 30 พืช การฉีดพ่นด้วย
เจือจางกลาง LB และ conidiospores ของบี maydis ทำหน้าที่เป็นผู้
ควบคุมเชิงลบและการฉีดพ่นด้วยน้ำกลั่นทำหน้าที่เป็นผู้
ควบคุม หลังจากการท้าทายเชื้อโรคโรคได้สังเกตทุก
2 วัน ดัชนีโรคและผลการป้องกันโดย CHM1 สายตาถูก
จัดอันดับโดยการประเมินร้อยละของผิวใบปกคลุมด้วยโรค
จุด.
ในการทดลองอีกสามขยายตัวได้เต็มที่ใบด้านบนถูก
ถอดออกจาก 7 สัปดาห์อายุต้นกล้า horsebean (Juchan ฉบับที่ 2)
ที่เพิ่มขึ้นใน เรือนกระจก วัฒนธรรม CHM1 เตรียมดังกล่าวได้รับการ
ฉีดพ่นอย่างสม่ำเสมอบนพื้นผิวของใบ horsebean จากนั้น horsebean
ใบถูกท้าทายโดยการฉีดวัคซีนแผ่นดิสก์ขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง 5 มม
จากเส้นใยเชื้อรา R. solani ใบถูกวางไว้บนกระดาษกรอง,
เปียกด้วยน้ำกลั่นปลอดเชื้อในจานเลี้ยงเชื้อพลาสติก (150 มิลลิเมตร
เส้นผ่าศูนย์กลาง) จานเลี้ยงเชื้อที่วางอยู่ในห้องที่มีการเจริญเติบโต
14 ชั่วโมงแสงและวงจร 10 ชั่วโมง-ความมืดที่อุณหภูมิ 26 องศาเซลเซียสและ 95% เมื่อเทียบ
ความชื้น การฉีดพ่นด้วยเจือจางกลาง LB และฉีดวัคซีน
เส้นใยของเชื้อรา R. solani ทำหน้าที่ควบคุมเป็นบวกและการฉีดพ่นด้วย
น้ำกลั่นทำหน้าที่เป็นผู้ควบคุม การรักษาแต่ละคนในเพิ่มขึ้นสามเท่าได้รับการ
จัดให้อยู่ในบล็อกสุ่มสมบูรณ์ด้วย 3? 30 horsebean
พืช หลังจากการท้าทายเชื้อโรคโรคได้สังเกต
ทุก 2 วัน
การแปล กรุณารอสักครู่..