Fluorescence in situ Hybridization

Fluorescence in situ Hybridization (FISH) involves the preparation of two main components: the DNA probe and the target DNA to which the probe will be hybridized. The DNA probe typically comes from cloned sources such as plasmids, cosmids, PACs, YACs, or BACs; where the insert may contain a specific gene or originate from a specific chromosomal locus. Whole-chromosome paints may also be used but are usually applicable to metaphase preparations. The purified DNA can then be labeled and detected indirectly using haptens, or labeled directly using fluorochrome or dye-conjugated nucleotides. Labeling strategies are also variable, employing standard nick translation or PCR labeling methods. The target DNA can take the form of chromosomes spreads or interphase nuclei. The sources of interphase targets may come from cytogenetic preparations or from paraffin-embedded tissues. Both the labeled DNA probe and DNA target are denatured to a single-stranded state and permitted to hybridize to each other. Post-hybridization washes and fluorescently-labeled antibody incubations follow the 24-hour hybridization, and the specimen is ready for visualization by fluorescent microscopy. Successful interpretation of FISH experiments is dependent on the quality of the starting materials, hybridization efficiencies, and stringency of post-hybridization washes and antibody detections

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เรืองแสงเสถียร Hybridization (ปลา) เกี่ยวข้องกับการเตรียมคอมโพเนนต์หลักที่สอง: โพรบดีเอ็นเอและดีเอ็นเอเป้าหมายที่โพรบจะไฮบริด โดยทั่วไปโพรบดีเอ็นเอมาจากแหล่งโคลนเช่น plasmids, cosmids, PACs, YACs หรือ BACs ซึ่งการแทรกอาจประกอบด้วยยีนเฉพาะเจาะจง หรือมาจากทีของโครโมโซมเฉพาะเจาะจง สีโครโมโซมทั้งหมดอาจจะใช้ แต่มักจะใช้กับการเตรียม metaphase ดีเอ็นเอบริสุทธิ์แล้วจะมีป้ายชื่อ และตรวจพบโดยทางอ้อมโดยใช้ haptens หรือมีป้ายชื่อโดยตรงโดยใช้ fluorochrome หรือนิวคลีโอไทด์ที่ผันย้อม กลยุทธ์การติดฉลากยังมีตัวแปร จ้างแปลมาตรฐานนิคหรือฉลากวิธี PCR ดีเอ็นเอเป้าหมายสามารถมีรูปแบบโครโมโซมกระจาย หรือรูปนิวเคลียส แหล่งมาของเป้าหมายรูปอาจมา จากการเตรียม cytogenetic หรือ จากเนื้อเยื่อที่ฝังตัวพาราฟิน ทั้งป้ายพันธุกรรมและดีเอ็นเอเป้าหมายมีเอทิลแอลกอฮอล์ไปเป็นสถานะเดียวที่ควั่น และอนุญาตให้อย่างยิ่งกับแต่ละอื่น ๆ Hybridization หลังล้างและแอนติบอดีที่ชื่อ fluorescently incubations ตาม hybridization 24 ชั่วโมง และชิ้นงานพร้อมสำหรับการแสดงโดยกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์ ตีความสำเร็จของการทดลองปลาจะขึ้นกับคุณภาพของการเริ่มต้นวัสดุ hybridization ประสิทธิภาพ และ stringency hybridization หลังล้างและตรวจหาแอนติบอดี

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เรืองแสงในแหล่งกำเนิดพันธุ์ (FISH) ที่เกี่ยวข้องกับการเตรียมความพร้อมของทั้งสององค์ประกอบหลัก: การวัดและดีเอ็นเอดีเอ็นเอเป้าหมายที่การสอบสวนจะถูกไฮบริด สอบสวนดีเอ็นเอมักจะมาจากแหล่งโคลนเช่นพลาสมิด, cosmids, PACs, YACs หรือ BACS; ที่ใส่อาจมียีนที่เฉพาะเจาะจงหรือมาจากทางเดินของโครโมโซมที่เฉพาะเจาะจง สีทั้งโครโมโซมอาจจะใช้ แต่มักจะใช้บังคับกับการเตรียมการ metaphase ดีเอ็นเอบริสุทธิ์แล้วจะมีป้ายและตรวจพบทางอ้อมโดยใช้ haptens หรือป้ายกำกับโดยตรงโดยใช้นิวคลีโอของสารเรืองแสงหรือสีย้อมผัน กลยุทธ์การติดฉลากนี้ยังมีตัวแปรจ้างมาตรฐาน Nick แปลหรือวิธีการติดฉลาก PCR ดีเอ็นเอเป้าหมายสามารถใช้รูปแบบของการกระจายโครโมโซมหรือนิวเคลียสอินเตอร์ แหล่งที่มาของเป้าหมายอินเตอร์อาจมาจากการเตรียมการทาง cytogenetic หรือจากเนื้อเยื่อพาราฟินฝังตัว ทั้งที่มีป้ายกำกับสอบสวนดีเอ็นเอและเป้าหมายดีเอ็นเอเอทิลแอลกอฮอล์ไปยังรัฐเดียวควั่นและได้รับอนุญาตให้ผสมพันธุ์กับแต่ละอื่น ๆ ล้างการโพสต์การผสมพันธุ์และ flu​​orescently ป้ายฟักตัวของเชื้อแอนติบอดีตามผสมพันธุ์ตลอด 24 ชั่วโมงและชิ้นงานที่มีความพร้อมสำหรับการแสดงโดยใช้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง การตีความที่ประสบความสำเร็จจากการทดลองปลาจะขึ้นอยู่กับคุณภาพของวัสดุเริ่มต้นประสิทธิภาพการผสมพันธุ์และความเข้มงวดของการล้างหลังการผสมพันธุ์และการตรวจพบแอนติบอดี

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เรืองแสงใน situ hybridization ( FISH ) เกี่ยวข้องกับการเตรียมสององค์ประกอบหลัก : DNA probe และดีเอ็นเอเป้าหมายที่การสอบสวนจะสามารถ . ดีเอ็นเอโคลนมักจะมาจากแหล่งข้อมูลต่างๆ เช่น เพื่อคอสมิด PACS yacs , หรือ bacs ; ที่ใส่อาจประกอบด้วยยีนที่เฉพาะเจาะจงหรือมาจากเฉพาะของตน . สีโครโมโซมทั้งหมดอาจจะมีการใช้ แต่มักจะใช้กับการเตรียมโครโมโซม . ดีเอ็นเอบริสุทธิ์ก็สามารถติดป้ายชื่อ และตรวจพบโดยทางอ้อมโดยใช้ haptens หรือข้อความได้โดยตรงโดยใช้ฟลู โรโครมหรือสีและขนาด . การติดฉลากกลยุทธ์ยังมีตัวแปร โดยใช้มาตรฐานการแปล นิค หรือ การติดฉลากโดยวิธี ดีเอ็นเอเป้าหมายสามารถใช้รูปแบบของโครโมโซมแพร่กระจายหรืออินเตอร์เฟสของ . แหล่งที่มาของอินเตอร์เฟสเป้าหมายอาจมาจากการการเตรียมหรือเนื้อเยื่อจากพาราฟินฝังตัว ทั้งป้ายและใช้ดีเอ็นเอตัวตรวจดีเอ็นเอเป้าหมายจะติดสถานะการเดียว และอนุญาตให้ผสมกับแต่ละอื่น ๆ โพสต์ ( ถล่ม และ fluorescently ติดป้ายแอนติบอดี incubations ตามนาน 24 ชั่วโมง และตัวอย่างพร้อมสำหรับการแสดงโดยกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์ . ตีความสำเร็จ การทดลองของปลา ขึ้นอยู่กับคุณภาพของวัสดุเริ่มต้น hybridization มีประสิทธิภาพและ stringency โพสต์และแอนติบอดีตรวจจับสารชำระล้าง