2.6. Melanogenesis Assay on Human a

2.6. Melanogenesis Assay on Human and Mouse Melanocytes
B16 cells (CRL-6323™; American Type Culture Collection (ATCC), Manassas, VA) and A375 cells (CRL-
1619™, ATCC) were purchased from ATCC and cultured according to the recommendations provided. B16 and
A375 cells were cultured in Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM) supplemented with 10% fetal bovine
albumin and Penicillin-Streptomycin (100 U/mL). Cells were sub-cultured every alternate day.
For melanogenesis assay, two hundred thousands of B16 cells and A375 cells were seeded onto each well of
6-well culture plates and incubated for 2 days, or 4 days, with or without the extracts of EBN, respectively. Five
mM of vitamin C, 50 μM of tBHQ and 2% kojic acid served as positive controls. For A375 cells, α-MSH was
added on day 2 as to stimulate the formation of melanin. To extract melanin from cells, the samples were dissolved
in 100 mL of 1 M NaOH after washing twice with PBS. Samples were incubated at 60˚C for 1 hour and
mixed to solubilize the melanin. The optical density of mixed solution was detected at 405 nm, and the absorbance
was converted to melanin concentration by a standard curve.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6 การ Melanogenesis ทดสอบในมนุษย์และเมาส์ Melanocytesเซลล์ B16 (CRL-6323 ™ คอลเลกชันอเมริกันประเภทวัฒนธรรม (ATCC) มานาสซาส VA) และเซลล์ A375 (CRL-1619 ™ ATCC) ซื้อจาก ATCC และเพาะเลี้ยงตามคำแนะนำที่ให้ไว้ B16 และA375 เซลล์เพาะเลี้ยงในของ Dulbecco ปรับเปลี่ยนนกอินทรีขนาดกลาง (DMEM) เสริม ด้วย 10% ทารกวัวalbumin และ Streptomycin ยาเพนนิซิลลิน (100 U/mL) เซลล์ถูกย่อยอ่างวันเว้นวันสำหรับทดสอบ melanogenesis สองร้อยพันเซลล์ B16 และเซลล์ A375 ที่เตรียมลงบนแต่ละอย่างของวัฒนธรรมดี 6 แผ่น และได้รับการกกสำหรับ 2 วัน 4 วัน มี หรือไม่ มีสารสกัดของ EBN ตามลำดับ ห้ามม.ของวิตามินซี 50 μ m tBHQ และแอซิด 2% หน้าที่เป็นตัวควบคุมบวก สำหรับเซลล์ A375 α-MSH ถูกเพิ่มในวันที่ 2 เพื่อกระตุ้นการก่อตัวของเมลานิน การแยกเมลานินจากเซลล์ ที่มีการละลายน้ำตัวอย่างใน 100 มิลลิลิตรของ 1 M NaOH หลังจากล้างด้วย PBS ครั้ง ตัวอย่างได้รับการกกที่ 60˚C 1 ชั่วโมง และsolubilize เมลานินการผสมแบบ ตรวจพบความหนาแน่นออปติคัลของผสมที่ 405 nm และ absorbance ที่ถูกแปลงเป็นความเข้มข้นของเมลานิน โดยเส้นโค้งมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 Melanogenesis Assay มนุษย์และเมาส์ Melanocytes
B16 เซลล์ (CRL-6323 ™; อเมริกันประเภทวัฒนธรรมสะสม (ATCC) ซาส, VA) และเซลล์ A375 (CRL-
1619 ™, ATCC) ที่ซื้อมาจาก ATCC และเพาะเลี้ยงตามคำแนะนำที่ให้ไว้ B16 และ
A375 เซลล์เพาะเลี้ยงใน Dulbecco ของ Modified อินทรีปานกลาง (DMEM) เสริมด้วย 10% ของทารกในครรภ์วัว
อัลบูมิและ Penicillin-นี้ streptomycin (100 U / มิลลิลิตร) เซลล์ย่อยเลี้ยงทุกวันสลับ.
สำหรับ Melanogenesis ทดสอบสองร้อยพันของ B16 และเซลล์ A375 เมล็ดบนดีของแต่ละ
แผ่นวัฒนธรรม 6 ดีและบ่มเป็นเวลา 2 วันหรือ 4 วัน, มีหรือไม่มีสารสกัดจาก EBN ตามลำดับ ห้า
มิลลิเมตรวิตามิน C, 50 ไมครอนของ TBHQ และ 2% กรดโคจิกทำหน้าที่เป็นตัวควบคุมในเชิงบวก สำหรับเซลล์ A375, α-MSH ถูก
เพิ่มในวันที่ 2 ที่จะกระตุ้นให้เกิดการก่อตัวของเมลานิน เพื่อสกัดจากเซลล์เมลานินตัวอย่างที่ถูกละลาย
ใน 100 มล 1 เมตร NaOH หลังจากล้างครั้งที่สองกับพีบีเอส ตัวอย่างที่ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 60C เป็นเวลา 1 ชั่วโมงและ
ผสมเพื่อละลายเมลานิน ความหนาแน่นของการแก้ปัญหาแสงผสมถูกตรวจพบที่ 405 นาโนเมตรและดูดกลืนแสง
ที่ถูกดัดแปลงเพื่อความเข้มข้นของเมลานินโดยโค้งมาตรฐาน